大麦茶中总黄酮提取方法的对比研究

梁喜玲，申艳华，刘 忭，康 婕

（1. 陕西省产品质量监督检验研究院，陕西 西安 710048；2. 潞安职业技术学院，山西 长治 046204）

0 引言

大麦，别名牟麦、饭麦、赤膊麦，营养成分较为丰富，与小麦近似，但膳食纤维含量较高。禾本科，也是我国主要种植物之一，在我国的种植资源十分丰富, 大麦的用途相当广泛，可作为粮食工业和食品工业的重要原料[1]，然而相对于其他国家，我国对大麦的研究还十分薄弱，现代研究表明，大麦含有大麦芽碱、黄酮、多糖、多酚类化合物等多种活性成分[1]。大麦中黄酮类化合物的开发和利用，也日益引起广泛的关注。黄酮类化合物，是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分[2]，因其具有独特的化学结构而对人体产生重要的生理、生化作用，有较明显的保健功能。因此，黄酮类化合物在医药、食品领域具有较大的应用价值，其开发和利用也日益引起广泛关注。

有关大麦茶中黄酮类物质的相关研究报道相对较少，季晨忻等人[3]报道过关于大麦茶总黄酮提取的最佳条件。研究不同的提取方法[4]中大麦总黄酮提取量的差异，确定适合于提取大麦总黄酮的可行性方法，为其开发利用提供参考依据。

1 试剂与仪器

1.1 样本、试剂及仪器与设备

样本为安徽亳州地区产的大麦，购自当地市场，称取200 g 粉碎，过60 目筛得到测试试样；试验方法中所涉及到的常规试剂，均为分析纯。

电热恒温水浴锅、ATL-224 型电子天平、T9CS 型紫外-可见分光光度计、KQ-500E 型超声波振荡器、各类玻璃仪器等。

1.2 样本的提取方法

1.2.1 乙醇回流法

称取1.00 g 大麦茶粉加入70%的乙醇溶液30 mL，在80 ℃下回流提取总黄酮1 h，减压抽滤。重复抽提3 次，将滤液合并蒸馏浓缩，用体积分数为70%的乙醇溶液定容于25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.2.2 甲醇超声波提取法

称取1.00 g 大麦茶粉加入体积分数为70%的甲醇溶液30 mL，在超声波振荡器中振摇1 h 减压抽滤。重复抽提3 次，滤液合并蒸馏浓缩，用体积分数为70%的乙醇溶液定容于25 mL 的容量瓶中，得到提取液。

1.2.3 酸碱溶液提取法

称取1.00 g 大麦茶粉加入100 mL 蒸馏水煮至沸腾，边搅拌边缓慢滴加氢氧化钙水溶液调节体系的pH 值为8～9，微沸0.5 h 左右，趁热抽滤。滤渣重复上述操作2 次，合并滤液，在65±5 ℃下用盐酸溶液调节pH 值为5.0，静置24 h 后过滤。将滤渣和滤纸一同放入烧杯中，加入体积分数为70%的乙醇溶液30 mL 静置3 h，抽滤，将滤液浓缩，用体积分数为70%的乙醇溶液定容至25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.2.4 热水提取法

称取样本1.00 g 于玻璃容器中，加入100 mL 蒸馏水，在95 ℃下用水浴恒温振荡器浸提6 h，抽滤，加热蒸馏浓缩，用体积分数为70%的乙醇溶液定容至25 mL 容量瓶中，得到提取液。

1.3 加标回收率试验

以酸碱溶液提取法中的样本为对象研究加标回收率试验，在已测得总黄酮含量的基础上，加入一定体积的芦丁对照品储备液（质量浓度为1 mg/mL），在相同的条件下同时测定样本，加标样本，将测定值与添加量进行比较，考查加标回收率的情况。

1.4 精密度试验

以酸碱溶液提取法中的总黄酮含量作为研究对象，考查精密度试验。4 组总黄酮抽提液在相同的条件下，按照标准曲线的方法测试其含量。

2 试验方法

2.1 标准使用液的配制

称取芦丁对照品50 mg 置于50 mL 容量瓶中，加入体积分数为70%的乙醇溶液振摇溶解并定容，作为对照品储备液。精密吸取10 mL 上述对照品储备液，置于50 mL 容量瓶中，加入体积分数为70%的乙醇溶液，振摇溶解，定容至刻度，作为芦丁对照品使用液。

2.2 标准曲线的制备

分别移取一定体积的使用溶液（0，1，2，3，4，5，6 mL） 置于25 mL 带刻度的玻璃比色管中，加水定容至6 mL，各加入质量分数为5%的亚硝酸钠溶液和质量分数为10%的硝酸铝溶液1 mL，摇匀，静置6 min，然后加入氢氧化钠溶液10 mL，加水定容摇匀静置15 min。参照国标方法，将紫外-可见分光光度计的波长设定为510 nm 测定吸光度，标准曲线的横坐标为质量浓度，纵坐标为吸光度，绘制标准曲线图（见图1），所拟合的标准曲线线性方程为Y= 0.325 8X-0.003 6（R2=0.999），线性良好，可以采用。

芦丁溶液的标准曲线图见图1。

图1 芦丁溶液的标准曲线图

2.3 样本的测定

每种抽提方法平行做4 组，移取2 mL 提取液，完全参照标准曲线溶液的制备方法操作，然后测定吸光度，根据国标中的公式计算总黄酮的含量。

3 结果与分析

3.1 不同提取方法下大麦茶样本总黄酮含量的测定结果

采用4 种不同的提取方法对大麦茶样本中总黄酮的含量进行了测定，每种方法平行提取4 组，结果保留至小数点后2 位。

不同提取方法中大麦茶总黄酮提取含量见表1。

表1 不同提取方法中大麦茶总黄酮提取含量/ %

由表1 可知，不同提取方法提取大麦茶总黄酮含量排序为酸碱溶液提取法＞乙醇回流法＞甲醇超声波提取法＞热水浸提法；RSD 值均较小，表明重复性较好。

3.2 加标回收验证试验结果

加标回收率试验见表2。

表2 加标回收率试验

在表2 中，是酸碱溶液提取法中的第1 组样本的加标回收试验结果。由表2 可知，样本的加标回收率较高，回收率结果为92.11%～96.01%，相对标准偏差为1.98%，值相对较小，由加标回收率试验结果可看出，该方法可靠性和准确度均较高。

3.3 精密度试验结果

精密度试验结果见表3。

表3 精密度试验结果

由表3 可知，对酸碱溶液提取法中的样本测定4 次平行试验的结果进行分析，总黄酮含量平均值为4.59 g/100 g，相对标准偏差为1.48%，在国标规定的范围内，表明该方法的精密度较好，可以满足检测要求。

4 结论

通过对市售大麦茶中总黄酮的4 种提取方法的含量进行对比，发现乙醇回流法准确度与精密度较高，测定结果准确、可信，为最佳提取方法，平均含量为4.48 g/100 g，该操作方法简单、提取含量高、耗时较短、溶剂乙醇无毒无害，对于总黄酮的提取具有实际参考价值。结果表明，大麦茶中总黄酮含量较为可观，后期可以对乙醇回流提取法做进一步的优化，大麦总黄酮是一种值得去开发利用的植物资源。