消栓通络片异性有机物及9 种有机氯农药残留量检查

钟艳，辛丽，吴喆，郭林峰，周云峰

1.万载县人民医院，江西 万载 336199；2.宜春市检验检测中心，江西 宜春 336099

消栓通络片源于消栓通络方，共由11 味中药（郁金、丹参、山楂、桂枝、泽泻、黄芪、冰片、川芎、三七、木香、槐花）配伍组成，功能为活血化瘀、温经通络，主要用于中风及高脂血症引起的神情呆痴、手足冰凉、活动疼痛等症候［1-2］，现收录于《中国药典》2020 年版一部。现行质量标准未对该药异性有机物和农药残留进行检查［3］。有研究发现少数制药企业为节约成本会更改生产工艺，该违规行为用法定标准检验难以发觉［4］。另外，由于中药材种植商业化，农药的使用越来越普及，这导致中药材的农药残留问题对药品安全产生风险［5-9］，有必要对中药制剂的外源性有害物质进行控制研究。本研究对消栓通络片中异性有机物和有机氯农药残留量进行检查分析，以期为提升该制剂的质量标准提供借鉴方法，从而进一步保障其临床用药的安全性和有效性。

1 主要仪器与试剂

OLYMPUS Bx41 型电光显微镜（日本奥林巴斯公司）；Agilent 7890A 气相色谱仪（美国安捷伦公司）消栓通络片（20 批，样品信息见表1）；三七对照药材（批号：120941-201810，中国食品药品检定研究院）；玉米淀粉（批号：2018022021YS31，中粮生化能源有限公司）；木薯淀粉（批号：TTC62276，泰华股份有限公司）；8 种有机氯农药混合溶液标准物质（批号：19001，中国计量科学研究院，α-六六六浓度为50.0 μg/mL、β-六六六浓度为50.0 μg/mL、γ-六六六浓度为50.1 μg/mL、δ-六六六浓度为50.2 μg/mL、p,p'-DDT 浓度为50.0 μg/mL、o，p'-DDT浓度为50.1 μg/mL、p，p'-DDE 浓度为50.0 μg/mL、p，p'-DDD 浓度为50.2 μg/mL）；五氯硝基苯标准溶液（批号：GSB05-1845-20116，农业农村部环境保护科研监测中心，浓度为100 μg/mL）。二氯甲烷、石油醚（60～90 ℃）、丙酮均为色谱纯，氯化钠为分析纯，水为一级纯化水。

表1 样品信息

2 方法与结果

2.1 异性有机物

2.1.1 实验方法 随机取样品1 片，剥去糖衣或薄膜衣，置研钵研成细粉，取约0.2 g，加水10 mL 振摇溶解，离心5 min（6 000 r/min），弃去上清液，沉淀物加水2～3 mL混合均匀，取混悬液滴于载玻片上，置显微镜100 倍下观察，除三七原药材外不应检出其他植物组织显微特征。检查点按图1 进行检视。

图1 盖玻片上检查点示意图

2.1.2 检测结果 通过20 批次样品进行检测，发现样品中淀粉粒较多，均检出三七中淀粉粒的显微特征（单粒类圆形，脐点点状、短缝状或人字形，圆粒大者层纹明显，复粒多见）。但在部分样品中存在多角形，脐点中心性，呈圆点状或星状，层纹不明显的异常淀粉粒特征（见图2），可推断部分样品中存在除三七原药材外其他植物组织的淀粉粒显微特征。

图2 供试品显微图：1、4.异常淀粉粒；2、3.三七淀粉粒（×100）

针对以上异性有机物筛查结果，对三七对照药材、玉米淀粉、木薯淀粉中淀粉粒的显微特征进行了检视。取以上三者适量，用水装片，置显微镜下观察可知（见图3），三七对照药材中淀粉粒单粒类圆形，脐点点状、短缝状或人字形，圆粒大者层纹明显，复粒多见；玉米淀粉中淀粉粒均为单粒，多角形颗粒，或呈圆形或椭圆形颗粒，脐点中心性，呈圆点状或星状，层纹不明显；木薯淀粉中淀粉粒多为单粒，圆形或椭圆形，旁边有一凹处，脐点中心性，呈圆点状或线状，层纹不明显。通过显微鉴别法可区分上述三种植物中的淀粉粒，可判定样品中的异性有机物为玉米淀粉粒。

