湖南省精液常规检验室间质量评价体系的初步建立*

伍细言,李维娜,贺景亮,吴慧兰,朱文兵,陆金春(.湖南省妇幼保健院生殖医学中心,长沙0008;2.中信湘雅生殖与遗传专科医院 a.男科学部,b.人类精子库,长沙022;.中南大学湘雅医院生殖医学中心,长沙 0008;.东南大学附属中大医院生殖医学中心,南京2007)

精液检验是评估男性生育力的基本项目,通过精液检验室间质量评价(质评)可提高精液分析结果的准确性。有专家呼吁建立各省市的精液检验质量管理机构或者在全国范围内建立精液检验的质量管理中心[1-2],但由于男性精液样本及检验过程的特殊性,目前国家卫生健康委临床检验中心室间质评项目中无精液检验项目,仅有少数地区如四川省[2]、广东省[3]等进行了部分精液检验项目的室间质评的初步探索。精液检验室间质评未形成有效方案,缺乏权威的精液检验室间质评机构,精液检验能力尚需加强。研究显示,我国参加精液检验室间质评的实验室比例小,绝大多数精液检验项目缺乏有效的质控措施,质控品与实际检验样本差异较大,质控品和实际检验流程明显不同,各实验室参评结果偏倚大等问题[2-5]。

精液检验项目包括精液常规、精子形态学、精浆生化、精子功能以及泌尿生殖道感染、脱落细胞、遗传学检验等[4],其中精液常规检验主要包括精子浓度和活力,是目前男性不育诊断及治疗的最经典项目。考虑到湖南省是第一次进行精液检验室间质评,经湖南省医学会男科学组会议讨论,决定通过开展精液常规检验室间质评活动,探索建立湖南地区精液常规检验室间质评体系,从而提高湖南地区整体精液常规检验水平。

1 资料与方法

1.1参评实验室 湖南省医学会生殖医学专业委员会生殖男科学组组成单位共20家生殖男科实验室参与本次室间质评,涵盖湖南地区9个市(长沙市、株洲市、湘潭市、常德市、衡阳市、岳阳市、郴州市、娄底市及邵阳市)。

1.2精子浓度评价 精子浓度质控品为乳胶质控珠(广州华粤行医疗科技公司提供),批内变异系数(coefficient variation,CV)、批间CV经参比实验室验证,批号分别为 C202201～C202204。各实验室收到质控品后室温保存,使用前混匀,取样后及时加盖盖好,精子浓度统一以n×106/mL回报。

1.3精子活力评价 精子活力质控品为精液活力视频,选取4份(No.1～No.4)不同活力级别的精液标本,采用计算机辅助精子分析(computer-aided sperm analysis,CASA)分别录制数个30 s的视频,录制视频数(即采集视野数)以能评估到至少200个精子为限,每个质评样本包括有带Makler网格和不带网格两种,采用CASA的参评实验室分析不带网格的M202201、M202203、M202205、M202207视频,采用手工法的参评实验室分析带网格的M202202、M202204、M202206、M202208视频。精子活力以《WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen》第5版方法为标准分成以下3类:(1)前向运动型(progressive motility,PR):精子运动活跃、线性运动或者在较大的范围内运动(不考虑运动的速度);(2)非前向运动型(non-progressive motility,NP):精子运动但不活跃,如精子在较小的范围内运动,精子头部轻微移位或仅有鞭毛摆动;(3)不活动型(immotility,IM):精子完全不动[6]。精子活力结果以各类型精子PR、NP和IM的百分率(%)回报。

1.4质控品发放 全年8个批号(浓度及活力各4个)的质控品分2次发放,将精子浓度质控品乳胶珠统一通过快递形式发放给参评单位,精子活力视频通过学组质评微信群网络发放,在收到质控品的1周内按照各自实验室日常精液常规检验方法分析并反馈结果。

2 结果

2.1检验方法比较 各实验室中精子浓度和活力检验使用最多的方法均为CASA检验,见表1。

表1 实验室检验方法及计数板类型结果比较[n(%)]

