微柱凝胶技术与凝聚胺技术对ABO 新生儿溶血病输血前检验的价值分析

王新利

（辉县市人民医院输血科，河南 新乡 453600）

新生儿溶血病（HDN）主要是因母婴血型不合，母体的ⅠgG 抗体可经胎盘进入到胎儿体内，破坏胎儿红细胞，诱发免疫性反应而发生溶血，可致患儿出现多种异常情况，如贫血、高胆红素血症、溶血、黄疸等，严重时可引起流产、死胎、死产等[1]。ABO-HDN 是HDN 常见类型之一，其患儿血型多为B 型或A 型，母亲血型为O 型，且患儿体内存在母亲抗体，无法根据常规方式实施同型输血，防止溶血反应加重[2]。故，输血前新生儿血型进行准确检验对保障输血安全具有积极意义。临床常用血清游离抗体试验、红细胞抗体释放试验、抗人球蛋白试验鉴别HDN，其中血清游离抗体试验检测新生儿血清内有无过度抗体未结合到红细胞；抗人球蛋白试验可检测新生儿红细胞有无受外在抗体致敏的影响，两者均是辅助诊断方式[3]。红细胞抗体释放试验是对HDN 最有价值的诊断方式，可检测释放液与酶处理后新生儿红细胞上ABO 血型ⅠgG 抗体。但传统方式是利用试管法实施检测，需对患儿血液样本中红细胞反复清洗，操作步骤相对繁琐，且检查结果易受人为因素影响，降低诊断准确性，且具有用时长、重复性不好等缺陷，临床应用受到一定局限性[4]。

因此，本研究分析微柱凝胶技术MGT 与凝聚胺技术在ABO-HDN 输血前检验中应用效果，为临床诊治提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择48 例疑似ABO-HDN 患儿为研究对象，于2021 年3 月至2023 年2 月就诊于本院。本研究经医学伦理委员会审核通过。45 例患儿日龄1～5d，平均（2.35±0.44）d；男25 例，女20 例；出生体质量2.41～3.62kg，平均（3.10±0.21）kg。纳入标准：主要症状为黄疸或黄疸进行性加重；母体血型为O 型；间接胆红素水平增高；血常规检查显示网织红细胞增高、有核红细胞增多、血红蛋白降低；患儿家长签署知情同意书。排除标准：家族心脏病史；先天性心脏病；畸形儿；临床资料不完整者。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂与仪器

北京荣兴光恒科技有限公司生产的奥林巴斯显微镜；长春博研科学仪器有限责任公司生产的血型血清学用离心机，金坛区西城新瑞仪器厂生产的金坛电子恒温水浴箱；长春博研科学仪器有限责任公司生产的免疫微柱孵育器（FYQ 型）。Diagnostic Grifols S.A.提供的抗人球蛋白卡；上海血液生物医药有限责任公司生产的ABO 血型反定型试剂盒；上海润普生物技术有限公司生产的凝聚胺检测试剂盒。

1.2.2 实验方法

采集入组患儿血样，离心10 min，离心半径为13.5 cm，转速2000 rpm。分离血清与红细胞，红细胞用0.9%氯化钠注射液洗涤，配置红细胞悬液，浓度为3%，将0.9%氯化钠注射液1 mL 加入1 mL 的红细胞悬液内，水浴7 min（56℃），离心取上清液，作为放散液备用。

（1）MGT

用微柱凝胶试剂卡标记患儿血液标本，将血液标本置于凝胶试管内，离心，对其有无凝聚反应进行观察。若在凝胶底部则评定为阴性，若凝胶上层或中间分散则评定为阳性。

（2）凝聚胺技术

取1 支试管，将红细胞放散液或1 滴配型红细胞悬液、0.7mL 低离子介质、2 滴血清置入，混合均匀，加入2 滴凝聚胺溶液，离心弃上清液，摇匀试管，查看是否有凝集现象。若无凝集发生则重复上述操作，有凝集发生后，将2 滴混合重悬液加入，，若有凝集反应则评定为配血不合，反之则评定为配血合。每例患儿实施交叉配血试验3～6 次，以确保研究的准确性，共实施了258 次。

