全自动病理组织脱水机乙醇浓度的变化对组织块的影响及应对措施分析

陈惠芹 连爱琼 厦门大学附属第一医院杏林分院病理科 （福建 厦门 361022）

内容提要： 目的：分析全自动病理组织脱水机乙醇浓度的变化对组织块所产生的影响并根据实践经验分析总结应对措施。方法：通过使用乙醇浓度计检测樱花全封闭脱水机每缸乙醇溶液使用前后的变化情况，分析乙醇浓度变化对组织处理效果的影响，并及时采取相应措施。结果：全自动病理组织脱水机运行1～4次，所有组织块均取得了良好的脱水效果；第5次时偶尔会出现脱水不良，主要是因为子宫肌瘤组织在制片时存在一定困难，这是由于该组织容易化开所致；第6次时部分组织块出现脱水不良的情况，这些组织块大多是子宫内膜以及少量阑尾组织等，石蜡组织在切完之后，切片中央部位发生内陷，其他一些体积较小的组织块都未发生明显的异常情况。结论：因第1缸乙醇浓度低于临界值，通过联合监测第2缸乙醇，并适当调整脱水程序或更换新液，可以保证组织块的脱水质量。

全自动病理组织脱水机是各大医院病理科以及科研机构常用的处理病理组织的重要仪器，其具有较高的稳定性，可以在较短时间内处理大量标本，安全性极高，这也使得其得到了相关科研人员的广泛认可[1]。病理切片在制作的过程中，每个环节都会影响到最终的病理切片的质量，在切片制作过程中，对病理组织进行脱水处理是关键步骤之一。这一步骤的最终处理质量将会对后续的切片和染色质量产生直接影响，进而影响到免疫组化、原位杂交、二代测序等检测方式的最终检测结果，可导致检测结果出现偏差[2]。在医院疾病诊断过程中，检测结果会直接影响到医生对患者病情判断，检测结果不准确就很容易导致出现误诊漏诊情况，可能延误患者的最佳治疗时机，造成难以挽回的后果。病理组织脱水处理过程中，乙醇是最常用的脱水机，而乙醇的浓度会直接影响到检测结果，因此需要对乙醇浓度进行实时监测，防止其出现过高或者过低的情况，从而对检测结果造成不利影响[3]。当乙醇浓度出现异常时，需要及时采取一定的应对措施，保证组织块在每一个换液周期内的脱水质量，将所用试剂的效能提升到最大，这样有助于减少废液排放，延长全自动病理组织脱水机的使用期限。为了更加深入地研究全自动病理组织脱水机乙醇浓度的变化对组织块造成的不同影响以及探讨针对这些情况而采取的一些有效的应对措施，本文对本院病理科2019年9月份标本，选择120份病理组织开展研究，研究结果具体如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

仪器型号：全自动病理组织脱水机（樱花全封闭脱水机Tissue-Tek®VIPtm 5Jr）；乙醇浓度计：40%～50%、50%～60%、60%～70%、70%～80%、80%～90%、90%～100%，这些乙醇浓度计的精度均为0.1%；1500mL量筒。

病理组织标本：选择本院病理科120例病理组织，时间为2019年9月1日～9月30日，其中阑尾组织30例，子宫内膜组织40例，子宫肌瘤组织50例。

试剂：本次研究中所采用的试剂为10%中性缓冲甲醛溶液（本院药剂室配制）、分析纯无水乙醇、二甲苯（西陇科学股份有限公司）以及熔点为58～60˚C的高效切片石蜡（上海华永石蜡有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 工作原理

樱花全封闭脱水机共有16缸，各缸中放置的溶液及浓度分别如下：第1缸：10%的中性缓冲甲醛溶液；第2～7缸：乙醇溶液，并且需要按照不同浓度梯度依次放置，浓度从小到高逐渐升高；第8～10缸：二甲苯；第11～14缸：液体石蜡；第15～16缸：清洗液。除了15～16缸容量都是5.00L外，其他缸容量均在3.50～3.75L[4]。

1.2.2 脱水处理时间

第1缸和第2缸中的10%中性缓冲甲醛溶液的处理时间分别控制在90min和180min；其中第1缸中乙醇的处理时间控制在90min，第2缸则为70min，第3～6缸则是60min；三缸二甲苯的处理时间分别控制在40min、35min及30min；四缸液体石蜡的处理时间分别控制在30min、45min、45min、60min[5]。

1.2.3 试剂更换

①将第1缸甲醛溶液全部倒掉同时更换新的甲醛溶液；②将第1缸的乙醇溶液全部倒掉并清洗，晾干后加入无水乙醇并将其放置在第7缸的位置，其他乙醇缸前移一位；③将第8缸二甲苯全部倒掉，其他二甲苯缸前移一位，向第8缸中加入新的二甲苯溶液并将其放置在原先第10缸的位置；④将第11缸的石蜡全部倒掉，其他石蜡缸前移一位，向第11缸加入新的石蜡后将其放置在第14缸的位置[6]。

1.3 观察指标

乙醇试剂浓度的检测的条件是环境温度为20˚C，检测者需对检测每缸乙醇浓度进行检测并将结果做好详细记录，在每次处理完一定数量的病理组织之后，检测者需使用乙醇浓度计检测每缸乙醇浓度并做好记录。在研究结束后，对组织块HE染色切片的质量进行分析研究并总结相关经验[7]。

2.结果

2.1 组织块脱水效果

通过本次研究发现，全自动病理组织脱水机运行1～4次后，机器中的组织块均获得良好的脱水效果；第5次时偶尔会出现脱水不良，主要是因为子宫肌瘤组织在制片时会出现化开的情况，这就导致制片过程存在一定的难度；第6次时部分组织块出现脱水不良的情况，这些组织块大多是子宫内膜以及少量阑尾组织等，石蜡组织在切完之后，切片中央部位发生内陷，其他一些体积较小的组织块都未发生异常情况。

