广西血站献血者RhD阴性稀有血型检测、资料库构建及红细胞实体库运行情况调查▲

李雄英 周 兵 刘振北 徐阳曦 覃美健

(广西血液中心输血研究室,广西柳州市 545005)

Rh血型系统是临床输血重要性仅次于ABO血型的第二大血型系统,而D抗原是Rh抗原中免疫原性最强的抗原,也是最具有临床意义的抗原。根据红细胞上是否有RhD抗原,Rh血型系统可分为RhD阳性和RhD阴性。RhD阴性在我国汉族人群中占比仅为0.2%～0.5%,属于稀有血型[1]。由于血源稀缺,临床上经常遇到RhD阴性患者在急救时无法及时输注RhD阴性血液的难题。血站是不以营利为目的,采集、提供临床用血的公益性卫生机构,保障RhD阴性患者这一特殊群体安全、及时、有效输血是血站重要的工作任务。本研究调查广西血站献血者Rh血型相关项目检测、RhD阴性献血者资料库构建及RhD阴性红细胞实体保存库运行的情况,为提高广西区内血站RhD阴性稀有血型血液保障能力提出合理的建议和方案,现报告如下。

1 对象与方法

1.1 调查对象 于2020年11月对广西14家血站展开调查,包括1家血液中心和13家中心血站。

1.2 调查内容 自制调查问卷,内容主要有:(1)开展献血者Rh血型相关项目检测(RhD阴性初筛和确认试验、不规则抗体筛查、Rh表型鉴定)、构建RhD阴性献血者资料库(个人信息资料库和Rh表型数据库)及RhD阴性红细胞实体保存库(冷藏库和冷冻库)的情况;(2)RhD阴性初筛及确认试验采用的方法和试剂;(3)近4年(2017—2020年,其中2020年为1—11月数据)RhD阴性红细胞采集、临床供应及各血站之间RhD阴性红细胞调剂情况。本次调查的红细胞类制剂包括全血、去白细胞悬浮红细胞、洗涤红细胞、冰冻解冻去甘油红细胞等。红细胞采集量、临床供应量、调剂量均以单位(U)计算,其中200 mL全血为1 U全血,200 mL全血制备的去白细胞悬浮红细胞为1 U去白细胞悬浮红细胞,1 U去白细胞悬浮红细胞制备的洗涤红细胞、冰冻解冻去甘油红细胞分别为1 U洗涤红细胞、1 U冰冻解冻去甘油红细胞。

1.3 调查方法 将电子版问卷通过电子邮箱发送至各血站,血站相关业务科室的人员填写完成后将问卷发回至电子邮箱。对调查问卷内容填写不全或有疑问之处,由本文作者通过电话方式询问确认。最后对所有数据进行汇总并进行描述性统计。

2 结 果

2.1 14家血站开展献血者Rh血型相关项目检测、构建RhD阴性献血者资料库及红细胞实体保存库的情况 14家血站均开展了RhD阴性初筛和确认试验,并构建RhD阴性献血者个人信息资料库及RhD阴性红细胞实体冷藏库;有6家(42.9%)血站开展了不规则抗体筛查,7家(50.0%)血站开展了Rh表型鉴定,6家(42.9%)血站构建了RhD阴性献血者Rh表型数据库,仅2家(14.3%)血站构建了RhD阴性红细胞实体冰冻库。

2.2 14家血站开展RhD阴性初筛试验所采用的方法和试剂 14家血站均采用全自动微量板盐水法,使用1个批次的单克隆IgM抗-D定型试剂进行RhD阴性初筛试验。

2.3 14家血站开展RhD阴性确认试验所采用的方法和试剂 14家血站均采用血清学方法对初筛为RhD阴性的标本进行确认试验,大多数(11家)血站结合2种或3种方法进行检测,见表1。14家血站进行RhD阴性确认试验时选用的试剂共有3种类型,包括IgM抗-D试剂、IgG抗-D试剂和IgM+IgG抗-D试剂,均为单克隆抗体。 有8家(57.1%)血站采用3～5个不同厂家或不同批次的抗-D试剂进行RhD阴性确认试验;6家(42.9%)血站仅采用1～2个批次抗-D试剂进行RhD阴性确认试验。

