鸡肉中二种氟喹诺酮类药物残留检测能力验证实验

林品言，崔先锋

（1.常德市畜禽水产品质量安全检验检测中心，湖南常德 415000；2.澧县农产品质量安全检测中心，湖南常德 415500）

1 引言

能力验证是按照预先制定的准则，通过实验室间比对，来评价参加者的能力[1-2]，它是评价检验检测机构综合检测能力的重要手段，通过参加能力验证活动，能够提高检验检测机构的检测水平，有利于提升实验室的综合能力。

氟喹诺酮类药物是一类人工合成的新型杀菌性抗菌药物[3]，其具有抗菌谱广、使用方便、价格低廉等优点，作为广谱抗菌药被养殖户在畜牧、水产等养殖生产中广泛使用。由于不合理的用药可导致氟喹诺酮类药物及其代谢产物在畜禽水产品中残留。如果长期食用含有氟喹诺酮类药物的动物源食品，会使人对致病菌产生耐药性，从而对人体健康造成严重威胁。氟喹诺酮类药物残留的常用检测方法有液相色谱- 质谱联用法[4-5]、高效液相色谱法[6]、酶联免疫吸附法[7]等。本文以参加2022 年湖南省农业农村厅组织的鸡肉中二种氟喹诺酮类药物残留检测能力验证为例，采用《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测：高效液相色谱法》（农业部1025号公告—14—2008）和能力验证作业指导书对鸡肉中氟喹诺酮类药物残留进行测定，通过参加本次能力验证，可以对实验方案设计、定量分析方法以及测定结果分析等关键环节进行评价，提高实验室检测数据的有效性和可靠性。

2 材料与方法

2.1 样品来源

两份平行考核的鸡肉样品，每份鸡肉样品2.00 g，样品编号为E02。空白鸡肉样品10.00 g，能力验证样品为已经绞碎并称好放在离心管中的鸡肉样品，-20℃以下保存，由湖南省兽药饲料监察所提供。

2.2 材料与试剂

能力验证样品：2 份平行考核鸡肉样品（编号：E02,质量：2.00 g）和空白鸡肉样品（质量：10.00 g）：湖南省兽药饲料监察所提供；恩诺沙星、环丙沙星混合标准工作液（2 μg/mL）：湖南省兽药饲料监察所提供；磷酸（优级纯）：国药集团化学试剂有限公司；氢氧化钠（优级纯）：西陇科学股份有限公司；乙腈（色谱纯）：CNW Technologies；甲醇（分析纯）：CNW Technologies；三乙胺（分析纯）：CNW Technologies；磷酸二氢钾（分析纯）：天津市恒兴化学试剂制造有限公司。

2.3 仪器与设备

LC-20AT 高效液相色谱仪（日本岛津）：荧光检测器；CP153C 电子天平：奥豪斯仪器（上海）有限公司；XW-80A 微型旋涡混合仪：上海沪西分析仪器厂有限公司；TG16K-II 高速离心机：长沙东旺实验仪器有限公司；摩尔原子超纯水：上海摩勒科学仪器有限公司；DL-01 抽滤装置；12 道SPE 固相萃取装置；量筒；容量瓶；具塞离心管；移液枪；固相萃取柱：Agilent Technologies C18 柱（100 mg/mL）。

2.4 试验方法

2.4.1 样品前处理

称取空白鸡肉样品2.00 g 3 份置50 mL 离心管中，一份做空白样品，二份做加标回收实验，与2 份平行考核鸡肉样品一起，先加磷酸盐缓冲溶液10.0mL,放在振荡器上振荡10 min，10000 r/min 离心5 min，取上清液，待用。再在残渣中加入10.0 mL磷酸盐缓冲溶液，放在振荡器上振荡10 min，10000 r/min 离心5 min。合并两次上清液，混匀，使用滤纸过滤，备用。

固相萃取柱先依次用甲醇、磷酸盐缓冲溶液各2 mL 预洗。取上清液5.0 mL 过柱，用水1mL 淋洗，挤干。用流动性1.0 mL 洗脱，挤干，收集洗脱液。经滤膜过滤后作为试样溶液，供高效液相色谱法测定。

2.4.2 液相色谱条件

色谱柱：C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，粒径：5 μm）；流速：0.8 mL/min；流动相：0.05 mol/L 磷酸溶液/三乙胺- 乙腈（82+18，v/v），使用前经微孔滤膜过滤；检测波长：激发波长280 nm、发射波长450 nm；柱温：30 ℃；进样体积：20 μL。

取100 ng/mL 二种氟喹诺酮类药物残留混合标准工作液，按上述色谱条件进行高效液相色谱分析，标准色谱图如图1 所示。

图1 环丙沙星和恩诺沙星标准样品色谱图

图1 中，7.880 min、10.322 min 分别为环丙沙星、恩诺沙星色谱峰。可以看出，环丙沙星和恩诺沙星的色谱峰均峰形尖锐，对称性好。

3 结果与分析

3.1 标准曲线

精确量取适量2 μg/mL 环丙沙星和恩诺沙星标准工作液，用流动相稀释成浓度为10、25、50、100、200 ng/mL 的环丙沙星和恩诺沙星标准溶液，供高效液相色谱分析。由表1 可知，二种氟喹诺酮类药物的回归方程及相关系数，在10～200 ng/mL的浓度范围具有良好的线性关系。

表1 喹诺酮类药物的回归方程、相关系数

3.2 质控样的回收率

向称好的2 份空白鸡肉样品中添加80.0 ng/g、100.0 ng/g 的2 个不同浓度的混合标准工作液，按照2.4 方法进行添加回收试验。结果显示，本方法在80.0～100.0 ng/g 的添加范围内，回收率范围为80.08%～85.23%。符合标准中方法在20～500μg/kg添加浓度的回收率为60%～100%的要求。空白鸡肉样品中添加2 种药物回收率的结果见表2。

表2 空白基质中添加二种药物回收率

3.3 能力验证样品中二种氟喹诺酮类药物残留的含量

由表1 可知，环丙沙星、恩诺沙星浓度范围在10～200 ng/mL 内，线性关系良好。根据线性回归方程计算各组分浓度，环丙沙星未检出，恩诺沙星含量为66.9 μg/kg（见表3）。

表3 二种氟喹诺酮类药物残留的含量及精密度

4 结论

本次由湖南省农业农村厅组织的鸡肉中二种氟喹诺酮类药物残留检测能力验证中，考核鸡肉样品E02环丙沙星未检出，而恩诺沙星测定结果为66.9 μg/kg。根据2022 年农产品质量安全检测技术能力验证添加值及判定范围可知，环丙沙星实际未添加，恩诺沙星实际添加为80 μg/kg，根据实验检测结果计算得到回收率在80%以上，结果判定优秀。通过本次能力验证，实验室中采用的方法、仪器的稳定性、试剂的有效性等都得到了确认，实验室检测人员对采用高效液相色谱仪进行定量检测有了更深的认知，实验室的整体水平得到了很大的提高。 □