多发性骨髓瘤患者血清miR⁃451、miR145⁃3p 变化及临床意义

杨超 梁淑新 齐霁 冉京萍 朱姗姗 钟利英 李铁民

多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）以骨髓浆细胞恶性增殖为主要特征，在血液系统恶性肿瘤中排名前列，目前尚未获得完全治疗MM 的方法，研究［1］分析MM 的发病机制可为研制靶向药物提供临床依据。微小核糖核酸（microRNA，miRNA）为非编码RNAs，可结合信使核糖核酸（messenger ribonucleic acid，mRNA）的3′端非翻译区（3′Un⁃translated Region，3′ UTR）降解mRNA 链或对mRNA 进行翻译。相关研究显示［2］，MM 的发生发展存在多种miRNA 的参与，包括微小核糖核酸⁃32（microRNA⁃32，miR⁃32）、微小核糖核酸⁃92a（mi⁃croRNA⁃92a，miR⁃92a）等。微小核糖核酸⁃451（mi⁃croRNA⁃451，miR⁃451）为miRNA 的一种，其在恶性肿瘤中的异常低表达可促进癌细胞增殖并对细胞凋亡进行抑制［3］。微小核糖核酸145⁃3p（microR⁃NA145⁃3p，miR145⁃3p）同样为miRNA，其被认为是肿瘤抑制基因，可对多个肿瘤相关基因进行靶向调控，进而对肿瘤转移、生长、侵袭以及血管生成造成影响［4］。目前关于两者是否可作为MM 诊断的生物标志物尚未明确，为使MM 患者获得更加确切的诊断以提高疗效与改善预后，本研究通过检测MM患者血清miR⁃451、miR145⁃3p变化分析两者临床意义并探究其在MM 中的诊断价值，具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取河北大学附属医院于2021 年1 月至2022年10 月收治的60 例MM 患者纳入观察组，其中男38 例，女22 例；年龄：42～81 岁，平均（61.81±5.30）岁；MM 国际分期系统（international staging sys⁃tem，ISS）［5］：Ⅰ期13 例，Ⅱ期19 例，Ⅲ期28 例。纳入标准：①符合《中国多发性骨髓瘤诊治指南（2020 年修订）》［6］中的诊断标准且经X 射线、组织活检、免疫球蛋白（Ig）单克隆抗体确诊；②患者年满18 岁；③患者或家属知悉同意本次试验。排除标准：①妊娠期或哺乳期患者；②合并有其他血液系统疾病者；③合并有自身免疫性疾病者；④合并有肾、心等器官疾病者。根据初诊情况将患者分为复发组（n=12）与初诊组（n=48）。选取同期于医院体检的45 名健康者作为对照组。其中复发组男7例，女5 例；年龄：44～81 岁，平均（62.14±5.37）岁；ISS：Ⅰ期2 例，Ⅱ期4 例，Ⅲ期6 例。初诊组男31例，女17 例；年龄42～79 岁，平均（61.48±5.22）岁；ISS：Ⅰ期11 例，Ⅱ期15 例，Ⅲ期22 例。对照组男23名，女22 名，年龄：40～71 岁，平均（60.31±5.08）岁。各组一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究经本院伦理委员会审核通过。

1.2 方法

miRNA 的检测：采用实时荧光定量聚合酶链式反应（qRT⁃PCR）方法，首先采用核酸提取试剂进行血清总RNA 的提取，然后逆转录成cDNA，以此作为模板，严格按照PCR 试剂盒说明书进行PCR 扩增，以U6作为内参物，采用2⁃ΔΔct法检测miR⁃451、miR145⁃3p基因表达量。血浆中miR⁃451、miR145⁃3p分子荧光PCR 引起序列见表1。

表1 miR⁃451、miR145⁃3p 扩增引物序列Table 1 Amplification primer sequences of miR⁃451 and miR145⁃3p

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计软件进行数据统计与分析，计量资料采用（）描述，组间比较行t检验，多组间比较行方差分析。采用受试者工作（ROC）曲线分析血清miR⁃451、miR145⁃3p对于MM 的诊断价值。以P<0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组与观察组的血清miR⁃451、miR145⁃3p水平比较

观察组血清miR⁃451、miR145⁃3p低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

表2 观察组与对照组血清miR⁃451、miR145⁃3p 水平比较（）Table 2 Comparison of serum miR⁃451 and miR145⁃3p lev⁃els between the observation group and the control group（）

表2 观察组与对照组血清miR⁃451、miR145⁃3p 水平比较（）Table 2 Comparison of serum miR⁃451 and miR145⁃3p lev⁃els between the observation group and the control group（）

2.2 不同分期MM 患者的血清miR⁃451、miR145⁃3p水平比较

miR⁃451、miR145⁃3p水平：Ⅲ期<Ⅱ期<Ⅰ期，差异均有统计学意义（P<0.05）。见表3。

表3 不同分期MM 患者的血清miR⁃451、miR145⁃3p 水平比较（）Table 3 Comparison of serum miR⁃451 and miR145⁃3p levels between MM patients at different stages（）

表3 不同分期MM 患者的血清miR⁃451、miR145⁃3p 水平比较（）Table 3 Comparison of serum miR⁃451 and miR145⁃3p levels between MM patients at different stages（）

注：与Ⅰ期比较，aP<0.05；与Ⅱ期比较，bP<0.05。

2.3 复发组与初诊组的血清miR⁃451、miR145⁃3p水平比较

复发组血清miR⁃451、miR145⁃3p水平低于初诊组，差异有统计学意义（P<0.05）。见表4。

表4 复发组与初诊组的血清miR⁃451、miR145⁃3p 水平比较（）Table 4 Comparison of serum miR⁃451 and miR145⁃3p levels between the recurrence group and the initial diagnosis group（）