2.2精子浓度及活力基本参数 各实验室精子浓度及精子活力结果经Shapiro-Wilk正态性检验,大部分不符合正态分布,因而各计量数据统一以M(P25,P75)表示。精子浓度及活力结果见表2。

表2 精子浓度及活力基本参数

2.3精子浓度结果比较 4个精子浓度质控品检验结果基本统计参数见表2。精子浓度满意结果为13家(13/20,65%);可疑结果2家(2/20,10%);离群结果共5家(5/20,25%)。在不同的方法对比中,CASA法1家(1/14,7.14%)可疑,3家(3/14,21.43%)离群;优于手工法1家(1/6,16.67%)可疑,2家(2/6,33.33%)离群,见表3。

表3 实验室精子浓度能力验证结果

2.4精子活力结果比较 4个精子活力质控品检验结果基本统计参数见表2。其中满意结果为6家(6/20,30%),可疑7 家(7/20,35%),离群结果共6家(6/20,30%),1家(1/20,5%)未回报第一次活力结果。分方法来看,CASA法可疑50%(5/10),离群40%(4/10),劣于手工法的可疑20%(2/10),离群20%(2/10)。见表4。

表4 实验室精子活力能力验证结果

2.5精液常规室间质评结果 参评实验室PT综合得分及年度评价结果见表5,合格率(PT≥80%)为55%(11/20),不合格率(PT<80%)为45%(9/20)。

表5 参评实验室年度PT评价结果

3 讨论

男性精液常规检验作为评估男性生育力最基本的检验项目,在男性不育的诊断、治疗和科研中具有极其重要的作用[9-10]。与其他检验项目比较,精液样本为男性性活跃后的产物,具有收集困难、黏稠度高、非匀质特点,且精子的活动能力受温度及排出时间的影响,导致检验结果CV值大,实验室间可比性差[11-13]。

20个参评实验室精子浓度CV值分别为13.47%～21.79%,与比利时文献中的19.2%[14]较接近,较四川省的29.84%[2]、广东省的34.09%[3]降低,可能与其采用混合精液作为精子浓度质控物,在制备和分装及检验过中程存在非特异性聚集、分布不均有关。

4个活力质控品中PR-CV值分别为5.65%～20.76%,IM-CV值分别为5.50%～8.80%,与吴应碧等[2]的18.30%和12.97%、周芳等[11]的8.36%～21.78%较接近,这可能与本研究均采用视频作活力质评,无需分析前处理,降低了检验误差有关。NP-CV值分别达31.36%～59.30%,正常情况下精液样本中该部分精子所占比例较低,可能与取样误差以及检验人员误识别有关。NP作为非前向运动精子,其定义为精子运动但不活跃,如以小圆周泳动,尾部动力几乎不能驱使头部移动,或者只能观察到尾部摆动[6],因而亟需对实验室技术人员进行标准化培训,提高湖南地区各实验室精液分析水平。

参评实验室能力验证结果中同一项目偏倚方向可提示该实验室是否存在系统误差,比如3、6、11实验室分别只有1个浓度的结果离群,可能存在样本混均、取样的随机误差,建议工作人员仔细混均样本,定量取样,保证计数池的均一性和代表性;1、10、18高低浓度偏倚方向一致,可能存在系统误差,应在计数板、CASA参数设置等方面查找离群或可疑的原因并制定措施纠正。CASA较手工法NP、IM可疑及离群结果较多,可能与各实验室使用的CASA分析原理[15]、去除杂质能力,精子运动参数设置,以及CASA视频帧率和放大倍率,质控视频清晰度、录制格式是否通用等有关。

作为湖南地区首次开展精液常规的室间质评活动,虽然参评实验室规模有限、项目也局限于精液常规,PT评价合格率较低,但验证了通过Robust稳健统计法评价生殖男科实验室的精液常规检验能力可行,为全面推广精液检验室间质评做出了有益尝试。