活动性肺结核早期检验中荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法的价值分析

袁桢，张云杰

（河南省南阳市宛城区疾病预防控制中心 1 化验室，2 结核病防治科，河南 南阳 473000）

肺结核是临床常见的慢性传染疾病，其发生主要与机体免疫能力降低、结合杆菌感染密切相关［1－2］，患者患病后多呈现咳嗽、咳痰、发热等基础症状。近年来，随着我国医疗技术飞速发展，肺结核的鉴别诊断方式逐渐增加，其中痰涂片检查被作为肺结核鉴别诊断的 “金标准”，但考虑其所需操作时间过长，且样本收集方法、染色剂类别等因素会影响检测结果［3］。有相关研究［4］表明，荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法对活动性肺结核具有良好的诊断效能。本研究对比荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法对活动性肺结核的诊断价值，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2020 年3 月至2022 年3 月我中心收治的80 例肺结核患者，其中男性46 例，女性34 例；年龄27～70岁，平均（43.15 ± 4.52）岁；病程2～9 个月，平均（4.86 ±0.57）个月。纳入标准：①经病理学检查、影像学检查明确诊断为肺结核；②意识状态较好，对研究中各项检测配合良好；③知晓研究目的，且自愿签署同意书。排除标准：①存在其他传染性疾病；②机体多器官功能障碍；③严重感染性疾病；④危急重症；⑤因中途转院或其他原因导致病例脱落。

1.2 检测方法①荧光定量检验PCR：在无菌吸管辅助下采集患者1 mL 痰液标本，加入处理液并封管震荡5 mL，室温环境下放置15 min，促进痰标本充分液化。将获取样本转移到锥型离心管予以10 min 常规离心处理，将去除上层清液的样本加入2 mL 处理液，充分震荡后进行荧光定量PCR 检测，仪器选择Prism 7000 型荧光定量PCR 仪（美国应用生物系统公司生产）。荧光定量检验PCR 阳性结果判定标准：扩增曲线Ct 值30～36为 弱阳性，25～29 为 “+”，20～24 为 “++”，15～29 为“+++”，＜15 为 “++++”。②涂片抗酸染色法：常规获取受检对象痰标本后进行固定与加热操作，取金胺 “O” 染色剂滴加于载玻片上，染色时间为30 min，后使用流水洗片，待染色剂完全清除后另外滴加脱色剂并直至整个样本均被覆盖，待痰膜呈现无色状后继续使用流水洗片，上述操作完成后重复滴加染色剂－流动自来水冲洗，并在室内温度下风干，利用低倍显微镜对处理后样本进行筛查，后使用高倍显微镜再次确认检测结果。显微镜下50 视野观察到1～9 条抗酸杆菌为弱阳性，10～49 条为 “+”，显微镜下1 视野内抗酸杆菌1～9 条为 “++”，10～99 条为 “+++”，≥100 条为 “++++”。

1.3 观察指标以最终的临床诊断结果为金标准，比较荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法诊断效能，并分析两种检测方式与金标准的一致性。灵敏度＝真阳性例数／（真阳性例数+假阴性例数）× 100%；特异度＝真阴性例数／（真阴性例数+假阳性例数）× 100%；准确度＝（真阳性例数+真阴性例数）／总例数× 100%。

1.4 统计学方法采用SPSS 21.0 统计软件处理数据。计数资料行χ2检验，一致性采用κ 检验，P ＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法的诊断结果80 例肺结核患者经临床诊断确诊活动性肺结核70 例，非活动性肺结核10 例。以临床诊断结果为金标准，荧光定量检验PCR 诊断敏感度为100.00%（70／70），特异度为90.00%（9／10），准确度为98.75%（79／80）。涂片抗酸染色法诊断敏感度为75.71%（53／70），特异度为20.00%（2／10），准确度为68.75%（55／80）。κ 检验分析结果显示，荧光定量检验PCR 与金标准的一致性较好（κ ＝0.940，P ＜0.05）；涂片抗酸染色法检查结果与金标准的一致性中等（κ ＝0.591，P ＜0.05）。见表1。

表1 荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法的诊断结果（例）

2.2 不同检测方法诊断效能比较荧光定量检验PCR 对活动性肺结核的诊断灵敏度、特异度、准确度均高于涂片抗酸染色（P ＜0.05）。见表2。

表2 荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法诊断效能比较

3 讨论

痰标本是诊断肺结核的 “金标准”，但该检查手段相关操作较多，且易受到痰液收集质量的影响，因此大规模应用于筛查并不现实［5］。痰涂片抗酸染色法是近年来逐渐兴起的一种高效检查手段，在实施染色－洗片－复染操作后能对不易着色的痰液标本进行标记，一定程度上提高诊断结果可信度［6］，但结果易受外界因素影响，因此部分患者在应用该方法筛查时并不能获得理想效果，易出现漏诊、误诊情况。荧光定量检验PCR 应用荧光化学物质对聚合酶链式反应进行实时监控，整个检查过程均在仪器支持下进行，且整个反应过程中的Ct 值在各时间点均与起始拷贝数呈线性增长关系，可有效提高测量结果的准确度。本研究结果显示，荧光定量检验PCR 对活动性肺结核的诊断灵敏度、特异度、准确度高于涂片抗酸染色法（P ＜0.05），表明荧光定量检验PCR 对活动性肺结核具有更好的诊断效能，可提高诊断准确度，为患者疾病早期治疗提供诊断支持。李艳红等［7］选择88 例肺结核患者，收集痰标本后分别进行荧光定量检验PCR 与涂片抗酸染色法检测，结果显示荧光定量检验PCR 对肺结核的诊断效能高于涂片抗酸染色法（P ＜0.05），与本研究结果一致。李苏梅等［8］的研究也认为，荧光定量检验PCR 在痰标本检测与诊断中的应用优势明显，可测量与标记多个荧光信号，为Ct 值相关曲线建立与分析提供更多数据参考。

综上所述，荧光定量检验PCR 对活动性肺结核的诊断效能优于涂片抗酸染色法，可作为早期筛查手段予以推广应用。但在获取痰标本时可能存在抑制因子、标本处理方法不当、DNA提取不当等因素导致结果准确率降低，临床上可针对上述因素予以改善，最大程度提升荧光定量检验PCR 的临床诊断效能。