图3 三种植物淀粉粒显微图：A.三七淀粉粒；B.玉米淀粉粒；C.木薯淀粉粒（×100）

2.2 有机氯农药残留量测定［10］

2.2.1 对照品溶液的制备 精密量取五氯硝基苯标准溶液1 mL、8 种有机氯农药混合溶液标准物质2 mL 置200 mL 量瓶中，用石油醚（60～90℃）稀释至刻度，摇匀，得混合对照品母液。精密量取上述混合对照品母液适量，用石油醚（60～90 ℃）制成每1 mL 含α-六六六为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含五氯硝基苯为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含γ-六六六为1.0、5.0、10.0、50.1、100.2、250.5 ng；含β-六六六为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含δ-六六六为1.0、5.0、10.0、50.2、100.4、251.0 ng；含p,p'-DDE为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng；含o,p'-DDT为 1.0、5.0、10.0、50.1、100.2、250.5 ng；含p,p'-DDD为1.0、5.0、10.0、50.2、100.4、251.0 ng；含p,p'-DDT为1.0、5.0、10.0、50.0、100.0、250.0 ng 的溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备 取样品，研细，精密称取细粉适量（相当于药材2 g），按《中国药典》2020年版四部通则2341 项下的处理方法制备供试品溶液，同时制备空白溶液。

2.2.3 色谱条件 Agilent J＆W GC Columns DB-1701毛细管柱（30 m×0.32 mm×0.25 μm），63Ni～ECD电子捕获检测器。检测器温度为300 ℃，进样口温度为230 ℃，进样不设分流比。初始温度为100 ℃，第一阶段升至220 ℃，速率为10 ℃/min，第二阶段升至250 ℃，速率为8 ℃/min，保持10 min。

2.2.4 专属性试验 精密吸取空白溶液、供试品溶液、对照品溶液各1 μL，注入气相色谱仪，得到相应的气相色谱图。见图4。

图4 气相色谱图

2.2.5 线性关系考察与检出限 分别精密吸取一系列浓度的混合对照品溶液各l μL，注入气相色谱仪，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。以S/N=3 时注入仪器的各对照品溶液的量确定仪器检出限。结果见表2。

表2 标准曲线和检出限

2.2.6 样品测定 分别精密吸取样品溶液各l μL，注入气相色谱仪，从标准曲线上计算得相应的浓度，样品中总六六六的含量范围为0～0.05 mg/kg，总滴滴涕的含量范围为0～0.12 mg/kg，五氯硝基苯的含量范围为0.01～0.06 mg/kg。根据《中国药典》2020年版四部9302 项下“中药有害残留物限量制定指导原则”建立消栓通络片农药残留量限值标准。通过计算得到消栓通络片中总六六六、总滴滴涕、五氯硝基苯残留限量分别为0.09，0.19，0.19 mg/kg。按此限度评价，20 批次样品9 种有机氯类农药残留量均低于农药残留量限值，在可控安全范围内。

3 讨论

消栓通络片的法定制备工艺为冰片研细，三七粉碎成细粉，其余药味加水煎煮，滤液减压浓缩成清膏，加入三七细粉，制粒，加入冰片细粉，压制成片，包糖衣或薄膜衣即可。消栓通络片剥去糖衣或薄膜衣后应只具有三七的植物组织特征，但通过显微鉴别发现有2 家企业的8 批次样品中存在玉米淀粉粒显微特征。该制剂的制备工艺并无添加玉米淀粉工序，且药品使用说明书也无标示玉米淀粉成分，提示企业可能擅自添加了玉米淀粉辅料。玉米淀粉虽对人体无毒害作用，但擅自更改处方工艺、添加国家标准处方中未包含的成分可能会影响药效甚至出现安全事故。本研究所建立的显微鉴别分析法可为异性有机物的筛查提供借鉴。

有些中药材商户为防虫蛀，会在中药材种植栽培生产中加入有机氯类农药，提高产量与改善外观［11］。但有机氯农药为持久性有机污染物，其化学性质稳定，半衰期长，毒性大，易残留在药用植物中并通过食物链累积［12-14］，其化学性质特点易将质量风险引入制剂中。在对中药制剂中的有效成分进行控制时，也不能忽视外源性污染有害物对药品质量的影响。因此，对消栓通络片中有机氯农药残留量进行测定，考察残留量水平，评估其安全风险，对保证消栓通络片在临床使用中安全有效具有重要意义。