2.2 一个换液周期内乙醇浓度的变化

在一个换液周期内，第1缸乙醇浓度降低速度最快，第2缸降低速度比第1缸稍慢，第3～6缸的变化量呈现出逐渐减小的趋势，见表1。

表1.换液前后乙醇浓度变化(±s,%)

表1.换液前后乙醇浓度变化(±s,%)

项目换液前换液后变化量第1缸79.6±1.3 54.6±3.4 35.2±2.3第2缸90.3±0.8 81.3±2.4 10.5±1.7第3缸94.6±0.6 92.4±1.3 3.5±0.9第4缸97.2±0.5 96.1±0.6 2.3±0.7第5缸99.2±0.2 98.4±0.4 1.6±0.5第6缸99.9±0.1 99.7±0.2 0.5±0.1

2.3 组织块HE染色质量

使用显微镜观察HE切片，可以发现切片的细胞核着色清晰、细胞核与细胞质之间的分界对比非常明显、染色质量较好，切片整体效果较好，可以成为病理诊断的可靠依据。

3.讨论

随着现代病理技术的不断创新发展，越来越多的新技术和新设备进入到病理科并发挥着巨大作用，同时现代医学检查对组织标本的处理要求日益提高，传统的手工组织脱水由于耗费时间长，工作量大，脱水效果不理想等原因，已经逐步被全自动病理组织脱水机取代。自动病理组织脱水机是集固定、脱水、透明、浸蜡于一体的高技术检测仪器，具有自动化、安全高效、污染小、组织处理好的优点，因此其开始被广泛应用于病理科对组织块的处理过程中，有效满足了病理科工作量不断增长的需求[8]。在实际病理切片处理过程中，会出现许多因素影响到切片质量，比如组织固定、组织脱水等，但是主要还是取决于对标本组织前期处理得好坏，脱水又是前期处理过程中的一个重要环节，因此对全自动病理组织脱水机乙醇浓度的变化对组织块的影响进行研究分析并制定有效的应对措施具有重要现实意义。

实验室换液方法大多为阶梯替换法以及分组替换法，这两种换液方法可使得乙醇的浓度产生并保持合适的梯度，便于将组织内的游离水置换出来，为后续透明、浸蜡操作创造有利条件，保证了组织细胞的形态和结构完整[9]。通过本次研究发现，将多个周期乙醇浓度的变化量控制在一定范围内，其组织脱水质量就能得到保证。

本研究对多个周期内缸中乙醇浓度进行了检测，结果表明第1和第2缸中的乙醇浓度变化相对较大，通过分析第1和第2缸的乙醇浓度的检测结果，就能确定全自动病理组织脱水机的换液时机。通过本研究发现，当第1缸中的乙醇浓度降至50%的时候，在最开始设定的脱水程序下，全自动病理组织脱水机会偶尔发生部分大块组织脱水不良的情况，在研究时对相关文献进行查询确认后发现研究结果与文献内容记载基本一致；因此如果要确保脱水质量，就要时刻注意第1缸和第2缸中的乙醇浓度，当前者浓度降至50%左右，后者降至80%左右时，就需要及时更换新的乙醇；当组织块数量较少并且其中的小组织块的数量占比较高时，在经过换液处理过后，观察发现，组织块的质地明显较硬并且偏脆，制片过程中的难度相对较大，在其中出现了少数组织脱水质量较差的情况。通过对相关研究资料的分析结合实际情况变现来看，导致出现此类情况的原因可能是浓度较高的乙醇溶液在脱水时的速度较快，使得体积较大的组织块表面发生硬化的情况，乙醇此时就难以发挥渗透、置换的作用，就会使得该组织块内存在部分水分[10]。同时在本次研究过程中还出现了体积较大的组织块脱水不彻底的情况，比如子宫内膜组织、子宫肌瘤组织中存在的部分体积较大的组织块。部分组织块在切完片后还出现了组织蜡块凹陷的现象，根据相关研究资料并结合实际效果进行判断，导致出现这种现象与组织块的体积有关，体积过大就会导致取材较厚，如果在脱水时使用的乙醇浓度过低，其内部仍会留存一定的低浓度乙醇，其内部水分不能完全被置换出来，同时，由于二甲苯和水互不相容的特性，使得后续的组织透明、浸蜡操作无法有效进行，当组织蜡块中的水分挥发之后，蜡块内部就会留有一些空隙，最终使得其中心部位组织发生凹陷[11]。当按照上述操作要求及时更换乙醇溶液之后，组织块则未出现脱水质量差的相关情况，所以在更换试剂过程中，需要准确把握前两缸的乙醇浓度并严格按照实验方法进行换液操作。对乙醇浓度进行日常检测并详细记录相关检测结果，对检测结果进行分析总结就可以准确把握每个换液周期内每缸中的乙醇浓度的变化规律，并据此适时调整全自动病理组织脱水机的运行程序并按照操作流程更换新的溶液，从而保证组织块的脱水质量[12]。每缸乙醇浓度需要定时测定，特别注意其中前两缸乙醇浓度的变化，这样检测人员可明确并把握换液的时机，使得全自动病理组织脱水机中的乙醇浓度始终保持在合理的态度范围内。

综上所述，每个病理组织检测实验室中的接受检测的组织类型以及数量都是不同的，各个实验室使用的脱水机类型以及相关脱水程序的设定也是不同的，但是在条件允许的情况下，都可以通过适当的换液方法和换液时机维持每个缸中乙醇浓度的正常范围，最大程度上减少乙醇浓度变化对组织块造成的影响，从而保证脱水质量。