肺炎支原体抗体效价对MPP 的诊断价值及与气道炎症反应的关系

王赞 罗智花 刘洪

肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae，MP）是儿童群体社区获得性肺炎（Community-acquired pneumonia，CAP）最常见致病菌之一。流行病学数据显示，近年MP 感染呈显著升高趋势，全年有散发感染且呈现周期性流行特点，每间隔2～6 年可在世界范围内发生流行，肺炎支原体肺炎（Mycoplasma pneumoniae pneumonia，MPP）已成为人类健康的新威胁［1］。MPP 主要表现干咳、发热，随病情进展可诱发脑炎、心肌炎等，严重危害患儿生长发育及生命安全［2］。目前临床诊断MPP 常用手段有经典的培养法及血清学核酸检测法等，但存在耗时久或假阴性等不足［3］。人体感染MP 后可产生IgM-MP 抗体，其检测特异性强、敏感度高，但目前国外研究报道，MP 感染后IgM-MP 抗体效价与病情间相关性尚存争议［4］。本研究通过探究不同MP 抗体效价的MPP 患儿病情，旨在明确其与气道炎症反应的关系为临床完善诊治方案提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取阜阳市阜南县中医院2020 年1 月至2022年8 月疑似MP 感染患儿272 例作为研究对象。纳入标准∶经MP 病原学［5］诊断确诊；均伴不同程度干咳、发热症状；年龄1～14 岁；患儿监护人知情本研究并签署同意书。排除标准∶结核感染者；伴其他器质性疾病者；入组前已接受抗感染治疗者；存在免疫系统疾病者。

1.2 方法

1.2.1 呼吸道多病原核酸检测［6］

采集收件患儿咽拭子样本，以实时荧光定量PCR 检测方法进行呼吸道多病原核酸检测，病原包括呼吸道合胞病毒、MP、腺病毒、流感病毒（甲1甲3 乙型流感）、肠道病毒、冠状病毒OC43/NL63、肺炎衣原体17 种/型、副流感病毒（1 型、2 型、3 型、4 型）、博卡病毒、偏肺病毒、冠状病毒229E/HKU1鼻病毒。间隔48 h 再次采集样本检测，以复查结果为准，分为MPP 患儿（168 例）与非MMP 患儿（104 例）。

1.2.2 MP 抗体效价检测

采用非抗凝真空管采集晨空腹肘静脉血2 mL，加温（37℃）促凝，离心（半径8 cm，转速3 500 r/min，时间15 min）采集上层血清，采用上海科华生物工程股份有限公司颗粒凝集法检测试剂盒测MP 抗体效价，结果以滴度形式表示。

1.2.3 气道炎症反应指标检测

另同法采集血清标本，分别采用天津中新科炬生物制药有限公司白三烯B4（Leukotriene B4，LTB4）、白介素-18（Interleukin-18，IL-18）酶联免疫试剂盒、上海信然实业有限公司肿瘤坏死因子-α（Tumor Necrosis Factor-α，TNF-α）酶联免疫试剂盒、上海科华生物工程股份有限公司C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）酶联免疫试剂盒测LTB4、IL-18、TNF-α、CRP 水平；另以抗凝真空管采集空腹肘静脉血2 mL，采用贝克曼库尔特Cyto-FLEX 型流式细胞仪测嗜酸粒细胞（Eosinophils，EOS）水平。操作均由资深检验科医师参考试剂盒及仪器说明书步骤规范完成。

1.3 统计学处理

采用统计学软件SPSS 23.0 处理数据，计数资料以n（%）描述，计量资料采取Bartlett 方差齐性检验与Kolmogorov-Smirnov 正态性检验，均确认具备方差齐性且近似服从正态布，以（±s）描述，行t检验，多组间比较用F检验；变量间存在共线性采用Pearson 相关系数模型分析相关性；变量间不存在线性关系采用Logistic 回归分析模型分析相互间关系；预测效能分析采用受试者工作特征（ROC）曲线。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 MP 抗体效价诊断结果

以呼吸道多病原核酸48 h 复查检测结果确诊168 例阳性。MP 抗体效价1∶20、1∶40、1∶80、1∶160、1∶320、1∶640、1∶1280 分别确诊251、221、178、133、83、25、10 例阳性。见表1。

表1 MP 抗体效价诊断结果Table 1 MP antibody titer diagnostic results

2.2 MP 抗体效价诊断价值

根据MP 抗体效价诊断结果绘制ROC 曲线，结果发现，1∶160 时MP 抗体效价诊断MPP 的AUC 值0.849＞1∶80 的AUC 值0.773＞1∶320 的AUC 值0.731＞1∶40 的AUC 值0.691＞1∶20 的AUC值0.601＞1∶640 的AUC 值0.574＞1∶1280 的AUC值0.530。见表2、图1。

图1 ROC 曲线Figure 1 ROC curve

表2 MP 抗体效价诊断价值Table 2 Diagnostic value of MP antibody titer

2.3 不同MP 抗体效价患儿临床资料比较

不同MP 抗体效价患儿年龄、性别相比，差异无统计学意义（P＞0.05）；不同MP 抗体效价患儿发热时间、病情程度、X 线影像特点相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 不同MP 抗体效价患儿临床资料比较［（±s），n（%）］Table 3 Comparison of clinical data of children with different MP antibody titers［（±s），n（%）］

表3 不同MP 抗体效价患儿临床资料比较［（±s），n（%）］Table 3 Comparison of clinical data of children with different MP antibody titers［（±s），n（%）］

