胶体金试纸法和化学发光法联合检测血清hCG的实用性观察及结果异同分析

黄 珍 陈 真 朱华山

1 湘西州民族中医院检验科,湖南省吉首市 416000; 2 吉首市人民医院检验科

人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin,hCG)主要由分化的合体滋养层细胞产生的一种具有促进性腺发育的糖蛋白激素,由α和β亚基组成。正常人体内hCG含量极少,在受孕1周后血清hCG约50mIU/ml,至妊娠60～70d达到最高峰(8 000～320 000mIU/ml),持续1～2周后,逐渐下降至一定水平并维持至分娩[1]。测定hCG水平有助于在产前筛查、早期妊娠、异位妊娠、先兆流产、滋养层细胞疾病、肿瘤等方面为临床诊断和监测提供依据[2]。目前,检测hCG 的方法有很多,如胶体金试纸法、酶联免疫吸附试验、放射免疫试验、化学发光法等,而临床实验室最常用的检测方法是胶体金试纸法和化学发光法。本文主要为观察胶体金试纸法和化学发光法联合检测血清hCG的实用性,并就测定结果不相符的原因进行分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2021年1月—2022年8月在吉首市人民医院不孕不育、门诊,妇科、产科门诊和住院诊治患者(年龄14～65岁,平均年龄30.09岁)的血液样本3 381例,血清无溶血、黄疸、脂血现象。

1.2 试剂与方法 hCG胶体金试纸由蓝十字生物药业(北京)有限公司生产。在室温下将试纸条下端放入样本血清中,其深度不超过Max线,5s后取出平放,5min时观察结果。依据测试线(T线)和对照线(C线)的红色条带显色强弱判读结果:(1)无效:C线不显色;(2)阴性:C线显红色,T线无红色条带出现;(3)弱阳性:C线显红色,T线出现微弱红色条带且颜色较C线明显浅很多;(4)阳性:C线显红色,T线出现红色条带且颜色较C线要浅;(5)强阳性:C线显红色,T线出现红色条带且颜色较C线相近或更深。贝克曼DXI800化学发光法分析仪,配套hCG试剂、定标品、质控品。仪器中分别设定了非稀释和1∶200稀释模式检测程序,能在限定线性范围内定量测定血清hCG浓度。严格执行室内质量控制程序,质控结果显示在控;参加2021年、2022年湖南省临床检验中心室间质量评价,成绩回报均为优异。本研究定义化学发光法所测hCG值为真值,考虑围绝经期和绝经后妇女会出现hCG轻度升高[3],设定血清hCG≤5mIU/ml为非孕期妇女。 样本用hCG胶体金试纸测定为阴性、弱阳性、阳性时,在化学发光仪上用非稀释模式检测hCG;样本用hCG胶体金试纸测定为强阳性时,在化学发光仪上用稀释模式检测hCG。观察胶体金试纸法和化学发光法联合检测血清hCG的实用性和两种检测方法结果异同情况。

2 结果

依据hCG胶体金试纸法检测结果在化学发光仪上选择非稀释或稀释测定模式的方法,总体符合率达99.23%,其中胶体金试纸测定为阴性、弱阳性、阳性时,在化学发光仪上用非稀释模式检测hCG的符合率分别为100.00%、99.34%、96.08%;胶体金试纸测定为强阳性时,在化学发光仪上用稀释模式检测hCG的符合率为99.64%。两种检测方法联合检测血清hCG时出现了86例结果不相符情况:当胶体金试纸法测定为阴性时,样本中有80例化学发光法检测值为5.17～33.97mIU/ml;当胶体金试纸法测定为弱阳性时,样本中有4例化学发光法检测值<2mIU/ml,还有1例样本检测值>270 000mIU/ml;当胶体金试纸法测定为阳性时,样本中有1例检测值为1.15mIU/ml。见表1。

表1 两种方法测定3 381例血清hCG结果比较

3 讨论

贝克曼DXI800化学发光法分析仪定量检测hCG水平,检测时长约20min,仪器设定了两个检测模式:在非稀释模式检测,线性范围<1 350mIU/ml,如遇样本中分析物高于定量上限浓度值,则回报结果>1 350mIU/ml;在稀释模式检测,线性范围1 050～270 000mIU/ml,如遇样本中分析物低于定量下限浓度值,则回报结果<1 050mIU/ml。本文发现3 381例样本中有1 655例hCG<1 050mIU/ml,1 674例hCG>1 350mIU/ml,若因检测模式选择不当,仪器回报结果为“<1 050mIU/ml”或“>1 350mIU/ml”,则需更换检测模式再次检测样本以求具体数值。但化学发光法试剂、耗材成本昂贵,重复检测样本,既加大了项目成本支出,又拖延了结果报告时间。因此,寻找一个可预估样本hCG水平的快速筛查方法,继而在化学发光仪上选择合适的检测模式是很有临床意义的。

临床工作中,hCG胶体金试纸法有着较为凸显的实用特点:成本低、速度快。检测过程操作简便不需其他设备,几分钟即可用肉眼观察结果,且在一定浓度范围内,试纸条的检测线条带颜色随着样品浓度的增高而逐渐加深,对照线相对检测线也会呈现出一定的规律变化。利用这种规律的变化可以用于初步估算血清中hCG水平[4]。

