新型gRNA文库高通量合成技术

2023年3月20日，浙江大学医学院附属第一医院郑敏教授与张龙教授团队合作在《核酸研究》（Nucleic Acids Research）在线发表了题为“A new method to synthesize multiple gRNA libraries and functional mapping of mammalian H3K4me3 regions”的研究论文（DOI： 10.1093/nar/gkad198）。

研究报道了一种可逆终止子技术整合入gRNA文库合成工作的可控模板依赖延伸（CTDE）方法。研究人员将CTDE方法应用于染色质免疫沉淀获得的组蛋白H3K4me3区域的DNA，构建了大规模的gRNA文库，筛选并确定了哺乳动物细胞增殖必需位点的功能元件。最后选取一个重要的功能区域进行深入研究，证实了LINC00339内含子中的一个必要位点能够调节其自身信使RNA的表达，并且该长链非编码RNA是维持HepG2细胞增殖的新型细胞周期调控基因。CTDE方法具有高效率、低成本和可自动化等显著优势，可广泛应用于哺乳动物基因组中功能元件的鉴定和研究。

潘辰、李然、水丽艳博士研究生和肖政云助理研究员为论文第一作者。研究得到国家自然科学基金、浙江省重点研发项目等资助。