表1 14家血站进行RhD阴性确认试验时采用的血清学方法

2.4 2017—2020年14家血站RhD阴性红细胞采集及临床供应情况 2017—2020年,广西全区RhD阴性红细胞年总采集量和年总临床供应量呈波动变化趋势,每年年总采集量均远大于年总临床供应量。不同血站的年总采集量和年总临床供应量变化趋势不同,地区差异较大;大多数血站的年总采集量大于年总临床供应量。见表2。

表2 2017—2020年14家血站RhD阴性红细胞采集及临床供应情况(U)

2.5 2017—2020年14家血站之间RhD阴性红细胞调剂情况 2017—2020年,广西全区RhD阴性红细胞调剂总量(调入量与调出量之和)呈波动变化趋势,总体调剂活动较为活跃。各血站间具体调剂情况个体差异较大。见表3。

表3 2017—2020年14家血站之间RhD阴性红细胞调剂情况(U)

3 讨 论

我国《血站技术操作规程(2019版)》规定,当献血者初筛检测为RhD阴性时需进一步进行阴性确认试验以排除弱D型[2]。第4版《全国临床检验操作规程》对弱D型鉴定试验的要求是使用单克隆或多克隆IgG抗-D试剂并采用抗人球蛋白试验法(试管抗人球蛋白法或微柱凝胶抗人球蛋白法)进行确认[3]。本调查结果显示,针对初筛为RhD阴性的献血者,广西区内14家血站均按照规定采用血清学方法进行RhD阴性确认试验,但是各血站采用的方法和抗-D试剂批次有所不同。有13家血站采用抗人球蛋白试验法(12家采用试管抗人球蛋白法和1家采用微柱凝胶抗人球蛋白法)进行RhD阴性确认试验,其中部分血站还联合采用其他方法(试管盐水法、酶法、聚凝胺法);有1家血站仅使用1个批次IgM+IgG抗-D试剂采用试管盐水法进行RhD阴性确认试验,并未进一步采用抗人球蛋白试验法。弱D型红细胞在盐水介质中与大多数IgM抗-D试剂不发生凝集,但是在抗人球蛋白试验中与IgG抗-D试剂发生凝集。有学者采用不同方法对96例初筛RhD阴性的样本进行确认试验,发现试管盐水法未能检出弱D型红细胞,而其他方法(试管抗人球蛋白法、聚凝胺法、微柱凝胶抗人球蛋白法)对弱D型红细胞的检出率为12.5%～15.6%[4]。据此,笔者认为仅仅采用试管盐水法进行RhD阴性确认试验存在漏检风险,为输血安全埋下隐患。另外,每个D抗原决定簇由30多个D抗原表位组成[5],通常1个批次的抗-D试剂只含有若干个D抗原位点相应的抗体,不包含所有D抗原位点相应的抗体。因此在RhD阴性确认试验中,宜选用多个不同厂家或不同批次的 IgG抗-D试剂进行检测,以尽可能多地识别不同D抗原表位。综上所述,笔者建议,对于初筛RhD阴性的献血者样本,仅仅采用试管盐水法进行RhD阴性确认试验的血站,应进一步采用含有IgG抗-D的试剂进行抗人球蛋白试验,以提高弱D型红细胞的检出率,且宜采用3～5个不同厂家或批次的IgG抗-D试剂及联合应用多种方法进行确认,以保证结果的准确性。

我国RhD阴性血源稀少,如何保障RhD阴性稀有血液供应,解决临床上对稀有血型血液的迫切需求,减少输血不良反应的发生,提高输血疗效,一直是血站面临的棘手难题,也备受社会关注。对于血站而言,目前保障稀有血型患者输血的主要方法是应用事先保存的稀有血型血液及紧急动员稀有血型者献血。因此,建立稀有血型库是保证临床稀有血型血液供应的重要措施和手段。广西区内14家血站除了常规筛查RhD阴性献血者,还利用血站信息管理系统建立了详细的RhD阴性献血者个人信息资料库。这对于本地区RhD阴性血型分布情况的掌握、献血者的招募、临床供血的保障,都具有重要意义。广西区内部分血站在建立RhD阴性献血者个人信息资料库的基础上,还开展了不规则抗体筛查、Rh表型鉴定、RhD阴性献血者Rh表型数据库构建、冰冻解冻去甘油红细胞制备等工作。不规则抗体筛查可以有效避免溶血性输血反应和新生儿溶血病的发生;鉴定Rh表型、构建RhD阴性献血者Rh表型数据库,有利于为存在除抗-D以外其他Rh抗体的RhD阴性患者匹配Rh血型相合血液,为安全、及时、有效的临床供血提供保障;开展制备和保存RhD阴性冰冻红细胞工作,可以将红细胞保存期延长至10年,既可以避免宝贵的RhD阴性血液资源的浪费,又可以应对临床紧急输血,有利于解决血液供需矛盾。尚未开展RhD阴性献血者的不规则抗体筛查、Rh表型鉴定、红细胞冰冻保存等工作的血站可根据自身条件和本地区临床输血需求开展以上项目,以提高本地区的输血安全保障能力,促进输血事业的发展。

