小反刍兽疫和山羊痘活疫苗联合免疫效果评价研究

张金学，董 伟*，王建军，许开云，张剑霞，卢 瑛

（ 1. 武威市畜牧兽医科学研究院，甘肃 武威 733000 ； 2. 武威普康养殖有限公司，甘肃 武威 733000 ）

小反刍兽疫和羊痘是国家规定的一类传染病，均是由病毒引起的急性接触性传染病。目前生产中没有治疗此病的特效药物，加之两种病的发病率和死亡率很高，可对养羊业造成巨大的经济损失，严重影响肉羊产业的健康发展[1-2]。因此，最有效、最经济、最主要的防控小反刍兽疫和羊痘疫病发生的措施仍是疫苗免疫[3-4]。根据近几年武威市动物疫病流行情况，生产中要求对小反刍兽疫、口蹄疫、布鲁氏菌病、羊痘实行强制免疫。若按照传统方式免疫，基层畜牧兽医工作者的工作量和劳动强度很大，不仅增加劳动成本，降低工作效率，而且多次免疫注射会增加羊免疫应激，降低动物福利水平，还会影响羊肉品质，进而影响人类健康[5]。因此，为探索和创新肉羊疫苗综合免疫优化程序，进一步提升防疫工作效率，本试验特开展小反刍兽疫和羊痘疫苗的联合免疫接种研究，为养殖场制定科学、合理、高效的疫苗免疫程序提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验地点

本试验在甘肃省武威市凉州区武威普康养殖有限公司进行。

1.2 试验材料

1.2.1 试验动物

试验选取生长发育良好、无疾病、体重相近、未进行疫苗免疫、2 月龄断奶2 周的健康湖羊90 只，断奶体重均在16.2～17.7 kg。

1.2.2 试验疫苗

山羊痘活疫苗（批号2021005-1）和小反刍兽疫活疫苗（批号2021035-2）均购自新疆天康生物制药有限公司。试验所用疫苗均在有效期内。

1.2.3 检测试剂

小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒，购自青岛立见诊断技术发展中心；羊痘间接ELISA抗体检测试剂盒，购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.3 试验方法

1.3.1 试验设计

参试羊按体重分为3 组，每组30 只，各组体重差异无统计学意义（P＞0.05）。试验组Ⅰ试验羊仅免疫小反刍兽疫活疫苗，试验组Ⅱ仅免疫山羊痘活疫苗，试验组Ⅲ同时分点接种小反刍兽疫活疫苗和山羊痘活疫苗。各试验组于疫苗免疫当日（0 d）颈静脉采集血液样本进行母源抗体检测，检测结果为阴性者方可作为试验羊。疫苗免疫后第7、14、21、28、90、210 d颈静脉采血，3 000 r/min离心2 min，送往实验室进行血清抗体检测，分析各疫苗免疫抗体水平以及两种疫苗抗体间是否存在干扰以及干扰程度。

1.3.2 免疫方法（见表1）

表1 免疫方法Tab.1 Immune method

试验组Ⅰ：小反刍兽疫活疫苗免疫按照说明书要求进行，灭菌生理盐水稀释为每头份1.0 mL，颈部皮下注射。

试验组Ⅱ：山羊痘活疫苗免疫按照说明书要求进行，灭菌生理盐水稀释为每头份0.5 mL，尾根内侧皮内注射。

试验组Ⅲ：小反刍兽疫活疫苗和山羊痘活疫苗同时分点免疫注射，免疫途径与剂量同试验组Ⅰ和试验组Ⅱ。

1.3.3 饲养管理

为减少环境、饲养管理等因素对试验造成的影响，参试羊断奶后全部转入试验羊舍，2 周后进行疫苗免疫。并由专人饲养管理，每天定时定量饲喂，自由饮水。

1.3.4 免疫副反应观察

疫苗免疫后7 d 内，逐个观察参试羊的免疫部位反应及精神状态、体温、活动、采食、饮水等情况，并进行详细记录，统计免疫副反应以测试使用疫苗的安全性能。一旦试验羊出现不良反应，及时通知兽医人员采取急救措施。

1.3.5 抗体检测方法

1.3.5.1 小反刍兽疫抗体检测

采用阻断ELISA检测小反刍兽疫病毒抗体，严格按照小反刍兽疫病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒说明书操作。检测结果判定：阳性血清阻断率（PIPC）＞60，阴性血清阻断率（PINC）＜40，检测结果有效，否则检测结果无效；阻断率（PIS）＞50，抗体阳性；PIS≤50，抗体阴性。

