我国兽药残留检测标准现状

2023-08-13王恩辉张志然

品牌与标准化 2023年4期

王恩辉张志然

【摘要】随着限量标准的更迭，我国兽药残留检测技术也在近2年陆续更新颁布与实施。本文通过比对2021版与2022版《国家食品安全监督抽检实施细则》中部分兽药残留检测标准的差异，分析不同检测标准的先进性与适用性，便于检测机构在兽药残留检测及监管部门制定抽检方案上采用正确的检测方法，确保检测报告的合规性以及检测结论的符合性。

【关键词】兽药残留；检测标准；抗生素；激素

【DOI编码】10.3969/j.issn.1674-4977.2023.04.007

Current Status of Detection Standards for Veterinary Drug Residues in China

WANG Enhui， ZHANG Zhiran*

（Yantai Standard Metrology Inspection and Testing Center， Yantai 264003， China）

Abstract： With the change of limit standards， Chinas veterinary drug residue detection technology has also been updated and implemented in the past two years. This paper compares the differences between some veterinary drug residue detection standards in the 2021 and 2022 National Food Safety Supervision and Random Inspection Implementation Rules， and analyzes the progressiveness and applicability of different detection standards， so as to facilitate the detection agencies to adopt correct detection methods in veterinary drug residue detection and the supervision departments to develop sampling inspection plans， and ensure the compliance of the detection reports and the compliance of the detection conclusions.

Key words： veterinary drug residues； testing standards； antibiotics； hormone

0引言

兽药残留是指食用动物在使用兽药后，蓄积或残存在动物机体、组织器官以及进入泌乳动物乳汁或禽蛋等农副产品中的药物原形、代谢与衍生产物的总称。其对食用动物的疾病预防与治疗，提高禽畜出栏率以及改善农副产品品质具有重要作用[1]。虽然我国根据休药期长短、兽药在动物体内的代谢周期，以及对人体的危害状况制定了兽药限用和禁用名录，但由于部分养殖户缺乏相关理论培训，在经济利益驱使下，不仅未能遵守兽药休药期的管理规定，还在施用饲料时掺杂多种兽药，导致同一农副产品中兽药残留超标且超标种类多样化的现象频发，直接影响到我国消费者舌尖上的安全以及农副产品的出口贸易[2-3]。

兽药根据作用机理主要分为抗菌治疗的抗生素类药物（四环素、磺胺、呋喃等）、降低动物外界感知提高新鲜度的精神类药物（〔盐酸〕氯丙嗪、利血平、地西泮等），以及改变新陈代谢与蛋白脂肪合成的激素类药物（克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等β-肾上腺素受体阻断剂）[4]。

兽药残留种类不同对人体的危害也不尽相同。例如抗生素类药物中的硝基呋喃与喹诺酮能改变动物细胞核中的遗传物质，使其产生位点突变；而氯霉素不仅能够引起“灰婴综合征”反应，还会造成人体再生障碍性贫血[5]。精神类药物中的地西泮通过增强抑制性神经递质，不仅会产生嗜睡的副作用，还会造成肌肉松弛，甚至是出现呼吸抑制症状[6]。激素类药物中的克仑特罗，会导致人体心律失常、甲状腺功能亢进，甚至诱发恶性肿瘤[7-8]。

为切实保护消费者的健康安全，农业农村部与国家卫健委、市场监管总局在“十三五”期间共同制定并公布了GB 31650—2019《食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量》[9]，该标准替代农业部公告第235号中的相关部分，明确了动物性农副产品中阿苯达唑等104种（类）兽药的最大残留限量；规定了醋酸等154种允许用于食品动物，但不需要制定残留限量的兽药；规定了氯丙嗪等9种允许作治疗用，但不得在动物性食品中检出的兽药。

