癫痫共患注意缺陷多动障碍患儿外周血DRD2 DAT 基因表达与焦虑抑郁情绪的关系

马 娜 颜晓磊 徐军茹 王富明

开封市儿童医院，河南 开封 475000

癫痫对于儿童影响率为0.5%～1.0%，是最常见的慢性神经系统状况疾病，其致残性会严重影响儿童的正常生长发育［1-3］。注意缺陷多动障碍（attention deficit hyperactivity disorder，ADHD）是儿童癫痫的常见共患疾病，包括注意力涣散、发育迟缓、认知功能缺陷及多种心理疾病等［4-7］。目前临床常用药物治疗，抑制神经细胞膜过度兴奋，起到抗癫痫的作用［8-10］。儿童时期的癫痫，主要依靠对患儿临床症状的判断及焦虑、抑郁相关心理状态量表的评定［11-13］，缺乏客观的特征性生物学指标，抑郁、焦虑的诊断主要依靠医生临床经验的积累，因此要密切注意其心理状态，才能使患儿更好配合治疗、疾病转归［14-15］。有研究报道癫痫共患ADHD的相关机制［16-18］，但并未具体分析患儿基因表达对心理状态是否有影响。本研究通过检测血液生化指标基因表达，证实各项指标与癫痫共患ADHD 患儿心理状态的关系，为后续研究提供思路。

1 资料与方法

1.1 一般资料纳入2018-01—2021-01开封市儿童医院收治的74例癫痫患儿为疾病组。纳入标准：（1）符合癫痫或ADHD诊断标准［19-20］；（2）近半年内未使用抗癫痫药物及激素类药物；（3）患儿监护家属对本研究知情且同意。排除标准：（1）广泛性发育障碍者；（2）内分泌系统疾病等患儿；（3）重要脏器相关疾病者；（4）无法配合本研究相关项目检测的精神障碍患儿。其中37例癫痫患儿共患ADHD为A组，剩余癫痫患儿为B组（37 例）。另选同时段本院接受治疗的抽动障碍（tic disorders，TD）患儿为对照组（35例）。见表1。3 组患儿基线资料比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表1 3组患儿一般资料比较Table 1 Comparison of general data among the three groups

1.2 方法

1.2.1心理状态：采用抑郁自评量表（self-rating depression scale，SDS）和汉密尔顿焦虑量表（Hamilton depression scale，HAMA）评估患儿焦虑、抑郁状态［21-22］。评分＜20 分为无焦虑或无抑郁症状，21～40 分为轻微抑郁或焦虑情绪，41～59 分为肯定有焦虑或抑郁，60～79分为较明显焦虑或抑郁，＞81分为可能有严重焦虑；评分≥51 分为界，即SAS、SDS≥51分者界定为焦虑、抑郁，对应评分越高表示患者抑郁、焦虑倾向越明显。

1.2.2DAT和DRD2 基因表达检测：晨起、空腹取患儿静脉血5 mL 置于抗凝管中，并于—4 ℃冰箱储存备用。①提取总RNA及反转录：向样本中加入Trizol裂解细胞，再进行离心、加入氯仿进行萃取、离心，加入异丙醇进行沉淀，适量DEPC 水溶解，借助琼脂糖凝胶电泳和核酸蛋白检测仪检测其完整性、纯度，并按照试剂盒（中国赛默飞世尔科技有限公司）说明书操作步骤完成cDNA 合成；②目的基因扩增：按照试剂盒（中国赛默飞世尔科技有限公司）要求及说明，加入cDNA、水及引物，扩增操作选实时检测扩增仪（型号：SimpliAmp™）进行，共循环42次。DAT、DRD2基因定量分析选用内参基因△CT 法，其DRD2 引物Left：5’-GGAGGTGGTAGGTGAGTGG-3’，Right：5’-GGAGATGGTGAAGGACAGGA-3’，扩增产物大小220 bp；DAT 引物Left：5’-TTCATCATCTACCCGGA AGC-3’，Right：5’-AACAGG-GACAGGAGGAAGGT-3’，扩增产物大小215 bp；GAPDH引物Left：5’-GAGTCA ACGGATTTGGTCGT-3’，Right：5’-GACAAGCTTC-CC GTTGTGAG-3’，扩增产物大小185 bp。

1.3 统计学分析用SPSS 17.0 和SigmaStat 3.5 软件进行统计分析，计数资料用例（%）表示，用χ2检验；计量资料以均数±标准差（±s）表示，以t检验、F检验验证组间差异；相关性选择Pearson 法；借助多因素Logistic 回归分析癫痫是否共患ADHD 患儿的影响因素。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 3 组患儿心理状态比较3 组患儿SDS 评分、HAMA评分有统计学差异（P＜0.05）。见表2。

表2 3组患儿心理状态比较 （分，±s）Table 2 Comparison of psychological states among thethree groups （score，±s）

表2 3组患儿心理状态比较 （分，±s）Table 2 Comparison of psychological states among thethree groups （score，±s）

注：与对照组相比，aP＜0.05；与疾病B组相比，bP＜0.05

组别疾病A组疾病B组对照组F值P值n 37 37 35 SDS评分54.21±5.05ab 45.62±6.78 42.37±5.07 45.142＜0.001 HAMA评分55.56±5.16ab 47.74±4.63 46.55±4.38 38.915＜0.001

2.2 3 组患儿DAT 和DRD2 基因表达比较3 组患儿DATmRNA、DRD2 mRNA表达有统计学差异（P＜0.05）。见表3。

表3 3组患儿DAT、DRD2基因表达比较 （±s）Table 3 Comparison of DAT and DRD2 gene expression in the three groups （±s）