2.4 不同MP 抗体效价患儿气道炎症反应指标水平比较

外周血EOS、LTB4、IL-18、TNF-α、CRP 水平∶MP 抗体效 价＜1∶160＜1∶160＜1∶320＜1∶640＜+1∶1 280，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 不同MP 抗体效价患儿气道炎症反应指标水平比较（±s）Table 4 Comparison of the levels of airway inflammatory response indicators in children with different MP antibody titers（±s）

表4 不同MP 抗体效价患儿气道炎症反应指标水平比较（±s）Table 4 Comparison of the levels of airway inflammatory response indicators in children with different MP antibody titers（±s）

2.5 气道炎症反应指标与MP 抗体效价相关性

Pearson 相关性分析，外周血EOS（r=0.735）、LTB4（r=0.578）、IL-18（r=0.494）、TNF-α（r=0.399）、CRP（r=0.424）与MP 抗体效价呈正相关（P＜0.05）。

2.6 多元线性回归分析

将发热时间、病情程度、X 线影像特点等其他因素控制后，外周血EOS、LTB4、IL-18、TNF-α、CRP仍与MP 抗体效价显著相关（P＜0.05）。见表5。

表5 多元线性回归分析Table 5 Multiple Linear Regression Analysis

3 讨论

MPP 是MP 感染诱发的呼吸道疾病，儿童群体多发且临床表现、病情轻重不一，部分患儿病情进展迅速，可继发呼吸窘迫，严重者可致死［7-8］。MP感染能及时发现，早期诊断以有效指导治疗是改善预后，促进病情转归的关键环节。目前MP 感染实验室诊断技术主要有分离及培养、PCR 技术、血清学检查三大类，前两者存在耗时长、阳性率低或操作技术要求高等弊端，而MP 感染可诱导宿主生成抗体，因此血清MP 抗体检测可为辅助诊断MP感染提供新方向［9］。

MP 抗体效价检测已逐渐应用于临床，抗体效价值介于1∶40～1∶2 560 间，颗粒凝集法检测试剂盒说明书提示1∶40 滴度即为抗体阳性，但实际临床工作中发现颗粒凝集法检测MP 抗体阳性率偏高，认为1∶40 滴度界值偏低，需提高至1∶80 或1∶160［10-11］。本研究发现，以1∶160 为cut-off 值，检出阳性133 例，阴性139 例，其诊断MPP 的AUC 值0.849 最高，所对应敏感度为88.19%，特异度为90.82%，以1∶160 为cut-off 值时诊断MP 感染符合率更高，因此，建议在小儿MP 抗体效价检测中应以1∶160 作为cut-off 值。

此外，因不同MP 感染患儿病情程度不同，要求临床能及时、准确评价患儿病情，以便差异化制定治疗方案避免过度治疗或治疗不足［12-13］。MP 抗体效价检测在MP 感染病情评价中的价值如何尚存争议。本研究对比发现，不同MP 抗体效价患儿发热时间、病情程度、X 线影像特点对比有显著差异。张玲等［14］报道显示，MPP 患儿随病情加重，其MP 抗体滴度升高。学者孟丽珺［15］研究也表明，随MP 抗体滴度升高，患儿更易出现肺外并发症。本研究中随MP 抗体效价值升高，患儿表现发热持续时间延长，重度病情占比升高且表现肺部大片状阴影，此病理改变特征与上述研究中MP 抗体滴度变化趋势一致。另外，气道炎症反应是评价MPP患儿病情特征的主要参考依据，随气道炎症反应发生发展可诱导相关细胞及细胞因子异常生成，表现外周血EOS、LTB4、IL-18、TNF-α、CRP 水平升高［16-18］。本研究发现，随MP 抗体效价增加外周血EOS、LTB4、IL-18、TNF-α、CRP 水平呈升高趋势，提示炎性相关细胞及细胞因子生成可能与MP抗体效价有关。分析可能机制是∶EOS 是肺部感染主要炎症效应细胞，活化的EOS 可通过释放阳离子蛋白、主碱性蛋白、LTB4 等有害物质在肺部组织炎性损伤及临床症状发生中发挥关键作用；LTB4 是参与呼吸道炎症及重塑过程的主要介质，其水平升高被认为是支气管哮喘发生的主要诱因之一［19］；MP 感染可直接造成呼吸道上皮损害，引起气道高反应状态，同时能特异性诱导免疫球蛋白IgE 生成并结合EOS、肥大细胞受体，而致敏的EOS、肥大细胞脱颗粒，释放TNF-α、IL-18 等炎性物质，继而诱发，加重肺组织炎性损害［20-21］。Pearson 相关性分析发现，外周血EOS、LTB4、IL-18、TNF-α、CRP 与MP 抗体效价呈正相关，证实MP 抗体效价可应用于评价MPP 患儿气道炎症反应程度。但还有研究表明，MP 抗体效价可能受MP 感染时间等多种因素影响［22］。本研究也发现，发热时间、病情程度、X 线影像特点等均与MP抗体效价有关，为明确MP 抗体效价在MPP 患儿病情评价中的价值，进一步采用多元线性回归分析模型控制相关混杂因素后发现，血清EOS、LTB4、IL-18、TNF-α、CRP 仍与MP 抗体效价显著相关，说明MP 抗体效价与MPP 患儿病情呈独立显著相关性，可作为临床评价MP 感染及病情的辅助指标。

综上可知，MP 抗体效价与MPP 患儿气道炎症反应关系密切，对疑似MP 感染患儿进行MP 抗体效价检测可提高诊断率，便于指导临床早期治疗。