子宫颈癌病理分级与微血管密度、Yes相关蛋白1的相关性研究

谭真 孙建

【摘要】 目的：探討子宫颈癌病理分级与微血管密度（MVD）、Yes相关蛋白1（YAP1）的相关性。方法：选择2019年3月-2022年6月临沂市第三人民医院收治的子宫颈癌患者53例为对象，常规采集病灶组织及癌旁组织（距离病灶≥3 cm）。根据子宫颈癌病理分级分为高分化组、中分化组和低分化组；采用免疫组织化学法测定不同组织中、不同病理分级下MVD、YAP1阳性率；采用Spearman相关系数法对子宫颈癌病理分级与MVD、YAP1阳性率进行分析。结果：子宫颈癌病灶组织中MVD、YAP1阳性率均高于癌旁组织（P<0.05）；免疫组化染色结果显示，子宫颈癌病灶组织YAP1表达于细胞质与细胞核；而MVD表达于细胞质，呈棕褐色、棕黄色，着色度较高；而癌旁组织中阳性染色细胞较少，MVD、YAP1着色程度较低；低分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组与中分化组（P<0.05）；中分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组（P<0.05）；Spearman相关系数法结果显示，子宫颈癌患者病理分级与MVD、YAP1表达均呈负相关（rs=-0.692、-0.452）。结论：MVD、YAP1在子宫颈癌病灶组织中呈阳性高表达，其高表达水平与病理分级存在一定相关性，能为临床诊疗提供新方法。

【关键词】 微血管密度 Yes相关蛋白1 子宫颈癌 相关性 免疫组织化学法

Study on the Correlation between Pathological Grading， Microvessel Density and Yes Associated Protein 1 in Cervical Cancer/TAN Zhen， SUN Jian. //Medical Innovation of China， 2023， 20（11）： -115

[Abstract] Objective： To investigate the correlation between pathological grading of cervical cancer and microvessel density （MVD）， Yes associated protein 1 （YAP1）. Method： A total of 53 patients with cervical cancer who were admitted to Linyi Third People's Hospital from March 2019 to June 2022 were selected as the subjects， and the focus tissues and adjacent tissues （≥3 cm from the focus） were routinely collected. According to the pathological grading of cervical cancer， it was divided into high differentiation group， medium differentiation group and low differentiation group. The the positive rate of MVD and YAP1 in different tissues and different pathological grades were measured by immunohistochemistry. Spearman correlation coefficient method was used to analyze the correlation between pathological grade of cervical cancer and the positive rate of MVD and YAP1. Result： The positive rate of MVD and YAP1 in cervical cancer lesions were higher than those in adjacent tissues （P<0.05）. Immunohistochemical staining showed that YAP1 was expressed in the cytoplasm and nucleus of cervical cancer lesions; MVD was expressed in the cytoplasm， which was brown and brown yellow， with a high degree of staining. There were few positive staining cells in the adjacent tissues， and the staining degree of MVD and YAP1 was low. The positive rate of MVD and YAP1 in low differentiation group were higher than those in high differentiation group and middle differentiation group （P<0.05）. The positive rate of MVD and YAP1 in middle differentiation group were higher than those in high differentiation group （P<0.05）. Spearman correlation coefficient method showed that the pathological grade of cervical cancer patients was negatively correlated with expression of MVD and YAP1 （rs=-0.692， -0.452）. Conclusion： MVD and YAP1 are highly expressed in cervical cancer lesions， and their high expression level is related to pathological grading， which could provide a new method for clinical diagnosis and treatment.

