高效液相色谱法在药品检验中的应用

刘素如

上世纪初期,高效液相色谱法开始出现,之后经过不断发展得到了广泛的应用。现阶段,诸如生物医药、食品科学以及生命科学等诸多领域均已在应用这一技术,而其中应用最多的莫过于药品检验。由现行版《中国药典》中规定的内容可知,此法的应用具有科学性和广泛性,因而在药品检验中得到了非常迅速的发展。就现阶段的实际情况来说,我国药品检验的一个主要检测方法就是高效液相色谱法,相关研究结果也表明,此法和普通检验方法相比,检验结果更加准确,因此针对高效液相色谱法在药品检验中的应用展开深入探究,具有重要的现实意义。

1 高效液相色谱法概述

高效液相色谱法,英文简称为HPLC,属于色谱法范畴,在高压输液系统的辅助下泵入色谱柱内不同极性的溶剂、缓冲液等,并分离相关成分,借助特定仪器展开检测,最终有效分析样本。见图1。现阶段已将其作为一项重要的分离和分析技术广泛应用于包括医学、药学、化学等在内的多个领域［1］。此法相较于经典色谱法来说存在明显差别,通过对新型高压输液泵、固定相的使用,增加了检验结果的精确度,也让溶剂以最短的时间通过色谱柱,加快分离,分离速度远远超过经典色谱法。社会的快速发展,让高效液相色谱法也衍生出了包括离子交换色谱法、分子排阻色谱法以及吸附色谱法等在内的各种分支类型。

图1 高效液相色谱技术装置图

2 高效液相色谱法原理、特点分析

高效液相色谱法以液体为流动相,而在色谱中最关键的一个部分就是高压输液系统［2］。这一方法借助高压输液泵,将比例或是极性不同的溶剂充分混合,向固定相的实验色谱柱中泵入制成的流动相,再借助进样阀向其中注入检测样品,以流动相和柱内相通,之后再完全分离柱内液体,将其慢慢渗入到检测器内并进行监测,从而完成试样化学分析。高效液相色谱法的应用主要借助三部分内容,分别是高效微粒固定相、新型高压输液泵以及高灵敏度检测器,三者合用将经典液相色谱法优势充分发挥了出来。目前,高效液相色谱法在具体应用时采用了高效色谱填料、小口径柱,借助高压输液泵使溶剂能够更快的流通,尽快通过色谱柱。由于高效液相色谱法所采用的高压输液泵工作效率非常高,因此在对药物成分进行检测时花费的时间较短,同时借助色谱柱进行分离,极大的提高了分离效果与检测速度。与经典柱色谱法相比,其能够更快的完成分离,部分甚至超过1000倍以上。因此,高灵敏、高压、高效和高速是高效液相色谱法主要特点,因此高效液相色谱法在临床上具有越来越广的应用范围。

3 高效液相色谱法在药品检验中的应用

3.1 药品有效成分检验 就高效液相色谱法而言,其最关键的一项内容就是药品有效成分检验,对药品质量与安全具有直接影响。每一种新药在进入市场之前均要接受严格的质量检验,对药物中的有效成分予以掌握,在与标准要求相符之后才能上市。通过对高效液相色谱法的应用,能够得到灵敏而精确的检验结果,并针对药品有效药物成分实施目标检验,从而将药物中附形剂带给结果数据的不良影响降至最低。比如,在利用高效液相色谱法检验黄芩片有效成分——黄酮含量时,整个操作过程较为简单,也取得了精准可靠的检验结果。通过这一类技术对药物有效成分的测定,可保障药物质量,推动药品出口［3］。借助高效液相色谱法检验药品质量,检测各区域有效成分的含量,对每个部分的含量进行比较,从而可筛选出最优质量区段。可以看出,在药品检验时依据药物特点选择高效液相色谱法,不仅操作简单方便,还能保证检验结果的准确可靠。

3.2 药物鉴别 每一种药物的药用价值均存在差异,因此一定要仔细鉴别药物,使其作用能得到充分发挥［4］。通过高效液相色谱法对药物进行鉴别,可将时间、组分结构、性质保留下来,并把其当做药物定性的参数。比如,在鉴别南北五味子时,借助高效液相色谱法测定两种五味子中组分含量,采用C18 柱,流动相是配比为65∶35 的甲醇与水,控制流速在1.0 ml/min,检测波长≤250 nm,如此可在最短时间内把南北五味子的组分含量鉴别出来。可见,高效液相色谱法的合理运用,能够为药品鉴别工作提供新的思路和方法。

3.3 药品含量检测 针对药物原料中诸多杂质和成分,均可应用高效液相色谱法进行检测,其花费的检测时间较长,准确性与可靠性也很高［5］。比如,在对阿司匹林肠溶片进行有关物质检查时,由于此药属于水杨酸类化合物,很容易被水解和氧化成醌型物质,因而水溶液不具良好的化学稳定性,对此便可采取高效液相色谱法进行检测。以1%冰醋酸的甲醇溶液为溶剂,一方面能够提高药物溶解性,另一方面也可增强溶液的稳定性,使检验结果更加理想。采用高效液相色谱法对四环素类药物进行检测,能够将四环素类立体异构体与其自身有效分离。对复方金银花颗粒溶液中的有机酸含量进行检测时,可利用高效液相色谱法区分有机酸的类型,便于分析药物代谢机制。总之,以高效液相色谱法对药品进行检验、检测,可准确检查原药品中的杂质限量、成分含量以及中间体含量,防止假药劣药的出现,在确保药品质量的同时,提高用药的安全性［6］。