1抗生素类药物检测标准的差异

1.1氯霉素的检测

根据2021版《国家食品安全监督抽检实施细则》规定，禽畜肉中氯霉素的检测标准有2种，分别为GB/T 22338—2008《动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定》[10]和GB/T 20756—2006《可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[11]。前者根据样品基质类型不同，采用不同的溶剂与方法进行提取（肌肉组织-乙腈震荡提取后旋蒸、内脏-酶解后乙酸乙酯-乙醚溶液提取后旋蒸、蜂蜜-乙酸乙酯震荡提取后旋蒸），并根据基质类型选用相对应的固相萃取柱进行净化；后者采用统一的乙酸乙酯溶液震荡提取，旋蒸近干后再利用正己烷清洗掉杂质，用水定容上机测试。GB/T 22338—2008能有效解决基质效应的影响且净化彻底，但由于提取过程需要针对基质类型采取不同的前处理方法，在实际操作过程中无法满足检测机构大批量产品抽检时的效率要求；GB/T 20756—2006虽然提取相对快捷，但其净化方式无法完全去除脂肪等杂质，使其对检测结果产生影响。为此2022版《国家食品安全监督抽检实施细则》增加了GB 31658.2—2021《食品安全国家标准动物性食品中氯霉素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[12]进行检测。该方法提取过程采用乙腈与氯化钠溶液震荡提取，利用水饱和的乙酸乙酯溶液進行液液分配，氮吹尽干后复溶，并利用固相萃取柱进行净化。该方法处理过程中无需考虑基质差异，且由于增加了一道液液分配程序，使其在回收率和净化程度得到提升，契合当下检测机构的使用需求。

1.2四环素类、磺胺类和喹诺酮类的检测

2021版《国家食品安全监督抽检实施细则》中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物检测标准分别为GB/T 21317—2007《动物源性食品中四环素类兽药残留量检测方法液相色谱-质谱/质谱法与高效液相色谱法》[13]、GB/T 21316—2007《动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》[14]、SN/T 1751.2—2007《进出口动物源食品中喹诺酮类药物残留量检测方法第2部分：液相色谱-质谱/质谱法》[15]、农业部1077号公告—1—2008《水产品中17种磺胺类及15种喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[16]和GB/T 21312—2007《动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法液相色谱-质谱/质谱法》[17]，其中SN/T 1751.2—2007适用于禽畜肌肉组织喹诺酮类的检测，农业部1077号公告—1—2008适用于水产品喹诺酮类的检测，而GB/T 21312—2007适用于禽畜肝脏等动物性农副产品的检测。

GB/T 21317—2007和GB/T 21312—2007在提取和净化方式较为相似，均采用EDTA-Mcllvaine缓冲溶液进行震荡提取，然后利用HLB固相萃取柱进行净化。GB/T 21316—2007在提取磺胺类药物时采用乙腈-水溶液提取，微波辐照完毕重复提取一次，利用乙腈饱和的正己烷溶液进行液液分配净化，旋蒸后复溶上机测试。SN/T 1751.2—2007和农业部1077号公告—1—2008提取均使用酸化乙腈进行震荡提取，然后利用正己烷液液分配进行净化。

从上述标准方法中可以看出针对四环素类、磺胺类和喹诺酮类的检测，各标准在提取前处理过程以及净化方式上均有相似之处。但受标准适用范围及《国家食品安全监督抽检实施细则》规定所限，检测机构在检测时需要针对这些检测项目分别进行提取和净化，提升工作量的同时也加大了试剂耗材的成本投入。针对该情况，GB 31658.17—2021《食品安全国家标准动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[18]应运而生，并被2022版《国家食品安全监督抽检实施细则》规定用于禽畜肌肉组织及其农副产品的检测。该检测方法采用Mcllvaine-Na2-EDTA溶液进行提取后，利用磷酸缓冲液重复提取一次，提取完毕利用固相萃取柱进行净化，氮吹尽干并复溶上机测试。该方法适用于多种基质类型，并通过多种缓冲溶液提取配合固相萃取净化使样本的回收率得到极大提升，不仅减少了检测机构的成本投入，也使工作效率和检测精确度得到改善。

