芪麦降糖丸质量标准研究

2023-09-11余洁真蔡杏粧张楠涛郑璇杏苏洁

品牌与标准化 2023年5期

余洁真蔡杏粧张楠涛郑璇杏苏洁

【摘要】目的：提升芪麦降糖丸的质量标准。方法：选用薄层色谱（TLC）法对芪麦降糖丸中的黄芪进行定性鉴别；选用高效液相色谱（HPLC）法对制剂中葛根素及芍药苷的含量进行测定，Agilent ZORBAX SB-C18柱（5μm，4.6 mm×250 mm）为色谱柱，甲醇-0.1%磷酸水溶液（21∶79）为流动相，流速为1.0 mL/min，柱温为40℃，葛根素跟芍药苷各自的检测波长为250 nm跟230 nm。结果：黄芪薄层色谱特征斑点明显，与杂质斑点分离好，阴性样品没有干扰。葛根素进样量在0.1583μg～0.5540μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（R2=1.00）；芍药苷进样量在0.2064μg～0.7224μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（R2=1.00）。结论：该方法操作简单，能准确地鉴别黄芪，并快速地测定葛根素和芍药苷的含量，能为评价制剂的质量提供参考。

【关键词】芪麦降糖丸；薄层色谱法；黄芪；高效液相色谱法；葛根素；芍药苷

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.05.032

【基金项目】广东省潮州市科技计划项目（2021ZC41）。

Study on Quality Standard of Qimai Jiangtang Pills

YU Jiezhen， CAI Xingzhuang， ZHANG Nantao， ZHENG Xuanxing ，SU Jie

（Chaozhou Institute for Drug Control， Chaozhou 521000，China）

Abstract： Objective： To improve the quality standards of Qimai Jiangtang Pills. Method： Thin layer chromatography （TLC） was used to qualitatively identify Huangqi in Qimai Jiangtang pills； High performance liquid chromatography （HPLC） was used to determine the contents of Puerarin and paeoniflorin in the preparation. Agilent ZORBAX SB-C18 column （5μm，4.6 mm×250 mm） as the chromatographic column， methanol 0.1% phosphoric acid aqueous solution （21∶79） as the mobile phase， the flow rate is 1.0 mL/min， the column temperature is 40℃， and the detection wavelengths of Puerarin and paeoniflorin are 250 nm and 230 nm respectively. Result： The characteristic spots of Astragalus membranaceus thin layer chromatography are obvious， well separated from impurity spots， and there is no interference in the negative sample. The injection amount of Puerarin is 0.1583μg～0.5540μg There is a good linear relationship with peak area within the range of g （R2=1.00）； The injection amount of paeoniflorin is 0.2064μg～0.7224μg There is a good linear relationship with peak area within the range of g （R2=1.00）. Conclusion： The method is simple， can accurately identify Astragalus， and quickly determine the contents of Puerarin and paeoniflorin， which can provide a reference for evaluating the quality of preparations.

Key words： Qimai Jiangtang Pills； thin-layer chromatography； astragalus membranaceus； high-performance liquid chromatography； puerarin； paeoniflorin

芪麥降糖丸是潮州市中医医院名老中医治疗糖尿病的专科验方，由黄芪、麦冬、粉葛、白芍等十三味中药通过现代药物制剂技术制成。其主要功效是补气健脾，运津消渴。经过多年的临床验证，芪麦降糖丸在治疗气阴两亏型的糖尿病患者上有着显著的疗效。原有标准比较落后，未能达到医院制剂质量控制的目的，应对其标准进行提升。本研究中增加君药黄芪的薄层色谱鉴别，建立双波长同时测定主要臣药粉葛，白芍中葛根素及芍药苷的高效液相色谱法，作为芪麦降糖丸的质量控制标准，以提高制剂质量的安全性和可控性。

1仪器与试药

1.1仪器

LC Series 1260 InfinityⅡ高效液相色谱仪（美国Agilent）；XSR204电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；SQP电子天平（德国Sedolis）；KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；HWS-26电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）；DHC-9030电热鼓风烘干箱（一恒公司）。

