白扁豆和瓜蒌子药材粉末饮片煎煮工艺研究*

海 月，朱 敏，钱 芳，陆 超，吴 磊，束雅春

（南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210036）

中药粉末饮片是饮片的重要临床应用形式之一，《中国药典》以及各省、自治区、直辖市中药饮片炮制规范中收载的中药粉末饮片日益增多，中药粉末饮片具有提高有效利用率、节省药材资源、配伍灵活、可避免处方外泄等特点而得到广泛应用［1-2］。中药粉末饮片用量逐年增加，但我国并未对其适用范围、适宜粒径、制备工艺、质量控制等内容作出详细规定和制订统一标准，难以保障其质量，制约了中药饮片产业创新发展［3］。因此，加强中药粉末饮片的生物等效性、安全性和提取工艺研究是创新中药饮片用药形式的关键。核苷类化合物是维持生物细胞重要功能的一类成分，生理作用和生物活性广泛，如抗癌、抗病毒和免疫调节活性等［4-9］。本研究中以白扁豆和瓜蒌子两味中药的粉末饮片为例，考察不同粉碎粒度、提取时间、提取次数对其中核苷类成分含量的影响，为粉末饮片的制备工艺和生物等效性研究提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：HH-6 型数显恒温水浴锅（国华仪器制造有限公司）；DHG-9123A型电热恒温鼓风干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；AX224ZH/ E 型电子分析天平（奥豪斯仪器有限公司）；5424R 型高速冷冻离心机（Eppendorf 公司）；e2695 - 2998 型高效液相色谱仪（美国Waters公司）。

试药：胞嘧啶对照品（批号为TW1128XA13）、尿嘧啶对照品（批号为T14A8X33880）、尿苷对照品（批号为TM0313XA13）、鸟苷对照品（批号为AJ0609NA14）、腺苷对照品（批号为Z04N8J47423），均购自上海源叶生物科技有限公司，含量≥98.0%；乙腈为色谱纯，乙酸铵（10 mmol/L）为分析纯，水为娃哈哈纯净水。白扁豆药材饮片（安徽亳州永刚饮片厂，批号为A220315）；瓜蒌子药材饮片（贵州同德药业有限公司，批号为20220101-01）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：CAPCELL PAK ADME - HR（S - 5）柱（250 mm×4.6 mm，5µm）；流动相：乙腈（A）-10 mmol/L乙酸铵溶液（B），梯度洗脱（0～15 min时1%A →5%A，15～25 min 时5%A，25～28 min 时5%A →80%A，28～33 min 时80%A；33～35 min 时80%A →1%A）；流速：1.0 mL/min；检测波长：260 nm；柱温：30 ℃；进样量：10µL。

2.2 溶液制备

混合对照品溶液：取胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、鸟苷和腺苷对照品各适量，精密称定，分别加10%甲醇溶解，制成每1 mL分别含0.535，0.500，0.498，0.539，0.590 mg的单一对照品贮备液；分别取适量，混合后加10%甲醇定容，制成每1 mL 分别含0.107，0.100，0.099，0.108，0.118 mg的混合对照品溶液。

供试品溶液：称取原饮片（白扁豆A，瓜蒌子GA）及粉末饮片［未过1 号筛（白扁豆B，瓜蒌子GB），过1 号筛（白扁豆C，瓜蒌子GC），过2 号筛（白扁豆D，瓜蒌子GD）、过3 号筛（白扁豆E，瓜蒌子GE）］5 种粒度饮片各2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加热水20 mL，密塞，摇匀，浸泡30 min 后，分别煎煮10，20，30 min（编号分别为①②③），煎煮1 次（Ⅰ）或2 次（Ⅱ），摇匀滤过后，滤液置10 mL离心管中，4 000 r/min离心10 min，取上清液900µL，加甲醇定容至1 mL，经0.22µm 滤膜过滤，取续滤液，即得。白扁豆、瓜蒌子供试品编号见表1。

表1 2种药材粉末饮片供试品编号（n=2）Tab.1 Numbers of test solution of two medicinal powder decoction pieces（n=2）

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2项下溶液各10µL，按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果显示，供试品溶液与混合对照品溶液在相同保留时间处有相应色谱峰，且分离度均大于1.5，分离良好。理论板数按各成分峰计均大于3 000。详见图1。

图1 高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatograms

线性关系考察：精密量取2.2项下混合对照品溶液适量，倍比稀释，配成不同质量浓度的系列混合对照品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分进样量（X，µg）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归。结果见表2。

表2 线性关系考察结果Tab.2 Results of the linear relation test

检测限与定量限考察：分别取胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、鸟苷和腺苷的单一对照品溶液适量，倍比稀释后按2.1 项下色谱条件进样测定，以信噪比（S/N）约为3和10 时各待测成分质量浓度分别记作检测限和定量限。结果各成分的检测限分别为0.01，0.01，0.03，0.01，0.02 µg，定量限分别为0.03，0.04，0.08，0.04，0.07µg。

精密度试验：取2.1 项下混合对照品溶液适量，按2.1项下色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺苷峰面积的RSD分别为0.72%，0.72%，0.71%，0.71%，0.72%（n= 6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.2 项下E③Ⅰ、GE③Ⅰ供试品溶液适量，分别于室温下放置0，2，4，6，8，12，18，24 h时按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果E③Ⅰ供试品溶液中胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、腺苷峰面积的RSD分别为0.73%，0.60%，1.21%，1.50%（n= 8），GE③Ⅰ供试品溶液中胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺苷峰面积的RSD分别为0.80%，0.66%，1.22%，1.20%，1.03%（n=8），表明供试品溶液室温下放置24 h内基本稳定。

