重症肌无力患者免疫学指标和血清细胞因子的检测及临床意义

韩金玲 陈燕婷 陈恩悦 叶秀娟

重症肌无力（myasthenia gravis，MG）是一种由神经-肌肉接头处传递功能障碍所引起自身免疫疾病，主要症状为骨骼肌收缩无力，以波动性肌无力、易疲劳为主要表现，常见的首发症状为上睑下垂以及双眼复视等，面部肌肉及咽喉受累时，可导致语言障碍和吞咽困难等［1］。目前关于重症肌无力发生的始动因素仍未明确，临床主要认为是由于患者的多种特异性免疫系统异常、细胞因子表达失衡及淋巴细胞亚群比例的失调所引起［2］。白细胞介素-6（interleukin 6，IL-6）是一种多肽物质，具有多种生物活性，其在调节免疫球蛋白的合成中发挥重要作用，其可通过促进B 淋巴细胞分化成浆细胞产生引起患者发生重症肌无力的乙酰胆碱受体抗体（acetylcholine receptor antibodies，AChR-Ab）［3］。同时，重症肌无力的发生也和T 细胞功能密切相关，T 淋巴细胞分为辅助性T 细胞和抑制性T 细胞亚群，两个亚群之间相互诱导与相互制约形成的T 细胞网络，影响着重症肌无力的发生和转归［4］。CD4+、CD8+、CD4+/CD8+均为反映机体细胞免疫功能状态的主要指标［5］，CD8+具有抑制B 细胞生成抗体及降低T 细胞活性等作用，CD3+、CD4+均参与着T 细胞抗原识别和信号传递过程，CD4+与CD8+则是互相诱导和互相制约的关系，在免疫应答和自身稳态中发挥着重要作用［6］。本研究拟探究重症肌无力患者免疫学指标（CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+）和血清细胞因子（IL-6）的检测及临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2017 年6 月到2022 年6 月华中科技大学协和深圳医院收治的92 例重症肌无力患者作为研究观察组，另选取同期有进行免疫学指标和血清细胞因子检测的健康体检者100 名作为对照组。纳入标准：①符合《中国重症肌无力诊断和治疗指南（2015 年版）》［7］中的重症肌无力诊断标准，首次发作或稳定后复发的患者；②年龄大于等于18 岁的患者；③临床相关资料及检测资料完整的患者；④患者及家属均知情同意。排除标准：①有严重代谢疾病或者其他免疫性疾病的患者。②伴有全身血液系统疾病、恶性肿瘤及凝血功能障碍等疾病的患者。③近3 个月，有使用免疫制剂进行治疗的患者；④怀孕或哺乳期的患者。观察组92 例，男44 例，女48 例，平均年龄（47.9±10.73）岁；对照组100 名，男42 例，女58 例，平均年龄（50.68±12.04）岁。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究通过华中科技大学协和深圳医院医学伦理委员会审批。

1.2 检测方法

1.2.1 免疫学指标检测

患者于入院次日空腹状态下、健康体检者则在体检当日空腹状态下采集外周静脉血3 mL 置于乙二胺四乙酸（ethylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝试管中，采用流式细胞仪及配套试剂盒（型号：FC 500，厂家：美国贝克曼库尔特公司）检测样品的免疫指标水平，采用流式细胞术检测样本CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平。

1.2.2 血清IL-6 检测

同样采集患者入院次日空腹状态下、健康体检者则在体检当日空腹状态下外周静脉血3 mL置于促凝剂管中，在离心处理（转速3 000 r/min，离心15 min，离心半径10 cm）后，取上清液，采用酶联免疫吸附方法检测血清IL-6 水平，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。

1.3 病情评估标准［8］

采用重症肌无力定量（quantitative myasthenia gravis，QMGs）评分［8］对重症肌无力患者的病情程度进行评估，评分表主要包含复视、上睑下垂、面肌、吞咽情况、构音情况、颈肌、双侧臂力、肺活量、双侧握力和双侧腿肌一共13 个条目，每个条目得分为0～3分，总分为39分，得分越高则患者的症状越严重。

1.4 统计学方法

采用统计学软件SPSS 22.0 对数据进行处理，计量资料采用（±s）表示，行t检验；计数资料采用n（%）表示，行χ2检验。采用Pearson 相关分析分析免疫学指标和血清细胞因子与QMGS 评分的相关性。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组的免疫学指标和血清细胞因子水平比较

观察组的CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；观察组的IL-6 水平明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 观察组和对照组的免疫学指标和血清细胞因子水平比较（±s）Table 1 Comparison of immunological indexes and serum cytokine levels between the observation group and the control group（±s）

表1 观察组和对照组的免疫学指标和血清细胞因子水平比较（±s）Table 1 Comparison of immunological indexes and serum cytokine levels between the observation group and the control group（±s）

