膀胱尿路上皮癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2表达水平及其预测术后复发的价值

张荣顺，王庆伟，朱文

（1.河南省舞钢市人民医院 外一科，河南 平顶山 462500；2.郑大一附院 泌尿外科，河南 郑州 450052；3.郑大一附院 泌三科，河南 郑州 450052）

膀胱尿路上皮癌（bladder urothelial carcinoma,BUC）为临床常见的一种恶性肿瘤，存在高复发率与多发性特点［1］。膀胱癌于实体恶性肿瘤中发病率处于第4 位，多见于男性，男女比例约为4∶1［2］。目前膀胱癌确切发病和复发分子机制尚未阐述明确，目前认为，其和患者整个膀胱黏膜的上皮基因组稳定性不佳有关［3］。生存素（survivin）为近几年研究发现的一种调控肿瘤细胞信息通路，这一信号通路参与多个恶性肿瘤的发生与进展病理过程［4］。人类错配修复基因2（human mismatch repair gene2,hMSH2）于生物进化中相对保守，可降低自发突变、修复DNA 碱基的错配功能以及提高DNA 的复制稳定性，故hMSH2 基因多态性可影响肿瘤发生易感性，同时对于肿瘤的演化与进展存在预测价值［5-6］。本研究探讨survivin、hMSH2、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）对于BUC患者术后复发的预测价值，以期为临床早期方式予以数据支持，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 研究对象

选取河南省舞钢市人民医院2020 年2 月至2022 年1 月收治的80 例接受手术治疗的BUC 患者为研究对象，均签署知情同意书。其中男43 例，女37 例；年龄56～74 岁，平均（65.28±4.35）岁。①纳入标准：经过病理学诊断为BUC；手术前无放化疗史；有完整临床病例资料；研究方案经过学术委员会、伦理委员会审核批准。②排除标准：其他病理种类膀胱癌；伴有其他恶性肿瘤；无法完成术后随访；中途自愿退出；合并认知障碍或者精神障碍。

80 例接受手术治疗的BUC 患者，均于术中留取癌组织（BUC 组）以及距离癌缘2.5 cm 的癌旁组织（对照组）。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学染色法 入组肿瘤组织石蜡标本制作为4 μm 连续切片，将切片脱蜡、水化，于3%浓度过氧化氢-微波-甲醇内于室温下持续浸泡10 min，灭活过氧化氢酶活性；利用微波抗原持续修复20 min，pH 值为7.6，修复液为EDTA抗原修复液；经室温冷却之后滴加一抗，湿盒4℃冰箱内孵育一抗过夜；第2 d 经TBS 洗3 次标本，滴加生物素标记二抗，于室温下孵育10 min；滴加辣根过氧化物酶标记链霉亲和素于室温下孵育10 min；DAB 显色2 min，后苏木精予以复染2 min，予以脱水、透明与封片，于显微镜下进行观察，为保障染色质量，每张切片用已知阳性组织作阳性对照（survivin、Cyclin D1、hMSH2），用PBS 代替一抗作为阴性对照，用磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗作为阴性对照。

1.2.2 结果判定标准 由2 名病理科高年资医生经盲法阅片，当结果不一致时经过协商判定结果，最终结果是以细胞核或者胞质呈棕黄或褐色为阳性，每张切片于高倍镜下计数细胞，按照染色强度进行打分，即0 分无色、1 分浅黄色、2 分棕黄色、3 分棕褐色，染色强度需要和背景着色对比；在按照阳性细胞占百分比予以打分，即0 分阴性、1 分阳性细胞≤10%、2 分阳性细胞11%～50%、3 分阳性细胞51%～75%、4 分阳性细胞＞75%，染色强度和阳性细胞百分乘积≥2 分归免疫反应阳性（+）。

1.3 观察指标

①比较两组survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平。②随访1 年，统计复发状况，比较复发患者（22 例）和未复发患者（58 例）癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平。③比较不同病理学参数患者癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平。④分析癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平与病理学参数相关性。⑤分析癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平联合预测BUC 患者术后复发价值。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差（）表示，组间比较采用独立样本t检验；计数资料以百分率（%）表示，行χ2检验；采用受试者工作特征（receiver operating characteristic curve,ROC）曲线，获取曲线下面积（area under curve,AUC）、置信区间、敏感度、特异度及cut-off 值；相关性采用Spearman分析。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组survivin、Cyclin D1、hMSH2 阳性表达率比较

与对照组相比，BUC 组survivin、Cyclin D1 阳性表达率较高，hMSH2 阳性表达率较低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组survivin、Cyclin D1、hMSH2 阳性表达率［n(%)］

2.2 复发和未复发患者癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平比较

与未复发患者相比，复发患者癌组织survivin、Cyclin D1 表达水平明显升高，hMSH2 表达水平明显降低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 复发和未复发患者癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达情况 ［n(%)］

