地黄块根菊花心直径与其总苯乙醇苷成分含量相关性分析

耿晓桐，刘琦，花娇娇，赫丁轩，乔新荣

（信阳农林学院，河南信阳 464000）

地黄，始载于《神农本草经》，“四大怀药”之一，为玄参科地黄属地黄（Rehmannia glutinosa）的新鲜或干燥块根[1]，种植区域广泛，对免疫、造血、心血管、神经系统有显著疗效，广泛用于临床疾病的辅助治疗[2-5]。《本草原始》记载，“入药惟怀庆熟地黄最优”[6]；《本草纲目》记载，“江浙壤地黄者，受南方阳气，质虽光润机时力微；怀庆府产者，禀北方纯阴，皮有疙瘩而力大”及“今人惟以怀庆地黄为上”[7]。以上典籍记录，充分说明了怀地黄的道地性。

历代文献记载中均以地黄横切面是否有菊花心作为评判其道地性的标准[8]。菊花心为地黄块根木质部，剩余的皮部与次生韧皮部则为非菊花心部位，道地产区的地黄块根中普遍具有菊花心[9]。总苯乙醇苷是地黄中主要活性成分，但有关地黄菊花心、非菊花心部位中总苯乙醇苷类成分含量是否有显著差异并无相关研究，基于此，本试验对不同生育时期的两个种质怀地黄（沁怀、1706）的菊花心、非菊花心部位中总苯乙醇苷类成分含量进行分析，为怀地黄种质资源优选、质量评价及地黄道地性的判断提供依据。

1 材料与方法

1.1 仪器

KQ-500DE 型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；TU-1810 紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司。

1.2 试剂

甲醇，分析纯，天津奥普升化工有限公司；毛蕊花糖苷对照品，≥99%，批号E2007133，上海阿拉丁生化科技股份有限公司。

1.3 药材

本试验所用药材来自河南省焦作市温县怀地黄种植基地，于2022 年6—11 月（7 月10 日、8 月2 日、8 月21 日、9 月10 日、9 月30 日、10 月10 日、10月21 日、10 月31 日、11 月11 日）采收整体块根样品，其中9—11 月采收的2 个种质的部分新鲜地黄块根切分为菊花心与非菊花心两部分。

1.4 试验方法

1.4.1 总苯乙醇苷类成分含量测定

（1）供试品溶液。取地黄药材样品约1.0 g，加60%甲醇溶液50 mL，超声（220 W）处理30 min后，用60%甲醇补足缺失的质量，滤过；取续滤液1.0 mL，置10 mL 容量瓶，60%甲醇定容至刻度，得供试品溶液。取供试品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，60%甲醇定容至刻度，并以60%甲醇溶液作为空白对照，于332 nm 处测定吸光度。

（2）对照品溶液。取毛蕊花糖苷对照品3.72 mg于10 mL 容量瓶，60%甲醇定容至刻度，60%甲醇分别稀释配制成0.037 2 mg/mL、0.029 8 mg/mL、0.023 8 mg/mL、0.019 0 mg/mL、0.012 2 mg/mL、0.006 2 mg/mL 的对照品溶液。以60%甲醇溶液作为空白对照，于332 nm 处测定吸光度，以浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，进行标准曲线拟合。回归方程为Y=23.149 8X+0.009 9（R2=0.999 9），在试验浓度内呈现良好的线性关系。

1.4.2 方法验证

（1）精密量取同一供试品溶液连续测定6 次，记录吸光度，计算精密度试验RSD 值。

（2）精密称定同一样品6 份，制备供试品溶液，进行含量测定，记录吸光度，计算重复性试验RSD 值。

（3）取同一供试品溶液，分别在制备后0.0 h、0.5 h、1.0 h、2.0 h、3.0 h、4.0 h 连续测定6 次，记录吸光度，计算稳定性试验RSD 值。

（4）精密称取已知含量样品，平行称定6 份，每份0.500 0 g，加入同等质量的对照品后按照1.4.1 项下（1）供试品溶液方法进行制备，测其吸光度，记录加样回收率试验RSD 值。

1.4.3 两个种质地黄生育期内菊花心表型性状测定及相关性分析

用陶瓷刀横切去掉地黄两头的块根，保留中间部位，分别用直尺测量菊花心部位的直径大小，并利用Ecxcl 2019 对两个种质地黄生育期内菊花心部位的直径大小与其总苯乙醇苷类成分含量之间的相关性进行分析。

2 结果与分析

2.1 方法验证结果

精密度试验、重复性试验、稳定性试验RSD 值分别为0.10%、0.72%、3.26%，说明仪器精密度良好、方法重复性良好、供试品溶液在制备4 h 之内稳定。加样回收率试验结果表明，平均加样回收率为98.22%，RSD 为1.72%。本测定方法各指标良好，可用于地黄总苯乙醇苷类成分含量的测定。

2.2 总苯乙醇苷类含量分析

由图1 可知，两个种质地黄菊花心部位总苯乙醇苷类成分含量明显高于非菊花心部位。两个种质地黄菊花心、非菊花心及整体块根中总苯乙醇苷类成分含量变化趋势基本相同，其中沁怀地黄总苯乙醇苷类成分含量在测定时期内缓慢上升，至10 月31 日出现高峰，后显著降低；1706 地黄总苯乙醇苷类成分含量在测定时期内缓慢上升，至10 月10 日出现高峰，后显著降低。

图1 两个种质地黄总苯乙醇苷含量趋势图

2.4 菊花心表型性状与总苯乙醇苷含量相关性分析

分析表1 可知，随着地黄块根的膨大，两个种质地黄菊花心直径大小表现相对一致，即9 月10 日至10 月31 日逐渐增大，10 月31 日后有减小趋势；1706 地黄菊花心部位直径大于沁怀地黄，说明在一定环境中地黄种质的内在基因决定了菊花心的特征，这与朱建光等[10]研究结果一致；两个种质地黄菊花心总苯乙醇苷含量与其直径存在显著正相关，说明菊花心作为药商鉴定地黄道地性的标准具有可行性[9]。

表1 两个种质地黄菊花心直径及其与总苯乙醇苷含量相关性

3 结论

为了阐明地黄菊花心的特征与其质量的相关性，本研究选取了河南道地产区温县外观性状不同的两个种质主栽地黄为对象。结果表明，两个种质地黄菊花心直径存在明显的差异，说明在一定环境中地黄种质内在基因决定了菊花心特征。其次，在地黄生育期内，菊花心直径大小与总苯乙醇苷含量呈正相关，地黄菊花心的大小可用于初步衡量其总苯乙醇苷含量的高低。未来，本研究组将对多种质地黄菊花心部位总苯乙醇苷含量和其直径之间的关系进行深入研究，进一步探讨菊花心形成的内在及外在原因，为地黄的品种鉴别及道地性揭示提供依据。