p16、Ki-67在子宫内膜癌组织中的表达及与患者预后的关系

黄艳艳，贾利萍，娄雪玲

1安阳市第六人民医院妇科，河南 安阳 455000

2郑州大学第三附属医院妇科，郑州 450000

子宫内膜癌是常见的恶性肿瘤，近年来发病率逐年上升，且越来越年轻化[1]。多项研究指出，与其他生殖系统恶性肿瘤相比，子宫内膜癌患者的预后相对较好，这是由于早期子宫内膜癌患者会出现不规则的阴道出血症状，使得多数患者可在早期确诊，预后一般较好[2-3]。但研究显示，早期子宫内膜癌的复发率超过10%，仍会威胁女性生命健康[4]。目前，临床对于子宫内膜癌的发病原因及机制并未完全清楚，分子生物学研究指出，抑癌基因失活和突变与癌基因的非正常激活可能在肿瘤的发生、发展中发挥重要作用[5]。子宫内膜癌相关的癌基因p16在多种恶性肿瘤中均有所表达；原癌基因Ki-67是细胞核相关抗原，可参与DNA 合成、细胞增殖等过程。基于此，本研究探讨p16、Ki-67 在子宫内膜癌中的表达及与患者临床特征和预后的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018 年2 月至2020 年1 月安阳市第六人民医院收治的子宫内膜癌患者。纳入标准：①经病理学检查证实为子宫内膜癌；②存在阴道不规则流血、排液等症状；③术前未接受过放化疗；④临床资料完整。排除标准：①合并其他类型恶性肿瘤；②合并凝血异常；③合并心、肝、肺等功能障碍；④存在其他类型严重妇科疾病。依据纳入和排除标准，本研究共纳入89 例子宫内膜癌患者，年龄33～71 岁，平均（53.68±5.79）岁。另选取同期在安阳市第六人民医院进行子宫切除的75 例子宫肌瘤患者，年龄36～68 岁，平均（55.21±6.43）岁。两组患者年龄比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。本研究经医院伦理委员会批准通过，所有患者均知情同意。

1.2 免疫组化法检测两组患者的p16、Ki-67 表达情况

取89 例子宫内膜癌患者的子宫内膜癌组织和75 例子宫肌瘤患者的正常子宫内膜组织，石蜡包埋和切片，二甲苯脱蜡，乙醇脱水，采用链霉抗生物素蛋白-过氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）法检测p16、Ki-67 表达情况。滴加鼠抗人p16 多克隆抗体、鼠抗人Ki-67 多克隆抗体，稀释浓度均为1∶100，以磷酸盐缓冲液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作阴性对照，二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，显微镜下观察。判定标准：依据阳性细胞所占比例及染色强度进行评分[6-7]：无阳性细胞计0 分，阳性细胞所占比例＜11%计1 分，阳性细胞所占比例11%～50%计2 分，阳性细胞所占比例＞50%计3 分；无着色计0 分，淡黄色染色计1 分，棕黄色染色计2 分，棕褐色染色计3 分。将阳性细胞所占比例评分和染色强度评分相乘，≤3 分为阴性，≥4 分为阳性。

1.3 随访

采用门诊、电话等方式对两组患者进行为期2年的随访，记录患者的预后情况。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件对所有数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差（±s）表示，组间比较采用t检验；计数资料以例数和率（%）表示，组间比较采用χ2检验；子宫内膜癌患者预后的影响因素采用Logistic 回归模型分析；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 p16、Ki-67 表达情况的比较

子宫内膜癌组织中p16的阳性表达率低于正常子宫内膜组织，Ki-67 的阳性表达率高于正常子宫内膜组织，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表1）

表1 子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织中p16、Ki-67表达情况的比较[n（%）]

2.2 不同临床特征子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中p16、Ki-67 表达情况的比较

不同年龄、肌层浸润深度子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中p16 蛋白阳性表达率比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；国际妇产科联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，FIGO）分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化、有淋巴结转移子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中p16蛋白的阳性表达率分别低于FIGO 分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化、无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。不同年龄子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中Ki-67 蛋白的阳性表达率比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；FIGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化、有淋巴结转移、肌层浸润深度＞1/2 子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中Ki-67 蛋白的阳性表达率分别高于FIGO 分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化、无淋巴结转移、肌层浸润深度≤1/2 的患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。（表2）