PIS=（100-样本OD值/酶标抗体平均OD值）×100（1）

1.3.5.2 羊痘血清抗体检测

采用间接ELISA检测羊痘病毒抗体，严格按照羊痘间接ELISA抗体检测试剂盒说明书操作。结果判定标准：阴性血清孔OD450nm值＜0.2，阳性血清孔OD450nm值＞0.6，检测结果成立，否则检测结果无效；OD450nm值≥0.25，抗体阳性；OD450nm值≤0.2，抗体阴性；0.25＞OD450nm值＞0.20，阳性可疑，重复检测；若OD450nm值≥0.23，抗体阳性，OD450nm值≤0.23，抗体阴性。

1.4 数据统计与分析

试验数据按照疫苗种类分类统计，结果均以抗体阳性率表示，采用SPSS 18.0 软件单因子方差分析法进行差异性分析。P＜0.01 表示差异极显著，P＜0.05 表示差异显著，P＞0.05表示差异不显著。根据国家规定，群体免疫抗体合格率达70%以上判定为群体疫苗免疫合格。

2 结果与分析

2.1 疫苗安全性观察结果（见表2）

表2 疫苗安全性观察结果Tab.2 Vaccine safety observations 单位：只

由表2可知，免疫后7 d内，试验组Ⅰ试验羊未发现任何局部或全身不良反应。疫苗免疫后1～2 d，试验组Ⅱ有7 只试验羊的接种部位出现红肿反应，于第3 d 消退；组内未出现发热、停食、死亡现象。疫苗免疫后1～2 d，试验组Ⅲ中4 只试验羊的羊痘疫苗接种部位出现红肿反应，于第3 d消退；2只参试羊有轻微发热反应；组内未出现停食、死亡现象。

2.2 小反刍兽疫疫苗免疫抗体检测结果（见图1）

图1 小反刍兽疫疫苗免疫抗体检测结果Fig.1 Results of detection of antibody to PPR vaccine

由图1可知，试验羊在疫苗免疫后第7 d均产生抗体，单免（试验组Ⅰ）小反刍兽疫疫苗抗体阳性率达56.7%，极显著低于联合免疫组（试验组Ⅲ，小反刍兽疫疫苗抗体阳性率达83.3%）（P＜0.01）。免疫后第14、21、28 d，试验组Ⅰ和试验组Ⅲ的抗体阳性率分别为73.3%、90.0%、100.0%和93.3%、100.0%、100.0%，抗体水平整体呈上升趋势；免疫后14 d 时试验组Ⅲ试验羊抗体水平极显著高于试验组Ⅰ（P＜0.01），21 d 时试验组Ⅲ抗体水平显著高于试验组Ⅰ（P＜0.05），28 d 之后两组小反刍兽疫疫苗抗体合格率差异不显著（P＞0.05）。

试验组Ⅰ抗体水平在第28 d 达到峰值（100%），试验组Ⅲ在21 d 达到峰值（100%）；免疫后210 d 时，两组抗体水平均有所下降，试验组Ⅰ为90.0%，试验组Ⅲ为93.3%，但均达到国家规定的疫苗免疫合格率（70%）标准。

2.3 羊痘疫苗免疫抗体检测结果（见图2）

图2 羊痘疫苗免疫抗体检测结果Fig.2 Results of antibody detection of sheep pox vaccine

由图2可知，参试羊在疫苗免疫后第7 d均产生抗体，单免（试验组Ⅱ）羊痘疫苗抗体阳性率达70%，极显著高于联合免疫（试验组Ⅲ，羊痘疫苗抗体阳性率达30%）（P＜0.01）。免疫后第14、21、28 d，试验组Ⅱ和试验组Ⅲ的抗体阳性率分别为83.3%、100.0%、100.0% 和53.3%、76.7%、90.0%，表明抗体水平整体呈上升趋势；第14 d 和21 d 时试验组Ⅱ抗体水平极显著高于试验组Ⅲ（P＜0.01），28 d时试验组Ⅱ抗体水平显著高于试验组Ⅲ（P＜0.05）。

试验组Ⅱ抗体水平在第21 d达到峰值（100.0%），试验组Ⅲ在28 d达到峰值（90.0%）；90 d时，两组抗体水平均出现下降趋势；到210 d 时试验组Ⅱ羊痘疫苗抗体合格率为76.7%，达到国家规定的疫苗免疫合格率（70%）标准以上，试验组Ⅲ为63.3%，未达到国家标准。