进一步对广西全区2017—2020年RhD阴性红细胞采集和临床供应情况进行调查,结果显示,全区年总采集量和年总临床供应量呈波动变化趋势,全区每年年总采集量远大于年总临床供应量,总体呈现供大于求的状态。而区内不同血站的RhD阴性红细胞年总采集量和年总临床供应量变化趋势不尽相同:贵港市中心血站、钦州市中心血站的RhD阴性红细胞年总采集量呈逐年上升趋势,梧州市中心血站、北海市中心血站的RhD阴性红细胞年总采集量呈逐年下降趋势,其他10个血站的RhD阴性红细胞年总采集量则呈起伏状态;贵港市中心血站、贺州市中心血站的RhD阴性红细胞年总临床供应量呈逐年上升趋势,梧州市中心血站、河池市中心血站的RhD阴性红细胞年总临床供应量呈逐年下降趋势,其他10个血站的RhD阴性红细胞年总临床供应量则呈起伏状态。广西区内大部分血站的RhD阴性红细胞年总采集量和年总临床供应量均呈起伏状态,主要与临床需求随机性、突发性特点有关。

各血站之间血液的调剂方式包括调入和调出,血站内血液调入量、调出量的总和即为总调剂量。总调剂量的大小可从整体反映出血液调剂活动的活跃度和趋势,体现血液跨地区联动在保障应急供血方面的作用,可为建立健全区域间血液联动保障机制和政策提供基础依据。本研究结果显示, 2017—2020年广西区内RhD阴性红细胞调剂活动较为活跃,且各血站间调剂情况个体差异较大:广西壮族自治区血液中心、南宁市中心血站、桂林市中心血站、玉林市中心血站等血站的血液调剂以调出为主,表明这些血站RhD阴性血液供应较为充足;梧州市中心血站、钦州市中心血站、河池市中心血站等血站的血液调剂以调入为主,表明这些血站的RhD阴性血液供应较为紧缺;而区内其他血站(除百色市中心血站外)在同一个年度内既有调入也有调出,血液调剂较为频繁,某一段时间内采供不平衡的问题突出,其主要原因是这些地区的城市人口相对较少,RhD阴性血液需求量小,血液的采供状况更容易受到临床稀有血型需求不确定性、突发性的影响。以上分析表明,广西区内RhD阴性血液采供存在地区间发展不平衡现象,全区范围内的跨地区血液调剂是临床供血的重要应急保障手段。

综上所述,广西各地区血站普遍存在RhD阴性稀有血液采集与供应之间不平衡现象。RhD阴性稀有血液采供不平衡既会导致血站在某些特殊紧急情况下面临不能满足急救用血需求的困境,又会不可避免地出现将RhD阴性血液作为RhD阳性血液使用或过期报废的浪费局面。虽然广西各血站建有稀有血型献血者资料库,但因目前资料库大都存在库容量小、资料不够完整、区域性限制、共用性差等缺点,仍然不能很好地满足当地稀有血型人群的用血需求。应急血液保障的跨地域联动,是政府、卫生行政主管部门和输血行业应对突发公共事件的新课题,也是血站危机管理的重要内容之一[6-10]。近年来,我国已有跨省、跨区域紧急调运稀有血型血液的研究报告[11]。通过建立共享信息的互助组织或网站,进行跨区域乃至国际合作,已被证明是保障稀有血型输血的有效途径。因此,建立一个全区联网的稀有血型资料管理平台,是进一步提高各地稀有血型血液供应保障能力的有效策略。通过区内联网的稀有血型资料管理平台使区内各血站共享全区的稀有血型资源,开辟“一地库存,多地使用”的良好格局,可以最大限度地使区域内稀有血型血液资源得到充分利用和合理调配,能有效地保障临床稀有血型急诊用血和疑难配血应用需求,提高血站在突发公共卫生事件中特殊用血的保障能力。