[Key words] Microvessel density Yes associated protein 1 Cervical cancer Correlation Immunohistochemistry

First-author's address： Linyi Third People's Hospital， Shandong Province， Linyi 276023， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.11.027

子宮颈癌属于临床发病率较高的恶性肿瘤，其发病多与人乳头状瘤病毒（HPV）感染有关，亦与多个性伴侣、过早开始性生活、免疫功能缺陷性疾病等有关[1]。流行病学调查结果表明：全球子宫颈癌发病率为每10万人中13人患病，多数患者发病早期临床症状缺乏典型性，随着病程延长可引起接触性出血、异常阴道流血等，成为我国女性死亡的重要原因[2]。微血管密度（MVD）能反映肿瘤组织中血管分布，在肿瘤的发生与发展中发挥了重要的作用，其表达水平能评估患者预后，有望成为子宫颈癌治疗新靶点[3-4]。Yes相关蛋白1（YAP1）属于富脯氨酸磷蛋白的一种，在正常人体中表达水平较低或不表达，而在子宫颈癌患者中将会引起靶基因转录活性上升，能诱导肿瘤的形成[5]。但是，MVD与YAP1在子宫颈癌患者中的表达及与病理分级的关系研究较少[6]。因此，本研究以子宫颈癌患者为对象，探讨子宫颈癌病理分级与微血管密度、Yes相关蛋白1的相关性，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 回顾性选择2019年3月-2022年6月临沂市第三人民医院收治的子宫颈癌患者53例为对象。纳入标准：（1）符合子宫颈癌诊断标准[7]，经病理组织检查确诊；（2）均完成子宫颈癌病灶组织及癌旁组织采集，并完成相关蛋白测定；（3）病情稳定，能进行沟通与交流。排除标准：（1）检查前行放化疗、生物免疫治疗；（2）其他部位恶性肿瘤或复发病例或妊娠期与哺乳期。根据子宫颈癌病理分级分为高分化组21例、中分化组18例和低分化组14例。本研究经院医学伦理委员会批准通过。

1.2 方法

1.2.1 仪器与设备 鼠抗人YAP1单克隆抗体，购自美国Abcam公司；MVD单克隆抗体，购自北京中杉生物技术有限公司；二氨基联苯胺（DAB）显色试剂盒，购自北京中杉生物技术有限公司；倒置显微镜，购自德国蔡司公司。

1.2.2 检测方法 采用免疫组织化学法测定不同组织中、不同病理分级下MVD、YAP1阳性率；取子宫颈癌病灶组织与癌旁组织（距离病灶≥3 cm），常规制备石蜡组织切片，控制切片厚度为4 μm，经石蜡脱水后水化，梯度酒精脱水，热抗原修复，并采用浓度为3%过氧化氢连续完成10 min孵育，加入1︰100浓度MVD、YAP1多克隆抗体一抗，4 ℃下恒温过夜，滴加过氧化物酶标记的MVD、YAP1二抗（控制稀释比例1︰2 000），连续完成60 min孵育后向反应液中加入DBA染色液显色，1 min苏木素复染后，完成30 s梯度乙醇分化，1 min氨水返蓝，并在显微镜染色下观察并设定反应时间。苏木精2 min染色，梯度酒精脱水，中性树胶封片，并在倒置显微镜下观察不同标本中MVD、YAP1表达情况[8-9]。

1.3 观察指标及评价标准 （1）MVD、YAP1表达情况及阳性率。每张切片随机选择5个高倍视野，并以MVD、YAP1中出现棕黄色颗粒为阳性。（2）子宫颈癌病理分级与微血管密度、Yes相关蛋白1阳性率相关性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 24.0软件处理，计数资料行字2检验，采用率（%）表示，计量资料行F检验，采用（x±s）表示，子宫颈癌不同病理分级患者MVD、YAP1性质的相关性采用Spearman相关系数法分析，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组一般资料比较 高分化组21例，年龄28～73岁，平均（56.51±3.59）岁；体重指数（BMI）18～29 kg/m2，平均（22.14±2.42）kg/m2；肿瘤分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期5例，Ⅲ期6例；病理类型：鳞癌17例，腺癌4例。中分化组18例，年龄29～72岁，平均（57.89±3.62）岁；BMI 19～30 kg/m2，平均

（22.64±2.48）kg/m2；肿瘤分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期5例；病理类型：鳞癌11例，腺癌7例。低分化组14例，年龄27～74岁，平均（56.89±3.62）岁；BMI 17～32 kg/m2，平均（22.37±2.43）kg/m2；肿瘤分期：Ⅰ期6例，Ⅱ期3例，Ⅲ期5例；病理类型：鳞癌11例，腺癌3例。三组一般资料比较，差异均无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