表4 复发组与初诊组的血清miR⁃451、miR145⁃3p 水平比较（）Table 4 Comparison of serum miR⁃451 and miR145⁃3p levels between the recurrence group and the initial diagnosis group（）

2.4 血清miR⁃451、miR145⁃3p 及两者联合对于MM 的诊断价值

血 清miR⁃451、miR145⁃3p诊 断MM 时，以miR145⁃3p的曲线下面积值（AUC）值最高，敏感度、特异度分别为95.00%、93.33%，但miR⁃451的AUC 值与miR145⁃3p比较差异无统计学意义（P>0.05），血清miR⁃451、miR145⁃3p联合诊断MM 时，两项其中一项为阳即可诊断为MM，联合诊断后AUC 值为0.844，敏感度100.00%，特异度为84.44%。见表5、图1。

图1 ROC 曲线Figure 1 ROC curves

表5 血清miR⁃451、miR145⁃3p 及三者联合对于MM 的诊断价值Table 5 Diagnostic value of serum miR⁃451，miR145⁃3p and their combination for MM

3 讨论

MM 为一种终末分化的恶性肿瘤，其起病缓慢且隐匿，患者肾功能不全、高钙血症、骨损伤等不同临床表现由骨髓瘤细胞浸润部位与增生程度决定［7］。由于MM 缺乏特异性表现且疾病早期无显著症状，因此临床易出现漏诊或误诊情况［8］。现阶段无有效方式完全治愈MM，因此亟需寻找合适的标志物对MM 发生风险进行预测并对疾病进行诊断，以预防与及早控制疾病发展。

研究表明［9⁃10］，miRNA 在调控MM 的发生发展中具有重要作用，其中miRNA 家族的miR⁃424、miR⁃765的水平变化可作为MM 分子生物学的诊断标志且诊断价值较高。miR⁃451位于人17q11.2染色体上，其在多种肿瘤中均存在异常表达，可通过多种机制对细胞凋亡、增殖等过程进行调控，但其在MM 中的表达情况如何尚待探究。miR⁃145主要包括两种形式［11］，分别为miR145⁃5p、miR145⁃3p，已有相关研究证实前者在前列腺癌［12］、非小细胞肺癌［13］等癌症中具有重要作用，可用于疾病诊断，但对于miR145⁃3p在MM 中的作用机制尚未明确。为使MM 患者获得更加明确的诊断，本研究对miR⁃451、miR145⁃3p在MM 患者中的变化进行探究，结果显示：观察组血清miR⁃451、miR145⁃3p低于对照组，提示miR⁃451、miR145⁃3p在MM 患者中存在异常低表达。miR145⁃3p在MM 患者中低表达的原因可能为，miR145⁃3p可对自噬标志物以及多种转染细胞凋亡的信号通路产生作用（靶向调控），从而分别对细胞凋亡、细胞自噬进行抑制与促进，最终导致其表达水平低。2021 年傅乙笑［14］对miR145⁃3p在MM 患者中的表达情况进行了探究，结果显示miR145⁃3p在MM 患者中的表达下降，与本文研究结果相似，但其未对miR⁃451在MM 患者中的表达情况进行比较且未对初诊与复发患者的miR145⁃3p水平变化进行探究，本研究在此基础上作进一步探究，以明确miR⁃451在MM 患者中的表达与两者联合对于MM 的诊断价值。相关研究表明［15］，miRNA 可对多种靶基因生物学功能进行调控，且其基因调控、表达谱与MM 发生密切相关，可为MM 早期诊断提供、治疗及预后提供依据。Su 等［16］的研究结果显示，miR⁃451在急性髓系白血病中的表达下调，其可通过调控相关信号通路以抑制肿瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。本研究结果显示：miR⁃451、miR145⁃3p水平：Ⅲ期<Ⅱ期<Ⅰ期，差异均有统计学意义，随着患者ISS 分期的不断增加，患者体内血清miR⁃451、miR145⁃3p水平逐渐降低，提示miR⁃451、miR145⁃3p水平降低与疾病进展相关，两者可能参与了MM 的发生发展过程。复发组血清miR⁃451、miR145⁃3p水平低于初诊组，提示对患者血清miR⁃451、miR145⁃3p水平检测有助于了解其复发情况，可及时采取措施以降低复发率。2020 年鹿军等［17］的研究结果显示，miR⁃451通过靶向调控c⁃Myc 表达进而对多发骨髓瘤进展进行抑制，进而呈现低表达。ROC 曲线分析结果显示：血清miR⁃451、miR145⁃3p诊断MM 时，以miR145⁃3p的AUC 值最高，敏感度、特异度分别为95.00%、93.33%，但miR⁃451的AUC 值与miR145⁃3p比较差异无统计学意义，提示两者在诊断MM 中均具有良好的诊断价值，miR⁃451、miR145⁃3p水平变化可作为诊断评估MM 患者预后的工具。此外，血清miR⁃451、miR145⁃3p联合诊断后AUC 值为0.844，敏感度100.00%，特异度为84.44%，特异度降低但敏感度提升，两者联合同样具备较高诊断效能，因此临床可将两者联合对MM 患者进行诊断，应用前景广阔。

综上所述，血清miR⁃451、miR145⁃3p表达在MM 患者中显著降低，且随患者病情加重呈下降趋势，两者诊断效能较好，可作为临床早期筛查MM 与预后判断的指标之一。