本文根据胶体金试纸测法和化学发光法的特点,联合两种方法检测血清hCG含量,充分发挥胶体金试纸法的优势,有利于在化学发光仪器上选择合适的检测模式,既能弥补化学放光法的缺陷,减少不必要的重测,节约检测成本,又能更快回报结果,为患者赢得就诊时间。本文结果显示,胶体金方法筛选出阴性、弱阳性、阳性样本时,在化学发光仪上用非稀释模式检测,胶体金方法筛选出强阳性样本时,在化学发光仪上用稀释模式检测,这种依据胶体金试纸测定结果继而在化学发光仪上选择不同检测模式的方法,总体检测模式符合率可达99.23%。同时,特别关注胶体金试纸法阳性、强阳性时,化学发光法有25例样本需要更改检测模式再次检测血清hCG浓度。可能血清hCG在878.91～1 891mIU/ml浓度范围,胶体金试纸检测线与对照线的强弱显色规律并不明朗或存在判读结果的个人差异,提示操作者需要更多地观察、比对和总结才能正确判断两者关联度,以提升检测模式符合率。

本文结果显示,联合胶体金试纸法和化学发光法检测血清hCG时,两种方法出现了结果不相符情况,可分为三种情形来分析。(1)胶体金“假阴性”现象。胶体金测定为阴性时,80例样本化学发光法测量值为5.17～33.97mIU/ml,其中76例化学发光法测量值为5.17～20.03mIU/ml的情况,可以用两种检测方法学灵敏度来解释(胶体金试纸法检测限不高于25mIU/ml,化学发光法检测限>0mIU/ml),在妊娠早期,血清hCG浓度较低且未达到胶体金法检测阈值或该浓度范围处于胶体金试纸检测限附近,易出现胶体金检测为阴性结果现象,但并不是所有该浓度范围的样本的胶体金检测结果都为阴性。另有4例测量值为27.03～33.97mIU/ml的样本出现了胶体金假阴性情况,考虑为有效样本相对不足,捕获抗体或金标液没有发生免疫反应等情况。另有学者指出检测体系中膜的流动性不好(流速太快或太慢)、金颗粒释放不充分、盐量不足、体系中酸度不适宜也会使胶体金试纸产生假阴性现象[5]。(2)胶体金试纸法测定为弱阳性时,有1例样本用化学发光法检测值>270 000mIU/ml,在将该样本稀释5倍后,再次用胶体金试纸法检测,结果显示出强阳性,认定此为胶体金试纸的“钩状效应”现象[6]。出现这种现象可以从胶体金试纸双抗体夹心法无法避免的技术缺陷来考虑,样本中的待测抗原含量远高于试剂中的抗体含量,严重打破了抗原、抗体特异性结合的最适比例,导致抗体抗原复合物形成减少、解离增加,在某种意义上可归属于试纸法免疫反应失败而出现一种类似“假阴性”现象,可以通过稀释样本并重新检测来确认该现象[6-7]。与其他研究一致[8],胶体金试纸的“钩状效应”并不是所有化学发光法检测值>270 000mIU/ml的样本都会出现,只是会大概率出现在高浓度hCG水平的样本中。另有学者报道过胶体金阴性,hCG化学发光测定值却很高的现象[9]。这提示血清hCG水平极高时,有可能发生胶体金试纸法阴性或弱阳性现象,应加以关注。(3)胶体金测定4例弱阳性和1例阳性样本,经化学发光法检测均为阴性(<2mIU/ml),即胶体金“假阳性”现象。可以从以下几个方面来解释:①胶体金技术缺陷。出现假阳性情况包括但不限定与金标粒子、捕获抗体、硝酸纤维膜以及所加化学试剂都有着密切关系,主要原因可考虑为胶体金试纸不合适的表面膜、金标结合物受损、捕获抗体的疏水作用或者所带电荷[5]。另有学者在研究中发现胶体金试纸检测限越低,越易出现假阳性结果[10]。②样本因素。长期服用某种药物[11]、样本污染[5]、凝固不全、高凝状态或高浓度纤维蛋白原[12],可在检测线与胶体金颗粒形成非特异性结合,致使胶体金试纸出现假阳性。③内源性物质。因某些缘由可能检测了游离的α亚基、β-核心片段等无活性的hCG分子结构,也可能检测了与 hCG 分子结构相似或有部分同源性的FSH、LH、TSH的α亚基,转化生长因子-β,血小板源性生长因子等物质而出现胶体金假阳性现象[13-15]。而血清中存在补体[16]、嗜异性抗体[17]、RF[18]、AFP[16]等特殊物质,亦可非特异络合胶体金试纸中单克隆抗体导致假阳性结果的发生。另有研究报道称,在更年期、排卵期、双侧卵巢切除、恶性肿瘤、自身免疫疾病等特殊时期易使胶体金方法出现假阳性[1,18-19]。通过56℃孵浴[16],尿素解离试验[18],添加异嗜性抗体阻断剂[17]、表面活性剂Tween 20[20]可有效预防假阳性结果发生。某些不是很强的干扰因素可通过稀释样本而失去干扰能力。重复检测或通过替代方法同时检测血、尿hCG,在一定程度上亦可排除由于试剂和方法学原因造成的假阳性[15]。

综上所述,依据胶体金试纸测定结果在化学发光仪上选择不同检测模式的联合检测血清hCG的方法,既可以获得高准确度的结果,又可以有效降低检测成本,节约检测时间,更快回报检测结果。其实用性、经济性、高效性,值得在临床实验室中推广。同时,需要结合患者的临床表现、影像学特征及其他辅助检查进行综合考虑,有效识别检测结果的假阴性、假阳性现象,避免对临床诊治工作的误导。