表3 3组患儿DAT、DRD2基因表达比较 （±s）Table 3 Comparison of DAT and DRD2 gene expression in the three groups （±s）

注：与对照组相比，aP＜0.05；与疾病B组相比，bP＜0.05

组别疾病A组疾病B组对照组F值P值DRD2 mRNA 0.62±0.04ab 0.55±0.03a 0.25±0.03 679.832＜0.001 n 37 37 35 DAT mRNA 0.57±0.06ab 0.42±0.05a 0.30±0.05 235.594＜0.001

2.3 各项指标与外周血DAT、DRD2 基因表达的相关性分析Pearson 相关性分析显示，外周血DAT、DRD2基因表达联合SDS评分、HAMA 评分均呈正相关（r=0.439、0.479、0.520、0.516，P＜0.05）。见表4。

表4 各指标与外周血DAT、DRD2基因表达的相关性分析Table 4 Correlation analysis between each index and the expression of DAT and DRD2 genes in peripheral blood

2.4 癫痫共患ADHD 患儿出现焦虑、抑郁情绪的Logistic 分析将各因素作为自变量，癫痫共患ADHD 患儿出现焦虑、抑郁情绪作为因变量，进行Logistic 回归分析，结果显示DAT、DRD2 基因表达是癫痫共患ADHD 患儿出现焦虑、抑郁情绪的影响因素（P＜0.05）。见表5。

表5 癫痫共患ADHD患儿出现焦虑、抑郁情绪的Logistic分析Table 5 Logistic analysis of anxiety and depression in children with epilepsy combined with ADHD

3 讨论

癫痫是多种因素诱发儿童脑部功能障碍，导致不同程度发育、认知、精神、心理等各方面障碍的一种神经系统综合征［23-25］，而ADHD作为其最易共患的精神类疾病之一，是全世界最常被诊断出的神经发育障碍［26-27］。相关研究表明ADHD 患儿发病机制与神经递质DA 功能异常有一定相关性［28-29］。由于患儿颅脑内神经元突发性异常放电，病情反复，其家属及社会需要承担一定的压力，癫痫共患ADHD 患儿极易产生焦虑、抑郁、孤独感等负面情绪［30-32］。

本研究显示，疾病A 组患儿SDS 评分、HAMA 评分显著高于疾病B组和对照组，而疾病B组患儿与对照组患儿的SDS 评分、HAMA 评分无统计学差异。SDS 和HAMA 评分是临床上诊断患者是否抑郁、焦虑的重要指标［33-34］。在癫痫发作时，患儿意识可能突然丧失，并伴肌肉强直性收缩、感觉异常等症状，导致其精神负担加重，自尊水平下降，治疗依从性降低，不利于疾病转归［35-36］。对照组选取的TD 患儿作为一种心理行为障碍，其不仅表现为抽动，还伴随多种心理行为问题，导致患儿心理困扰，因而单纯癫痫与对照组患儿的心理状态无统计学差异，但共患ADHD 会加重患儿精神负担状态，因此心理状态更为严重。及时观察患儿心理状态，并有针对性地制定治疗方案，可使患儿积极配合各项临床干预，规范进行用药，促进临床干预效果有效提升，使癫痫发作得到有效控制，减轻癫痫发作、不良情绪等。

突触DA稳态由DAT控制，其含量表达上调则会导致更多DA 被重摄取，进而出现中枢DA 清除过度的情况，最终导致突触间隙DA浓度相比之下有下降趋势［37］。外周血DRD2 是DA 自身受体之一，若体内DRD2 mRNA表达上调，说明患儿脑组织中均出现不同程度DA 系统功能异常［38］。DA 作为中脑神经递质，主要作用是调节人体中枢神经系统的各种生理功能［39］。当脑内DA含量不足，会使儿童脑部选择性过滤无关刺激，进一步使患儿任性冲动、无法集中注意力，最终导致癫痫患儿共患ADHD。本研究中疾病A组患儿DAT、DRD2基因表达显著高于疾病B组，而疾病B 组DAT、DRD2 基因表达高于对照组，表明DAT、DRD2 基因可能是引起癫痫病理改变及患儿心理异常的主要原因，而对照组患儿发病机制更为复杂且偏向于遗传因素，因而上述基因表达影响较小。

进一步探究血清生化指标及其基因表达的研究价值，结果显示外周血DAT、DRD2 基因表达与SDS和HAMA评分均呈正相关。癫痫主要由脑神经异常放电所致，脑部神经细胞的损伤和凋亡加重癫痫症状。上述血清生化标志物的其他受体表达紊乱，可通过特定的环路阻碍患者神经保护作用，从而使患儿产生不良情绪及神经递质相关代谢障碍。进一步Logistic 回归显示，DAT、DRD2 基因表达均可在一定程度上影响癫痫共患ADHD 患儿的焦虑或抑郁状态，可能是上述指标参与神经元再生以及神经传递。抑郁、焦虑是癫痫病人常伴的心理障碍；神经元异常放电是癫痫的病变基础，而神经元异常放电往往与基因的表达异常有关［40-42］。

儿童心理状态和DAT、DRD2基因表达与疾病呈正相关，且联合上述指标可辅助临床判定癫痫患儿是否共患ADHD，有一定的应用价值。本研究一定程度上解释了癫痫共患ADHD 患者血清DAT、DRD2基因表达与心理障碍的关系，但本研究样本量较小，且未对癫痫的类型进行分层研究，也未进行长期随访进一步观察，后续还需要多中心大样本研究进一步验证本研究结果。