HES3对乳腺癌淋巴转移的影响

王铭洁 徐潮阳 黄黎明 徐峰*

乳腺癌是目前我国女性发病率最高的恶性肿瘤，近年来发病率快速上升［1］。非特殊型浸润性乳腺癌占所有乳腺恶性肿瘤的70%～80%，该类癌症分化较低，恶性程度和死亡率较高，预后较差［2］。目前，乳腺癌的治疗方法为手术、放化疗、内分泌治疗、靶向治疗以及免疫治疗，但总体预后不佳［3］。近年研究表明，HES3蛋白参与多种生物学过程，包括肿瘤发生、细胞分化、细胞增殖。HES3 蛋白表达在多种人类肿瘤中失调，常见有肺癌［4］、横纹肌肉瘤［5］。研究表明，在肺癌和横纹肌肉瘤中，HES3 蛋白过表达与淋巴转移和预后不良相关。本研究分析HES3 蛋白表达与乳腺癌的临床病理学参数的相关性。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2021 年11 月至2022 年12 月绍兴市人民医院乳腺癌根治术治疗的114 例女性患者手术切除标本。纳入标准：①具有完整临床资料并接受过乳腺癌根治术的女性患者；②病理确诊断为乳腺癌。排除术前接受过放疗或化疗的患者。患者年龄25～85 岁，平均56.84 岁。本研究经医院伦理委员会批准，患者均签署知情同意书。

1.2 方法 （1）收集患者的临床资料，包括年龄、HES3、Ki-67、多灶、肿瘤最大径等。（2）采用免疫组织化学（IHC）方法检测乳腺癌组织中HES3 蛋白的表达水平。用甲醛固定标本并包埋在石蜡中。将石蜡切片在二甲苯中脱蜡，并使用梯度乙醇（100%、95%、95%、80%、70%和50%乙醇）脱水，在室温下洗涤5 min，然后用ddH2O 洗涤2 次。为淬灭内源性过氧化物酶的活性，切片用0.3% H2O2甲醇溶液处理5 min。开始IHC分析前，将切片浸入95℃的10 mmol/L 柠檬酸盐缓冲液（pH=6.1）中15 min，以回收抗原。通过用10%胎牛血清预孵育切片阻断非特异性抗体结合（GibcoThermo Fisher Scientific，Inc.）在PBS 中与0.01%叠氮化钠在室温下孵育30 min，然后将切片与针对HES3 的抗体在4℃过夜。用PBS 洗涤3 次后，将切片与EnVision-HRP复合物（未稀释；达科；Agilent Technologies，Inc.）在室温下放置1 h。然后将切片在室温下用二氨基联苯胺染色25 s，并在室温下用苏木精复染5 min。用PBS 代替HES3 作为阴性对照。将表现出高水平的HES3 的肺癌组织用作阳性对照。所有IHC 分析步骤均在同一实验室进行。根据细胞染色强度评分和阳性细胞百分比评分的乘积半定量评估表达水平。染色结果由两名独立观察者确定，以避免主观偏见。染色强度表示染色肿瘤细胞的平均强度，按0（无染色）、1（弱染色）、2（中度染色）和3（强染色）的比例缩放，分别记0、1、2、3分。阳性细胞百分比评分：0%＜阳性率≥25%计1 分，25%＜阳性率≤50%计2 分，50%＜阳性率≤75%计3 分，75%＜阳性率≤100%计4 分。计算两个分数乘积以获得最终分数，范围为0～12 分。在光镜下对每份标本随机抽取3 个视野，采用其平均值进行最终分析。HES3 蛋白阳性表达定义为总分≥5 分。

1.3 统计学方法 采用SPSS25.0 统计软件。计量资料以（±s）表示，用t检验。计数资料用n（%）表示，用χ2检验。多因素分析采用Logistic 回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HES3 蛋白在乳腺癌组织中的表达 114 例标本中，有26 例（22.8%）HES3 蛋白在乳腺癌标本中表达。见图1。

图1 HES3在乳腺癌组织中的表达

2.2 HES3 表达与临床病理特征的相关性 与HES3 阴性患者比较，HES3 阳性患者淋巴转移率高（P=0.001），肿瘤较大（P＜0.001）。见表1。

表1 HES3阴性与阳性乳腺癌患者临床病理特征

2.3 乳腺癌淋巴转移的单因素分析 见表2。

表2 乳腺癌淋巴转移的单因素分析

2.4 乳腺癌淋巴转移的多因素分析 肿瘤大小和HES3 是乳腺癌淋巴转移的独立危险因素。见表3。

表3 乳腺癌淋巴转移的多因素分析

3 讨论

乳腺癌作为常见的恶性肿瘤之一，在全球范围内的发病率不断升高［6］。在乳腺癌中，淋巴转移与癌症预后相关，是影响乳腺癌预后的独立危险因素［7］。然而，由于大部分患者确诊时已存在淋巴转移，乳腺癌的总体预后依然较差。因此，探索可以用于乳腺癌患者预后标志物的新生物靶点尤为重要。HES3 的表达已经在多种癌症类型中得到广泛验证，如非小细胞性肺癌、横纹肌肉瘤，大多数研究表明HES3 是患者预后较差的标志物［8］。HES3 可以促进多种人类上皮性肿瘤和神经源性肿瘤的增殖、迁移和侵袭，是未来治疗性干预的一个有前途的靶点［9］。

本研究发现HES3 蛋白表达与乳腺癌淋巴转移相关，HES3 高表达是乳腺癌的不良预后因素，可作为指导乳腺癌治疗和评估预后的指标。大量研究认为淋巴转移是影响乳腺癌预后的独立危险因素，而HES3 蛋白有望成为影响乳腺癌预后新的标志物。在未来的研究中，应继续探索HES3 参与影响乳腺癌的分子机制和途径。