表2 不同临床特征子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中p16、Ki-67 表达情况的比较

2.3 子宫内膜癌患者预后的影响因素分析

术后随访2 年，89 例子宫内膜癌患者死亡24例，生存65 例。单因素分析结果显示，FIGO 分期、分化程度、淋巴结转移情况、p16 表达情况、Ki-67表达情况均可能与子宫内膜癌患者的预后有关（P＜0.05）；多因素分析结果显示，FIGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化、有淋巴结转移、p16 阴性表达、Ki-67 阳性表达均为子宫内膜癌患者预后的独立危险因素（P＜0.05）。（表3）

3 讨论

子宫内膜癌是生殖系统常见的恶性肿瘤，其病变主要位于子宫内膜上皮，好发于中老年女性[8]。目前，子宫内膜癌的发病原因尚未完全明确，但有研究指出，其发病与高龄、激素药物滥用及肥胖有一定关系[9]。随着医学技术的进步，临床对于子宫内膜癌的诊治取得了较大进展，早期子宫内膜癌患者采取手术治疗的生存率高达90%，但中晚期患者的生存率仍相对较低[10]。研究指出，准确判断子宫内膜癌的生物学行为及患者的预后情况，并给予针对性治疗，对改善患者的预后尤为重要[11]。

p16基因为抑癌基因的一种，其表达产物p16蛋白为细胞周期蛋白依赖性激酶（cyclin dependent kinase，CDK）4/6 的抑制剂，能对细胞周期发挥负向调节作用，抑制细胞恶性增殖。本研究结果显示，子宫内膜癌组织中p16 蛋白的阳性表达率低于正常子宫内膜组织，提示p16 可能在子宫内膜癌的发生、发展过程中发挥重要作用。这可能是因为p16基因突变可导致细胞周期蛋白D1（cyclin D1）/CDK6、CDK4/磷酸化视网膜母细胞瘤蛋白（phosphorylated retinoblastoma protein，pRb）/转录因子2（transcription factor 2，E2F）通路失调，从而引起细胞过度增殖，引起肿瘤[12]。此外，本研究结果显示，FIGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化、有淋巴结转移子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中p16蛋白阳性表达率分别低于FIGO分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化、无淋巴结转移患者，差异均有统计学意义（P＜0.05）。有研究指出，p16 是评估肿瘤性质及患者预后的重要指标[13]。本研究进一步分析发现，p16 阴性表达是子宫内膜癌患者预后的独立危险因素，p16可用于评估子宫内膜癌患者的预后。

Ki-67 是一种主要存在于增殖细胞核内的非组蛋白核蛋白，其在细胞增殖的G1、S、G2和M 期中均有所表达，但在G0期不表达[14]。研究指出，Ki-67 在细胞分裂的不同阶段的表达情况不同，使其对于反映细胞分裂增殖状态有重要意义，故推测可将其作为检测肿瘤细胞增殖活性的可靠指标[15]。本研究结果显示，子宫内膜癌组织中Ki-67 的阳性表达率高于正常子宫内膜组织，表明Ki-67 在子宫内膜癌组织中异常表达，可能与子宫内膜癌的发生有密切关系。进一步分析发现，FIGO 分期为Ⅲ～Ⅳ期、分化程度为中低分化、有淋巴结转移、肌层浸润深度＞1/2 子宫内膜癌患者子宫内膜癌组织中Ki-67 蛋白阳性表达率分别高于FIGO 分期为Ⅰ～Ⅱ期、分化程度为高分化、无淋巴结转移、肌层浸润深度≤1/2 患者，差异均有统计学意义（P＜0.05），提示Ki-67 可能参与子宫内膜癌的发生、发展过程。相关研究结果显示，Ki-67 与恶性肿瘤发生发展、转移有关。本研究发现，Ki-67 阳性表达是子宫内膜癌患者预后的独立危险因素，或可将Ki-67 作为评估子宫内膜癌患者预后的潜在指标。

综上所述，p16、Ki-67 在子宫内膜癌组织中表达异常，p16 阴性表达、Ki-67 阳性表达均为子宫内膜癌患者预后的独立危险因素，可作为预测子宫内膜癌患者预后的分子标志物和潜在治疗靶点。