1.3 观察指标

（1）对比放散液MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果；（2）比较血清MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果；（3）分析放散液、血清MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果的一致性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 诊断结果

48 例患儿均确证为ABO-HDN，其中血清游离抗体试验检测阳性率为81.25%（39/48）、红细胞抗体释放试验检测阳性率为100.00%（48/48）、改良抗人球蛋白试验检测阳性率为 50.00%（24/48）。见表1。

表1 三项血清试验诊断结果（n）

2.2 放散液MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果对比

放散液MGT 共检出阳性108 次（41.86%），放散液凝聚胺技术共检出阳性24 例（9.30%）。见表2。放散液MGT 阳性检出率较放散液凝聚胺技术高，差异有统计学意义（χ2=71.830，P=0.000）。经kappa检验显示，放散液MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果一致性较差（kappa=0.249，P=0.000）。

表2 放散液MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果（n）

2.3 血清MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果对比

血清MGT 共检出阳性118 次（45.74%），血清凝聚胺技术共检出阳性21 例（8.14%）。见表3。血清MGT 阳性检出率较血清凝聚胺技术高，差异有统计学意义（χ2=92.648，P=0.000）。经kappa检验显示，血清MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果一致性较差（kappa值=190，P=0.000）。

表3 血清MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果（n）

3 讨论

HDN 发病机制是胎儿阶段从父亲基因方面遗传了母体不存在的抗原，当母体抗体经胎盘进入胎儿体内后，抗原与抗体难以相互容纳，进而发生免疫作用，损伤红细胞，可致患儿出现贫血、水肿、黄疸等，严重时可致患儿死亡[5]。HDN 患儿体内含有母源溶血性ⅠgG 抗体，部分抗体可经分解进入血液，其余部分会在红细胞表面附着，寻找时机与红细胞相结合[6]。

临床常用血清游离抗体试验、红细胞抗体释放试验、抗人球蛋白试验鉴别HDN。但传统方式是利用试管法实施检测，需对患儿血液样本中红细胞反复清洗，操作步骤相对繁琐，且检查结果易受人为因素影响，降低诊断准确性，且具有用时长、重复性不好等缺陷，临床应用受到一定局限性[6,7]。

输血前须对患儿行交叉配血试验，其包含游离血清、红细胞放散液，放散液检测能够反映结合在细胞上的溶血性抗体与输注红细胞间的不相容性，血清检测可反映输注红细胞与患儿血液内溶血性抗体的不相容性[6,7]。本研究中，放散液、血清MGT 阳性检出率较凝聚胺技术高，放散液、血清MGT 与凝聚胺技术交叉配血结果一致性较差，提示ABO-HDN 输血前采用MGT 检测准确性高于凝聚胺技术。凝聚胺技术检验的主要原理是凝聚胺自身带正电荷，能够经结合红细胞，减少红细胞表面电荷数，导致红细胞发生非特异性凝聚，加入枸橼酸钠葡糖糖溶液再悬时，可有效中和凝聚胺的正电荷，促使非特性凝集红细胞重新散开，但特异性的抗原抗体凝集散开难度较大，进而判断有无抗原存在[7]。凝聚胺技术检验具有用时短、操作简单等优点，但对结果评定相对严格，抗体浓度较低时易有假阴性出现，易发生漏检，诊断敏感度较低。MGT 检验原理是将符合血清学标准的稀释液制作呈凝胶，用微管柱灌注对红细胞凝胶颗粒分子进行过滤，保留聚集的红细胞，明确凝聚反应结果[8]。MGT 检验具有标本少、特异性强、敏感度高、结果可直观观察、重复性好、结果稳定等优点，同时其无需使用显微镜，离心后沉于凝胶底部为阳性，在凝胶上层或中间分散即为阳性。但MGT 难以识别红细胞上的不完全抗体，且检验操作时间相对较长，不适用于急性患儿群体。

综上所述，ABO-HDN 输血前采用MGT 检测准确性高于凝聚胺技术，但MGT 检测存在不足，无法完全替代凝聚胺技术，临床可结合患儿生理特征与血清免疫学特点，灵活选择多种方式联合诊断筛查抗原抗体，提高输血安全性。