2.2 不同病情的患者免疫学指标和血清细胞因子水平比较

CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平及IL-6水平明显高于眼肌型，差异具有统计学意义（P＜0.05）；QMGS 评分明显高于眼肌型，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 不同病情严重程度的患者免疫学指标和血清细胞因子水平、QMGS 评分比较（±s）Table 2 Comparison of immunological indexes，serum cytokine level and QMGS score of patients with different severity of illness（±s）

表2 不同病情严重程度的患者免疫学指标和血清细胞因子水平、QMGS 评分比较（±s）Table 2 Comparison of immunological indexes，serum cytokine level and QMGS score of patients with different severity of illness（±s）

2.3 患者免疫学指标和血清细胞因子水平与QMGS 评分的相关性分析

经Pearson 相关分析显示，CD3+与患者的QMGS 评分无明显的相关关系，但CD3-CD56+、CD4+/CD8+及IL-6 与患者的QMGS 评分呈负相关关系（r=-0.290，-0.409，-0.349；P＜0.01）。

3 讨论

目前重症肌无力呈逐年上升趋势，据报道表示［9］，其患病率约达（0.3～2.8）/10 万人。虽然随着现代医疗技术的发展，重症肌无力的标准治疗方案在不断完善，但目前尚缺乏彻底根治的方法，且有1/3 的患者经历了病情加重的情况［10］，重症肌无力作为慢性炎症性自身免疫疾病，其主要由自身抗体介导，发病机制较为复杂，免疫失调对于MG 发生有着重要影响。在重症肌无力中大约80%的患者均是由乙酰胆碱受体抗体（AchR）介导，还有一部分由肌肉特异性受体酪氨酸激酶、低密度脂蛋白受体相关蛋白4 等抗体介导［11］。在病理条件下，辅助T 细胞分泌多种细胞因子，刺激了B 细胞的增殖和分化，并分泌了补体结合的抗乙酰胆碱受体，合成了膜攻击复合物，从而导致了神经肌肉接头突触后膜的破坏［12］。因此，探究重症肌无力患者免疫指标和细胞因子表达情况，可为临床治疗提供新方向。

本研究结果表示，观察组的免疫指标（CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+）水平及细胞因子（IL-6）水平明显高于健康对照组；同时，全身型的CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+水平及IL-6 水平明显高于眼肌型。其机制可能与以下几点有关：第一，IL-6是影响B 细胞增殖分化并产生抗体的重要细胞因子，重症肌无力患者血清中的IL-6 会促使淋巴B细胞分化成浆细胞，从而产生AchR 导致了重症肌无力的发生，当患者机体的IL-6 含量较高时，产生AchR 增多从而也导致患者病情的发展［13］。第二，T 细胞表面具有多种标志性抗原，其中CD3+是T淋巴细胞表面的共同抗原，也是T 细胞的标志，CD3+CD4+均有影响抗原识别、信号传递并辅助机体进行体液免疫的作用，而CD8+是主要组织相容性复合体Ⅰ类限制性T 细胞识别辅助受体，其具有抑制B 细胞生成抗体及降低T 细胞活性等作用，从而抑制机体发生体液和细胞免疫，CD4+及CD8+相互诱导、相互制约形成了一个复杂的免疫调节系统，CD4+/CD8+水平的升高和下降也可反映机体B 淋巴细胞抑制作用情况和机体免疫状态，也是机体免疫调节情况的标志物［14-15］。第三，自然杀伤（natural killer，NK）细胞（CD3-CD56+）是异质性多功能免疫细胞，具有独立生物活性［16］，目前研究认为，NK 细胞是通过增加主要组织相容性复合体Ⅱ类分子的表达，促进B 细胞成熟，使机体产生AchR，从而影响重症肌无力的发生和发展［17-18］。

QMGS 评分是2000 年由美国重症肌无力协会提出的客观测量MG 受累肌群的肌力和耐力情况的标准化量表，可评估患者受累肌群肌无力严重程度，不仅适用于全身型MG 患者，也适用于单纯眼肌型，不同分型的重症肌无力患者的病情评估具有较高敏感性［19-20］。本研究进一步采用Pearson相关性分析结果显示，CD3+与患者的QMGS 评分无明显的相关关系，由于CD3+代表着T 淋巴细胞表面的一类抗原，参与着T 淋巴细胞中辅助性T细胞和抑制性T 细胞亚群的调节，因此与患者QMGS 评分较低。但CD3-CD56+、CD4+/CD8+及IL-6 与患者的QMGS 评分呈负相关关系，可见细胞因子表达异常等和重症肌无力的病情发展有着重要关联，CD3-CD56+、CD4+/CD8+及IL-6 可为患者的临床治疗及病情评估提供参考。

综上所述，重症肌无力患者免疫学指标（CD3+、CD3-CD56+、CD4+/CD8+）和血清细胞因子（IL-6）明显较高，且CD3-CD56+、CD4+/CD8+和IL-6 与患者的病情程度呈正相关关系，可为患者临床治疗、病情及预后的评估提供参考。但由于本研究为单中心研究，且样本量较小，因此研究具有一定的局限性，结果可能存在一定的偏倚，未来仍需要进行前瞻性的大样本量的多中心研究进行进一步的深入探究。