值得注意的是水产品中四环素类药物残留检测标准在22版抽检细则中增加了GB 31656.11—2021《食品安全国家标准水产品中土霉素、四环素、金霉素和多西环素残留量的测定》[19]。该标准针对样品类型采用Na2-EDTA溶液与醋酸铅缓冲溶液提取，离心后残渣利用Na2-EDTA溶液重复提取两次，净化过程增加了乙酸乙酯液液分配（针对特殊鱼类增加2次液液分配）的步骤，利用固相萃取柱进行净化，然后氮吹后复溶上机测试。多次的提取与净化使该方法在提取效率和净化程度有不错表现，针对鳗鲡等基质复杂的水产品，检测机构可以优先采用该方法，避免基质效应对检测结果的影响。

1.3硝基呋喃类的检测

2021版《国家食品安全监督抽检实施细则》规定禽畜类硝基呋喃药物检测标准采用农业部781号公告—4—2006《动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法》[20]，而针对水产品类的硝基呋喃药物检测标准则采用农业部783号公告—1—2006《水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[21]。农业部781号公告—4—2006先采用水和冰浴甲醇对匀浆后的样品进行洗涤，该步骤主要目的是降低呋喃西林代谢物（SEM）的误判。由于SEM产生机理复杂、来源多样，可能的外源性污染途径包括偶氮甲酰胺（面粉中常见物质）、水产品的甲壳素、次氯酸钠消毒副产物、瓶盖密封垫和胶带等，通过上述方式洗涤，可有效洗去游离态代谢物，只测定结合态代谢物，降低“假阳性”误判；同时该洗涤步骤还可以去除样品中组织黏液、色素等干扰杂质，减少分析干扰，降低基质效应。洗涤后的样品加入盐酸和2-硝基苯甲醛的二甲砜溶液，37℃避光水浴16小时衍生，衍生后利用磷酸氢二钾调节pH后利用乙酸乙酯先后进行两次提取，氮气吹干后用甲醇水溶液复溶后上机测试。农业部783号公告—1—2006则是直接对匀浆后的样品加入盐酸和二硝基苯甲醛溶液，置于恒温水浴振荡16小时进行衍生，调节pH后利用乙酸乙酯先后进行两次提取，氮气吹干后用甲醇水溶液复溶后上机测试。二者除有无洗涤步骤和衍生试剂方面存在差别，在提取和净化方式较为相似。2022版《国家食品安全监督抽检实施细则》对于水产品中硝基呋喃药物的检测增加了GB 31656.13—2021《食品安全国家标准水产品中硝基呋喃类代谢物多残留的测定液相色谱-串联质谱法》[22]。该标准与农业部783号公告—1—2006相似，衍生和提取所用试剂及提取净化方式均无较大改变。

2精神类药物检测差异

2021版《国家食品安全监督抽检实施细则》规定禽畜类中氯丙嗪、地西泮等镇静剂类药物检测采用SN/T 2113—2008《进出口动物源性食品中镇静剂类药物残留量的检测方法液相色谱-质谱/质谱法》[23]。该标准采用乙腈提取，HLB固相萃取柱净化，然后使用酸化乙腈进行洗脱，最后氮吹尽干并复溶上机测试。2022版《国家食品安全监督抽检实施细则》没有推荐新的检测标准，但GB 31656.4—2021《食品安全国家标准水产品中氯丙嗪残留量的测定液相色谱-串联质谱法》的实施[24]，使水产品中氯丙嗪检测有了基质适用的检测标准，针对风险评价和安全性抽检过程中水产品中氯丙嗪的检测可以采用该标准进行检测和评估。该标准与SN/T 2113—2008相比，在提取过程中增加了乙腈二次提取残渣的過程，并在固相萃取柱净化后的洗脱液和复溶液的选择上从酸化乙腈与水改变为氨化甲醇与甲醇乙酸铵溶液，提高了洗脱效率的同时，增加了离子电离度，使样本回收率和检测限得到改善。