2.3 不同病理学参数癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平比较

膀胱癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平与年龄、性别、原发肿瘤个数无关，差异无统计学意义（P＞0.05）。癌组织survivin、Cyclin D1表达水平比较：G2/3级高于G1级，T2～T4期 高于Tis～T1期，有淋巴结转移高于无淋巴结转移，差异有统计学意义（P＜0.05）；癌组织hMSH2 表达水平比较：G2/3级低于G1级，T2～T4期低于Tis～T1期，有淋巴结转移低于无淋巴结转移，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 不同病理学参数癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达情况 ［n(%)］

2.4 癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平与病理学参数相关性分析

癌组织survivin 表达水平与肿瘤分级、肿瘤分期、淋巴结转移、复发呈正相关（P＜0.05）；癌组织Cyclin D1 表达水平与肿瘤分级、肿瘤分期、淋巴结转移、复发呈正相关（P＜0.05）；癌组织hMSH2 表达水平与肿瘤分级、肿瘤分期、淋巴结转移、复发呈负相关（P＜0.05）。见表4。

表4 癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平与病理学参数相关性分析

2.5 癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平联合预测BUC 患者术后复发价值分析

以术后复发BUC 患者为阳性样本，以术后未复发BUC 患者为阴性样本绘制ROC 曲线，结果显示，癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平联合预测BUC 患者术后复发的AUC 为0.886，最佳诊断敏感度、特异度分别为81.82%、94.83%。见表5。

表5 癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平联合预测BUC 患者术后复发价值分析

3 讨论

BUC 为常见泌尿系统的恶性肿瘤之一。2015年国内膀胱癌新发病例超出8 万，超出3 万患者由于膀胱癌死亡［7］。因膀胱癌存在多发性以及癌旁黏膜具有癌前病变等特点，治疗之后复发风险仍可达30%～50%，危及患者生命健康，加剧患者家庭的生活压力［8］。因此早期预测BUC 患者术后复发风险，可为临床早期制定防治措施以及改善预后具有重要意义。

本研究结果表现，BUC 组hMSH2 阳性表达率明显低于对照组，且复发患者癌组织hMSH2 阳性表达率明显下降，且G2/3级、T2～T4期、有淋巴结转移患者癌组织hMSH2 阳性表达率明显低于G1级、Tis～T1期、无淋巴结转移，说明hMSH2 参与BUC 的发生与进展，动态监测其水平变化，有助于临床评估病情程度。研究表明，基因异常参与恶性肿瘤的发生与发展，而基因异常表现方式主要为基因突变以及异常转录［9］。hMSH2 于基因突变与异常转录中发挥极为重要作用，其为人类错配修复基因内最早被发现的一种修复异常基因转录因子，功能为当基因产生异常时能及时修复，一旦修复功能产生缺陷可增加抑癌基因的突变率与遗传的不稳定性，从而促进肿瘤演化与进展［10］。survivin 为凋亡抑制蛋白家族的一个重要成员，在人类胚胎发育组织和多个肿瘤细胞中呈特异性表达，于正常机体中仅在睾丸、胸腺以及分泌期子宫等多个组织内表达［11］。本研究结果表明，BUC组survivin 阳性表达率较高，复发患者癌组织survivin 表达水平明显升高，且G2/3级、T2～T4期、有淋巴结转移患者癌组织survivin 表达水平显著高于G1级、Tis～T1期、无淋巴结转移患者，提示survivin 参与BUC 的发生与进展，可作为临床诊断的指标之一。survivin 过度表达于细胞恶性早期便可出现，其过度表达打破细胞增殖与凋亡之间平衡，致使细胞恶变与肿瘤发生［12］，此外，survivin能保护生长因子，进而诱导肿瘤组织新生血管形成，为肿瘤的生长与侵袭提供有利组织微环境［13］。Cyclin D1 属于原癌基因之一，和细胞周期素依赖激酶（CDK4）相结合产生Cyclin D1/CDK4 复合物，激活CDK4，利用调节底物Rb 蛋白磷酸化，分泌转录因子E2F，加快细胞G1/S 期的转换，增加细胞增殖［14］。本研究显示，BUC 组癌组织Cyclin D1 阳性表达率较高，复发患者癌组织survivin 表达水平明显升高，且G2/3级、T2～T4期、有淋巴结转移患者癌组织survivin 表达水平显著高于G1级、Tis～T1期、无淋巴结转移患者，说明Cyclin D1 表达水平可反映BUC 患者病情程度，有助于制定更具有针对性的治疗方案。

此外，本研究经ROC 曲线分析显示，癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平联合预测BUC患者术后复发的敏感度、特异度较高（P＜0.05），说明癌组织survivin、Cyclin D1、hMSH2 表达水平可作为临床预测术后复发风险的指标，其原因为三者分别从基因异常、细胞增殖等方面对病情程度、复发风险予以评估，发挥协同效果，故预测价值较高。

综上所述，BUC 患者癌组织survivin、Cyclin D1 水平呈高表达、hMSH2 水平呈低表达，联合预测术后复发风险的敏感性与特异性较高，故临床可通过动态监测三者表达水平来完善治疗方案。