3.4 抗生素检验 临床在使用抗生素类药物时,患者很容易出现不良反应,究其原因在于药物中有中间体、聚合物和降解产物存在,而借助高效液相色谱法则能够明确各类抗生素药品中的杂质限量,从而科学指导临床用药［7］。以氨苄西林胶囊为例,针对其杂质限量,就可用高效液相色谱法进行检测,在最短时间内将药物的主成分和降解产物、有关物质相分离,对制剂限度予以控制。现阶段,我国抗菌药物均必须进行抗生素含量的测定,同时还包括大量的动物源性食品,以免人们在饮食过程中摄入抗生素残留,引起药物体内蓄积,产生不适,影响身体健康［8］。

3.5 中药质量检测 中药具有复杂的成分,对其进行质量检测往往比较困难,采用常规的检测方法尚难提高结果的准确性［9］。针对中药成分多、分离难的问题,高效液相色谱法已成为测定中药有效成分含量非常有效的一种方法。具体体现在：针对中药的待测组分和其他杂质,高效液相色谱法可在最短的时间内完成对二者的分离,保证后续中药鉴别、检查和含量测定环节的顺利开展。比如,针对复方丹参滴丸中的丹参素和儿茶醛的含量,借助高效液相色谱法进行测定,效果非常好,不仅具有较高的分离度,且定量准确,让定性检测存在的问题得到了较好的解决。所以,将高效液相色谱法应用于中药质量检测中,分离度佳、灵敏度高、操作简便、结果准确可靠,可定量、定性分析测定中药产品中的有效成分,有助于实现中药质量检测的现代化、标准化和规范化。

3.6 手性药物检测 除了在以上几方面发挥了积极的作用外,高效液相色谱法也可用于检测一些难度较大的手性药物。一般来说,手性化合物可通过以下几种方法获得,包括不对称合成、外消旋体拆分、天然物的提取以及生物合成等。据了解,手性药物及其相应的对映异构体,物理性质、化学性质基本相同,因此,在对其进行分离与鉴别时,操作难度就比较大［10］。而高效液相色谱法则可凭借其自身的高灵敏性,在不用进行衍生化的前提下分析、检测手性药物。目前,在手性药物分析中,最常见的一种方法就是色谱分离法,其共包含三部分内容,分别是临界流体色谱、高效毛细管电泳色谱与高效液相色谱,对手性药物拆分意义重大。针对分离起来比较困难的手性药物,可先做衍生化反应,使一个非对映异构分子形成,接着再完成分离检测。总之,高效液相色谱法不论是在手性新药研究,手性药物代谢,还是质量控制过程均有非常高的应用价值,且同时还具有很广泛的发展前景［11］。

3.7 非添加化学成分检验 近年来,日趋激烈的市场竞争,导致市场上出现了诸多声称有药物治疗作用的保健品或假药,而其制假的方式无一例外的都是以非法方式添加化学成分［12］。因此,在对非法添加的化学成分进行检验的过程中,高效液相色谱法是必不可少的分析方法。薄层色谱法与之相比,相对比较复杂,误差率较高,专属性较差。而高效液相色谱法不论是分析能力,还是分离效果均比较强,能够快速进行定量检查,并对药物成分开展分离定性,以保证药品质量,确保药物作用达到最优。

4 高效液相色谱新技术的发展

现阶段,正处于发展中的高效液相色谱新技术主要有3 种,分别是高效液相色谱法-蒸发光散射检测技术(HPLC-ELSD)、高效液相色谱-质谱联用技术(HPLC-MS)和快速高效液相色谱技术［13］。HPLCELSD 技术通过结合蒸发光检测技术和高效液相色谱技术,让过去被含发色团的化合物检测范围所限制的问题得到了有效解决,进而使高效液相色谱技术被应用于更大的范围内。HPLC-MS 技术是在液相色谱技术上运用质谱仪把复杂的有机混合物给有效分离,该种技术主要就是对质谱仪强大的组分鉴定能力予以了运用。快速高效液相色谱技术是基于高效液相色谱技术进一步优化了色谱参数,同时升级、改造了柱子,让柱子面对高压也能够较好的承受,使柱效增加,进而提高高效液相色谱技术的速度、效率,使检测可以在更短的时间内完成［14］。

5 实际案例应用

以复方氨基酸注射液为例,在对其焦谷氨酸含量进行测定时,就可对高效液相色谱技术予以采用,借以体现在药品检验中,高效液相色谱技术的应用效果,具体来说就是,当人体未充分吸收到蛋白质时,受氨基酸过低的影响,机体便会出现新陈代谢障碍,而这个时候若对药物复方氨基酸注射液予以使用,则能够让患者接收到充足的蛋白质,进而使术后营养状况得到有效改善［15］。按照氨基酸总量,这一药物可分为两种规格,即 5% 与12%,而含L-谷氨酸含量也有两种,分别是0.75 mg/ml 和1.80 mg/ml。因为必须在高温条件下制备产品,所以极易导致药物中有焦谷氨酸产生,对此就可借助高效液相色谱技术来测定复方氨基酸注射液中焦谷氨酸的含量。

在具体测定时,应优化色谱条件、测定方法。以Agilent ZORBAXSB-C18 色谱柱作为首选,其耐酸性非常强,能够将样品中的不同组分峰有效分离,且柱温一定要控制在适宜范围内,以便提高柱效。为了让分离效果更为理想,设定pH 值为1.6。同时将样品过柱环节省略,直接测定样品,也降低成分含量,获得准确性、可靠性更高的测定结果。

综上所述,随着社会经济的日新月异,人们越来越注重药品的安全和质量,只有实现药品检验检测技术的飞速发展,才能从根本上保障广大人民群众用药的安全性。随着高效液相色谱技术在大范围内的应用,人们的用药安全已经得到了基本的保障,该检测技术在今后的发展空间广阔、前景远大,值得人们引起高度重视。