3 讨论

疫苗免疫后，动物机体受到刺激会产生相应的免疫应答反应，其产物特异性抗体可抵抗细菌、病毒等病原微生物对机体造成的感染。实际肉羊生产中，常规免疫的疫苗种类有羊痘、小反刍兽疫、三联四防、口蹄疫、布鲁氏菌疫苗，羊群单独免疫小反刍兽疫疫苗或羊痘疫苗以及两种疫苗同时免疫所生产的抗体消长规律如何，两种疫苗之间是拮抗作用还是促进作用尚无相关研究报道。

本研究选择的试验羊为2月龄断奶2周且未进行任何疫苗免疫的健康羊群，且羊痘和小反刍兽疫抗体检测均为阴性，避免了疫苗免疫抗体的干扰以及母源抗体的影响。研究结果表明，羊痘和小反刍兽疫疫苗单苗免疫和联合分点免疫临床症状无明显差异，各组试验羊均未出现发热、厌食、死亡现象。各组试验疫苗免疫试验羊后均在第7 d产生抗体，21 d、28 d 左右抗体阳性率达到高峰，90 d 后出现不同程度的下降趋势；两种疫苗单独免疫试验羊后，疫苗抗体合格率到210 d 时均在75%以上，达到国家规定的疫苗免疫合格率70%以上的标准。吴婷等[6]研究结果显示，湖羊进行羊痘疫苗免疫后第28 d 时，血清抗体阳性率达到高峰（99.1%），210 d时抗体阳性率为79.1%，抗体水平合格率达到国家规定的免疫合格标准。田海芹等[7]研究表明，小反刍兽疫疫苗免疫试验羊28 d 时，抗体阳性率达100%，168 d时抗体阳性率为95.65%。上述研究结果与本研究结果一致。

本研究中，两种疫苗联合分点免疫参试羊后，小反刍兽疫疫苗免疫效果比单独免疫效果好，免疫抗体阳性率在第7、14 d时极显著高于单独免疫，21 d时显著高于单独免疫；28 d之后两组抗体水平差异不显著，到210 d时抗体水平有所下降，但均达到国家规定的疫苗免疫合格率70%以上；而联合分点免疫后的羊痘疫苗免疫效果比单独免疫效果差，免疫抗体阳性率在第7、14、21 d 时极显著低于单独免疫，28 d 时显著低于单独免疫；免疫后90 d 时两组抗体水平均出现下降趋势，到210 d时，联合免疫组试验羊抗体合格率仅为63.3%，未达到国家标准。张海霞等[8]研究表明，小反刍兽疫、山羊痘二联活疫苗对羊的免疫效果不理想，疫苗免疫后仅有小反刍兽疫抗体存在，羊痘抗体不存在。也有研究表明，小反刍兽疫疫苗和羊痘疫苗同时分点免疫羊后，羊痘疫苗的抗体阳性率比小反刍兽疫疫苗抗体阳性率低约15%[5,9-10]。上述研究结果与本研究结果显示的两种疫苗联合分点免疫参试羊的免疫抗体消长趋势一致。徐雅萍等[11]、张大俊[12]研究表明，小反刍兽疫疫苗和羊痘疫苗同时分点注射后7～210 d，两种疫苗的抗体合格率均在75%以上，达到国家标准，与本研究结果不一致。

本研究结果表明，羊痘疫苗与小反刍兽疫疫苗联合分点免疫，羊痘疫苗可促进小反刍兽疫疫苗的免疫效果，而小反刍兽疫疫苗却抑制了羊痘疫苗的免疫效果，且在免疫后210 d时其抗体合格率未能达到国家标准。小反刍兽疫疫苗与山羊痘疫苗均属于弱毒疫苗，当两种病毒同时感染宿主时，病毒间可能存在相互干扰的作用，一种病毒可抑制另一种病毒复制；或病毒与宿主细胞之间产生相互影响，从而导致两种弱毒疫苗同时免疫宿主时产生相互干扰的现象[13-14]。

4 结论

通过综合分析，羊痘疫苗与小反刍兽疫疫苗联合分点接种的免疫操作程序无法在实际生产中大范围推广，若养殖场（户）刚发生小反刍兽疫疫情或受到小反刍兽疫疫情威胁时，可建议养殖场（户）采用羊痘疫苗和小反刍兽疫疫苗联合分点接种的免疫操作程序，以增强小反刍兽疫疫苗的免疫效果。本研究结果同时也为有效预防和控制武威市小反刍兽疫疫情发生，制定合理的肉羊疫苗免疫程序提供科学依据。