重复性试验：取2.2项下E③Ⅰ、GE③Ⅰ样品适量，各6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算各成分含量。结果E③Ⅰ供试品溶液中胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、腺苷含量的RSD分别为0.72%，1.30%，1.24%，0.65%（n= 6），GE③Ⅰ供试品溶液中胞嘧啶、尿嘧啶、尿苷、鸟苷、腺苷含量的RSD分别为0.93%，0.56%，0.70%，1.44%，1.07%（n=6），表明方法重复性较好。

加样回收试验：取已知含量的白扁豆和瓜蒌子粉末饮片样品，各6 份，每份2 g，精密加入各单一对照品贮备液，按2.2项下方法制备E③Ⅰ和GE③Ⅰ的供试品溶液，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率。结果见表3和表4。

表3 白扁豆药材粉末饮片样品加样回收试验结果（n=9）Tab.3 Results of the recovery test of Lablab Semen Album Powder Decoction Pieces（n=9）

表4 瓜蒌子药材粉末饮片样品加样回收结果（n=9）Tab.4 Results of the recovery test of Trichosanthis Semen Powder Decoction Pieces（n=9）

2.4 样品含量测定

取2.2 项下各供试品溶液适量，按2.1 项下色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算含量，结果见表5和表6（“-”为未测出）。最终确定白扁豆、瓜蒌子药材粉末饮片最佳工艺均为打成粗粉（后者需过2号筛），提取2次，每次20 min。

表5 白扁豆药材粉末饮片样品含量测定结果（mg/g，n=2）Tab.5 Results of content determination of nucleosides in Lablab Semen Album Powder Decoction Pieces（mg/g，n=2）

表6 瓜蒌子药材粉末饮片样品含量测定结果（mg/g，n=2）Tab.6 Results of content determination of nucleosides in Trichosanthis Semen Powder Decoction Pieces（mg/g，n=2）

3 讨论

3.1 提取方法选择

预试验中同时考察了超声水提取法和加热水提取法，结果显示，前法对核苷类成分的溶出率更高，但考虑临床实际使用时多是加热水提取1 次或2 次，故最终仍选择加热水提取，提取时间选取10，20，30 min，提取次数按1次和2次分别进行考察。

3.2 色谱条件优化

预试验中同时考察了甲醇-水，甲醇-0.2%甲酸水溶液，乙腈-水，乙腈-0.1%磷酸水溶液，乙腈-10 mmol/L乙酸铵5 种不同的流动相系统，结果显示，采用乙腈-10 mmol/L乙酸铵流动相系统时峰形更对称，分离效果更好；还同时考察了Waters Sunfire C18柱，Zefex Acutfex PW-C18柱及CAPCELL PAK ADME-HR（S-5）柱，结果显示，本研究中所选色谱柱在高水相比例下有较好的分离效果和耐用性。

3.3 测定结果分析

本研究结果显示，不同提取时间、提取次数及粒度对核苷类成分含量有不同程度的影响。白扁豆药材粉末饮片样品中检测到胞嘧啶，尿嘧啶，尿苷和腺苷，瓜蒌子药材粉末饮片样品中除上述4种成分外，还检测到鸟苷。白扁豆和瓜蒌子药材粉末饮片各粒度样品中，提取2次比提取1次的核苷类成分含量均增加。

白扁豆药材粉末饮片样品：各粒度样品中均检测到胞嘧啶和腺苷。样品提取20 min 和30 min 的样品中核苷类成分含量均明显高于提取10 min，前两者间含量差异不明显；在相同提取时间和提取次数条件下，B 样品中核苷类成分含量总体高于其他粒度，其次是粒度最小的E样品，但在煎煮过程中，粒度太小易发生糊底。因此，综合考虑本研究结果和临床实际应用操作便捷性，以打成粗粉，提取2次，每次20 min为宜。

瓜蒌子药材粉末饮片样品：在原饮片提取物中均未检测到核苷类成分；在GB 样品中仅在提取30 min 的样品中检测到部分核苷类成分；GC，GD，GE 样品以提取2次样品中大部分的核苷类成分含量较高，且以提取30 min 含量较高（但有部分核苷类成分含量反而低于20 min），GD样品中核苷类成分含量总体偏高，临床使用时，可考虑将瓜蒌子粉碎过2号筛，提取2次，每次20 min。

本研究结果显示，随着粉碎粒度的增加，核苷类成分的含量不完全随之增加，可能由于果实种子类成分含油脂较多，粒度越小，油脂类成分的溶出也随之增加，一定程度上会限制某些核苷类成分的溶出，可见临床使用时，有效成分溶出率不一定与粒度呈负相关。本研究中，每个样本均平行制备2 份，能一定程度上反映核苷类成分含量的变化趋势，但重复次数仍有限，后续需对现有结果进行反复验证。中药发挥药效是多成分共同作用的结果，核苷类只是其中的一类成分，白扁豆和瓜蒌子药材饮片中含有大量的脂肪酸、蛋白质等其他成分，粉碎粒度及提取方法的考察，尚需结合多成分多指标综合评价。核苷类成分在白扁豆和瓜蒌子药材饮片中的药理药效机制尚未知晓，后续还需结合相关评价指标，从功效相关活性成分的粉碎及提取工艺角度综合完善果实种子类粉末饮片的煎煮规范，以更好地为临床科学合理用药提供研究依据。