1.2试药

芪麦降糖丸（潮州市中医医院，批号分别为20201101，20201102，20201103）；黄芪甲苷对照品（中检院，批号：110781-202118，含量：96.8%）；葛根素对照品（中检院，批号：110752-201816，含量：95.4%）；芍药苷对照品（中检院，批号：110736-202145，含量：100%）；甲醇（色谱醇），正丁醇，乙醇，氨水，磷酸（分析醇），超纯水。

2方法与结果

2.1黄芪薄层色谱鉴别

取样品细粉约15 g，放三角烧瓶中，用量杯加甲醇50 mL，在功率500 W，频率50 kHz下水浴超声处理50分钟，冷却过滤，取连续滤液25 mL，水浴蒸干，残渣溶于水20 mL，用水饱和的正丁醇振摇提取（25 mL，总共4次），合并正丁醇溶液，用氨试液（30 mL）清洗3遍，弃去氨液，再用水40 mL清洗1遍，弃去水液，正丁醇液蒸干，用无水甲醇2 mL溶解残渣，用作供试品溶液。天平称取黄芪甲苷对照品，用无水甲醇制成对照品溶液（1 mg/mL）。取缺黄芪的阴性试样细粉15 g左右，按供试品溶液一样方法制备阴性对照溶液。精密吸取上述供试品溶液跟阴性对照溶液各10μL，对照品溶液5μL，相继点于同一块硅胶G薄层板上，展开剂是二氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水（1∶1∶2∶0.5）的下层溶液，展开，取出，挥干，10%硫酸乙醇溶液显色，然后在105℃的烤箱加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365 nm）下观察。供试品色谱中，日光及紫外光（365 nm）下都有跟对照品一样的斑点，阴性对照对其没有干扰。薄层色谱图见图1。

2.2葛根素和芍药苷含量测定

2.2.1色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18柱（5μm，4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸水溶液（21∶79）；流速：1.0 mL/ min；柱温：40℃；检测波长：葛根素250 nm，芍药苷230 nm；进样量：10μL。

2.2.2溶液的制备

供试品溶液：取样品，粉碎，在三角瓶中，精密称取5 g的粉末，用移液管精密加入浓度为30%的乙醇溶液50 mL，盖上瓶塞，记录重量，超声处理（功率160 W，频率40 kHz）20 min，放至室温，再记录重量，不足的重量用30%的乙醇溶液补足，振摇均匀，用定量滤纸滤过，即得。

对照品混合溶液：取葛根素跟芍药苷对照品，精密称定为10.37 mg，12.90 mg，放在同一个250 mL的量瓶中，用30%乙醇溶解并制成每毫升含葛根素0.03957 mg和芍药苷0.05160 mg的混合溶液。

阴性对照溶液：分别取缺粉葛和缺白芍的阴性样品粉末5 g，按供试品溶液同样的制备方法分别配置缺粉葛阴性对照溶液及缺白芍阴性对照溶液。

2.2.3方法学考察

系统专属性实验。取2.2.2溶液制备项下的3种溶液各10μL，按2.2.1的色谱方法依次进样，记录对应液相图。最终供试品溶液液相图中，葛根素及芍药苷峰的出峰时间与对照品一致，而阴性对照试样无相应的吸收峰出现。葛根素峰跟芍药苷峰的理论板数均大于8000。色谱图见图2。

线性关系考察。取混合对照品溶液，按上述的色谱方法依次进样测定，进样量为4、6、8、10、12、14μL，分别以葛根素对照品的进样量和芍药苷对照品进样量为各自的横坐标，相对应的峰面积为縱坐标，绘制标准曲线，得葛根素回归方程y= 4385.64x+1.90（R2=1.00）；芍药苷回归方程y=1022.44x-4.68（R2=1.00）。结果可见，葛根素在0.1583μg～0.5540μg范围内，芍药苷在0.2064μg～0.7224μg范围内线性关系良好。见图3。