3激素类药物检测差异

克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺等β-受体激素在《国家食品安全监督抽检实施细则》中一直使用GB/T 22286—2008《动物源性食品中多种β-受体激动剂残留量的测定液相色谱串联质谱法》[25]方法检测。该标准利用乙酸钠缓冲液与β-葡萄糖醛苷酶进行37℃水浴酶解12小时，然后调节pH至1.0左右，离心后收集全部上清液，将收集的液体调节pH至11左右，用饱和氯化钠溶液（调节极性）与异丙醇-乙酸乙酯混合溶液进行液液分配，待提取物质充分进入有机相，取全部有机溶剂，氮气吹干用乙酸钠缓冲液进行复溶，利用离子交换柱进行净化，然后利用氨化甲醇洗脱，氮吹复溶上机测试；GB 31658.22—2022《食品安全国家标准动物性食品中β-受体激动剂残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[26]，于2023年2月替代GB/T 22286—2008实施。该标准采用乙酸铵缓冲液与β-葡萄糖醛酸酶/芳基硫酸酯酶解16 h，用高氯酸调节pH至1.0左右，离心后将上清液用氢氧化钠调节pH至10左右，先后利用乙酸乙酯和叔丁基甲醚进行两次液液分配，取上清液氮吹干后用甲酸溶液溶解，用离子交换柱进行净化，氨化甲醇洗脱，然后氮吹复溶上机测试。这种检测增加了酶解时间和液液分配的次数，使提取效率、提取种类、净化程度都大幅提高。

此外，GB 31656.14—2022《食品安全国家标准水产品中27种性激素残留量的测定液相色谱-串联质谱法》[27]适用于水产品基质类型激素检测标准。该标准与GB 31658.22—2022在提取与净化方式上存在较大差别，针对水产品特点省去了酶解步骤，样品粉碎后加入乙酸铵溶液，先后采用乙酸乙酯-甲基叔丁基醚混合溶液和乙酸乙酯进行两次液液分配提取，有机相氮吹干后加入正己烷复溶，采用C18固相萃取柱净化，然后复溶上机测试。这种检测方法弥补了水产品基质激素检测的空白，同时针对样品类型节省了酶解时间，并兼顾了GB 31658.22—2022在提取与净化效率的优点。

4结束语

随着兽药残留检测标准的不断完善与更新，我国兽药残留前处理方法逐步向操作简便、适合多种基质类型、一次提取适合多种药物的提取以及高度净化的方向发展；在仪器设备的选用上，也逐渐向高灵敏度、高分辨率、高分析效率的三重四级杆液相色谱串联质谱统一。检测机构在承担政府抽查任务时，在确保检测的样品回收率、基质适用性以及检測效率的同时，要注意所选用的方法应被GB 31650—2019以及《国家食品安全监督抽检实施细则》所允许或推荐，确保检测报告的合规性，防止结论被推翻。因此，期望相应的监管部门在制定《国家食品安全监督抽检实施细则》的过程中，能够选用适用多种基质类型同时提取检测多种药物的检测方法，不仅能提高检测效率与精确度，也能切实降低检测机构运行成本，进而推进抽检任务高质量地完成。

【参考文献】

[1]李红丽.QuEChERS-UPLC-MS/MS同时测定动物性食品中24种残留兽药方法及基质效应的研究[D].重庆：西南大学，2020.

[2]孙晓峥，孙晓军，翟莲，等.浅谈兽药滥用的危害性及防控措施[J].畜牧兽医科技信息，2018（10）：12-14.

[3]龙木措.浅谈畜禽产品兽药残留危害现状与分析[J].中国畜禽种业，2019，15（4）：69.

[4]赵云峰，周爽.加强农残兽残检测技术研究保障食品安全[J].食品安全质量检测学报，2013，4（1）：1-2.

[5]王悦，隋颖.动物源性食品中兽药残留的危害及控制策略[J].食品界，2021（7）：112.

[6]赵东辉，张继.畜禽产品兽药残留危害及检测技术研究进展[J].兽医导刊，2021（13）：141-142.

[7]刘二花，刘松雁.畜产品兽药残留的危害及检测方法[J].今日畜牧兽医，2021，37（6）：1，31.

[8]周迎春，刘少博，华向美.我国动物源性食品中兽药残留的危害及现状[J].粮食与油脂，2021，34（6）：18-20.

[9]食品安全国家标准食品中兽药最大残留限量：GB 31650—2019[S].

[10]动物源性食品中氯霉素类药物残留量测定：GB/T 22338—2008[S].

[11]可食动物肌肉、肝脏和水产品中氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考残留量的测定液相色谱-串联质谱法：GB/T 20756—2006[S].