2.2 子宫颈癌不同组织中MVD、YAP1阳性率比

较 子宫颈癌病灶组织中MVD、YAP1阳性率均高于癌旁组织（P<0.05）；免疫组化染色结果显示：子宫颈癌病灶组织YAP1表达于细胞质与细胞核；而MVD表达于细胞质，呈棕褐色、棕黄色，着色度较高；而癌旁组织中阳性染色细胞较少，MVD、YAP1着色程度较低，见表1和图1。

2.3 子宫颈癌不同病理分级下MVD、YAP1阳性率比较 低分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组与中分化组（P<0.05）；中分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组（P<0.05）。见表2。

2.4 子宫颈癌患者病理分级与MVD、YAP1表达情况相关性分析 Spearman相关系数法结果显示，子宫颈癌患者病理分级与MVD、YAP1表达呈负相关（P<0.05），见表3。

3 讨论

肿瘤侵袭转移是多阶段、多步骤的复杂过程，包括：肿瘤细胞与其周围间质细胞黏附性改变，肿瘤微血管生成及癌细胞通过酶的降解[10-11]，对组织学屏障造成破坏，尤其是肿瘤微血管生成，能决定肿瘤转移到靶器官或组织后是否继续存活的关键因素[12-13]。Zhu等[14]研究表明：微血管新生能促进子宫颈癌的侵袭与转移，具有明显的促进作用，且与患者预后存在紧密的联系。本研究中，子宫颈癌病灶组织中MVD、YAP1阳性率均高于癌旁组织（P<0.05）；免疫组化染色结果表明：子宫颈癌病灶组织YAP1表达于细胞质与细胞核；而MVD表达于细胞质，呈棕褐色、棕黄色，着色度较高；而癌旁组织中阳性染色细胞较少，MVD、YAP1着色程度较低，从本研究结果看出，MVD、YAP1在子宫颈癌病灶组织中呈高表达，且免疫组织染色下较为明显，有望成为子宫颈癌治疗新靶点。血管生成是指某些情况下，由于血管生长因子的作用，刺激原已存在于毛细血管和毛细血管后静脉等微小血管内皮细胞，并重新进入细胞增殖周期，降解内皮细胞的基底膜，并通過芽生长方式向周围组织中形成毛细血管[15-16]。同时，肿瘤的生长、增大及肿瘤细胞数的增多，与肿瘤局部血管新生有关[17]。因此，子宫颈肿瘤微血管密度的测定，能反映肿瘤生物学行为特征，与临床病理预后存在紧密的联系[18]。

YAP1是近年来发现Hippo信号通路下游关键转录共激活蛋白，在子宫颈癌的发生与发展中发挥了重要作用，能促进组织的再生、维持干细胞自我更新、修复等生物学功能[19]。赖炳佳等[20]结果表明：YAP1能直接参与肿瘤细胞的增殖、凋亡的调节与肿瘤的形成过程，在多种恶性肿瘤中呈高表达。本研究中，低分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组与中分化组（P<0.05）；中分化组MVD、YAP1阳性率均高于高分化组（P<0.05），从本研究结果看出，MVD、YAP1在子宫颈癌不同分级中阳性率存在明显的差异性。分析原因：YAP1可能是一类致癌基因，能直接参与子宫颈癌的发生与进展过程。同时，YAP1为Hippo通路中心信号分子，YAP1过表达时，该通路下游靶信号被激活，YAP1发生去磷酸化反应、活性增加，细胞核内转移和聚集，与转录因子结合并促进结缔组织的生长，从而诱导子宫颈癌相关基因表达异常。本研究中，相关性分析结果表明：子宫颈癌患者病理分级与MVD、YAP1阳性率具有一定相关性（P<0.05），从本研究结果看出，子宫颈癌病理分级与MVD、YAP1存在紧密的联系，加强患者MVD、YAP1测定，能指导临床诊疗。

综上所述，MVD、YAP1在子宫颈癌病灶组织中呈阳性高表达，且与病理分级存在一定相关性，能为临床诊疗提供新方法。

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（收稿日期：2022-11-02） （本文编辑：何玉勤）