精密度实验。取2.2.2项下的混合对照试液，按2.2.1的色谱条件，接连进样6次。葛根素和芍药苷对照品峰面积的RSD分别为0.09%和0.27%，表明仪器性能良好。

稳定性实验。取同一批次（批号为20201101）样品，按2.2.2项下方法配置供试品溶液，分别于常温下置放0、2、4、8、15、24小时，按2.2.1项下色谱条件检测。葛根素和芍药苷峰面积的RSD为0.55%和0.60%，证明一天内样品稳定性良好。

重复性实验。按2.2.2项下方法，称取批号为20201101的样品6份，平行配置样品溶液6份，按其色谱条件测定，记录峰面积，并计算含量。最终葛根素的平均含量为0.299 mg/g，RSD为0.85%，芍药苷的平均含量为0.385 mg/g，RSD为0.78%，说明此方法重复性良好。

加样回收试验。取已知含量的同一批号（批号为20201101）样品细粉2.5 g，精密称定，共6份，精密加入葛根素及芍药苷混合对照品溶液（浓度为葛根素0.019786 mg/mL，芍药苷0.02580 mg/mL）50 mL，按2.2.2项下供试品制备方法，平行配置加样供试品溶液6份，按2.2.1项下色谱条件检测，计算芍药苷葛根素回收率。结果见表1。

2.2.4样品含量测定

取3个不同批次（批号分别为20201101，20201102，20201103）样品，按2.2.2项下供试品制备方法制备供试品溶液，按2.2.1项下色谱条件测定，并计算葛根素及芍药苷含量。结果见表2。

3讨论

3.1薄层色谱条件的选择

按照《中华人民共和国药典》2020年版方法进行鉴别时，供试品溶液的提取效果不好，斑点不清晰，与其余杂质斑点的分离效果也不好，于是1）选用甲醇超声提取，饱和正丁醇溶液进行萃取，再用氨试液和水进行洗涤，除去杂质成分，增强黄芪甲苷的提取效果。2）将展开剂改为二氯甲烷-甲醇-乙酸乙酯-水（1∶1∶2∶0.5）的下层溶液，提高黄芪甲苷主斑点与其他杂质斑点的分离效果，同时也避免使用三氯甲烷高毒性試剂。结果色谱背景干扰小，斑点清晰，阴性样品无干扰。

3.2液相色谱条件的选择

1）色谱条件的选择

考察了Agilent，岛津，太玮三个厂家的色谱柱，Agilent ZORBAX SB-C18柱（5μm，4.6 mm×250 mm）的分离效果最好，峰型最对称。通过试验发现，以甲醇-0.1%磷酸溶液（21∶79）为流动相时，色谱峰峰型最好，响应值高，分离度也好，所以选用甲醇-0.1%磷酸溶液（21∶79）为流动相。同时采用PDA进行全波长扫描，葛根素和芍药苷分别在250 nm及230 nm处有最大吸收，故选这两个检测波长。

2）溶剂的选择

通过对不同浓度的甲醇、乙醇提取效果比较，用30%乙醇提取时提取最完全，因此选取30%乙醇作为溶剂。

3）提取方法的选择

试验了超声处理和加热回流两种提取方法，两种提取方法对葛根素和芍药苷的含量影响不大，考虑提取效果和操作的方便性，最终采用超声提取；对不同超声波处理时间进行对比，实验结果表明超声处理20 min时已提取完全，故选择超声处理20 min作为供试品溶液的提取方法。

3.3方法评价

以上试验结果表明，本研究中所建立的方法操作简便、准确、重现性好，可用于芪麦降糖丸质量控制指标，更全面地提高制剂质量的安全性和可控性，同时也为修订质量标准提供了依据。

【参考文献】

[1]李博，耿刚.黄芪的化学成分与药理作用研究进展[J].中西医结合研究，2022，14（4）：262-264.

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[5]丁家昱，韩宪忠，番正，等.高效液相色谱法测定复方香芍口服液中芍药苷含量[J].中国药业，2022，31（19）：74-76.