红丝酸模止血作用的初步评价

王业静，钱 凯，陈 慧，郭昌洪

（荆州市中医医院，湖北 434000）

红丝酸模为蓼科酸模属红丝酸模Rumex chalepensis Mill．的根及根茎，始载于《中药志》［1］，又名网果酸模、金不换、止血草，味辛、苦，性凉。入肺、肝二经。在我国主要分布在湖北、江西、河南、浙江及安徽等地，其具有清热解毒、破瘀消肿的功效，常用于止血和治疗痢疾［2-4］。单味中药金不换（学名红丝酸模）冲剂是本院传统药，前期临床应用认为，其具有理气活血、破瘀生新、消肿生肌之功效用，单味药或复方治疗上消化道出血、幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，Hp）相关性胃炎、消化性溃疡、十二指肠球部溃疡等均取得了较好的疗效［5］。但近年来鲜有其止血作用的药理研究文献报道，而且药效物质基础不清，本文通过对红丝酸模体内止血药效进行初步探讨，为红丝酸模临床应用提供理论依据，也为后续对红丝酸模活性物质基础及科研制剂的研究提供试验基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 健康KM 种SPF 级小鼠90 只，雌雄各半，体重（20±2）g，由长江大学医学部实验动物中心提供［许可证号：SCXK（京）2021-0018］。

1.1.2 药物 红丝酸模采自湖北省荆州市公安县章庄铺镇，经黑龙江中医药大学王振月教授鉴定为廖科酸模属植物红丝酸模，去掉根茎残基，根及根茎清洗干净，切片，干燥，得其饮片。

1.1.3 实验材料与试剂 阳性对照药：云南白药胶囊（云南白药集团股份有限公司，批号ZHB2102）；无水乙醇（市售分析纯）；羧甲基纤维素钠（市售分析纯）；真空采血管（武汉致远医疗科技有限公司，批号20210222）；抗凝剂：枸橼酸钠（市售分析纯）；灌喂针，毛细管（0.1 mm×100 mm），定性滤纸，移液枪，圆底烧瓶，布氏漏斗，抽滤瓶等。

1.1.4 实验仪器 HH-M4 数显恒温水浴锅（上海赫田科学仪器有限公司）；RE-3000A 旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；3-5N 台式离心机（湖南恒诺仪器设备有限公司）；DFT-50A 手提式高速粉碎机（温岭市林大机械有限公司）；PS-390 计时器（深圳追日电子科技有限公司）；筛网（5 号筛，80 目）。

1.2 方法

1.2.1 红丝酸模水提物和醇提物的制备

1.2.1.1 水提物的制备 称取红丝酸模粉末50 g，加蒸馏水500 ml，浸泡2 h 后倒入圆底烧瓶，置于电热套中加热至微沸，煮沸30 min，过滤，离心取上清液，剩余药渣再加蒸馏水400 ml，提取30 min，过滤，离心取上清液，合并两次药液，加热浓缩至50 ml，浓度为1 g/ml。-20 ℃冰箱密封保存，备用。

1.2.1.2 醇提物的制备 称取红丝酸模粉末50 g，加75%乙醇500 ml，浸提48 h，布氏漏斗过滤，药渣加75%乙醇400 ml，浸提48 h，抽滤，合并两次滤液，浓缩，挥干溶剂，得浸膏5.750 5 g。每0.115 0 g 浸膏相当于原药材1 g。置于-20 ℃冰箱密封保存，备用。

1.2.2 试验分组与给药

1.2.2.1 分组 健康KM 种SPF 级小鼠90 只（雌雄各半），体重为（20±2）g。随机分9 组，分别为空白对照组，模型对照组，红丝酸模醇提物和水提物低剂量组（1.95 g/kg）、中剂量组（3.90 g/kg）和高剂量组（7.80 g/kg），阳性对照组（0.26 g/kg），每组10 只动物。试验期间动物都在相同的环境下进行饲养，动物自由地进食进水，明暗12 h 交替喂养。所有动物均于试验前12 h 禁食不禁水。

1.2.2.2 给药 红丝酸模醇提物组和水提物组分别灌胃不同浓度药物的0.5%CMC-Na 氯化钠注射液混悬溶液，连续7 d，1 次/d；模型对照组、空白对照组给予等剂量0.5%CMC-Na 的水溶液，阳性对照组予云南白药氯化钠注射液溶液，连续给药7 d，1 次/d。

1.2.3 小鼠胃溃疡出血模型的制作 除空白对照组以外，其余的组别均需要建模。本实验采用无水乙醇法建模。连续给药7 d，1 次/d 灌胃，末次给药1 h 后，灌胃给予无水乙醇10 ml/kg 造模，1 h 后分别采用断尾法、毛细管法测定各组小鼠的出血时间和凝血时间，采血后颈椎脱臼处死，剖腹取胃，计算出血指数［6-8］。

1.2.4 考查指标

1.2.4.1 断尾法测定出血时间 末次给药1 h 后，用剪刀在小鼠尾尖10 mm 处剪断，发现血液溢出时开始计时，每隔5 mm 处剪断，发现血液溢出时开始计时，每次间隔10 s 用滤纸吸尾部末端一次，直至滤纸取吸无血迹为止，记录实验结果［9-10］。

1.2.4.2 毛细管法测定凝血时间 用内径为0.1 mm、长10 cm 的毛细管斜45°插入小鼠内眦球后静脉丛，自血液注满毛细管开始计时，每间隔10 s 折断毛细管10 mm，然后慢慢拉开，并观察折断处有无血凝丝出现，记录从毛细血管采满血到出现血凝丝的时间，每只小鼠取3 次，计算平均值，记录实验结果［9-10］。

1.2.4.3 胃溃疡出血计分方法 采血后颈椎脱臼处死，剖腹取出胃，沿胃部大弯剪开，用NS 清洗，洗净后展开，定型，计算出血指数。参考标准：瘀血点计1 分，线状瘀血长度小于1 mm 者2 分，1～2 mm 者3 分，3～4 mm 者4 分，大于5 mm 者5 分，全胃指数总和即该小鼠的出血指数［11-12］。

1.3 统计学方法 采用SPSS 20.0 软件进行统计分析，单因素方差分析和LSD 方法进行统计分析，数据结果用x±s 表示，P＜0.05 具有统计学意义。

2 实验结果与分析

2.1 无水乙醇法建立小鼠胃溃疡出血模型图 无水乙醇法造模后，解剖模型组小鼠可肉眼观察到与正常对照组不同，胃黏膜表现出一定程度的损伤，胃内壁较清洁，胃体松软，缺少张力，可见点状或条索状黏膜出血。见图1。

图1 无水乙醇法建立小鼠胃溃疡出血模型图

2.2 出血时间和凝血时间 各组小鼠出血时间和凝血时间结果见表1。从表格中数据可知，与空白组比较，模型组小鼠的出血时间和凝血时间明显延长，具有显著性差异（P＜0.01），提示造模成功；用药组中水提取物和醇提取物中、高剂量组小鼠出血时间和凝血时间明显缩短，具有统计学意义（P＜0.05）。与模型组比较，红丝酸模水提物及醇提物的中、高剂量组均能够显著缩短小鼠的出血时间和凝血时间，具有统计学意义（P＜0.01），但作用弱于阳性药。

表1 红丝酸模对胃溃疡出血模型小鼠出血时间和凝血时间的影响（±s，n=10）

表1 红丝酸模对胃溃疡出血模型小鼠出血时间和凝血时间的影响（±s，n=10）

与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

组别 给药剂量（g/kg） 出血时间（s） 凝血时间（s）空白组 - 485.18±126.10△ 89.75±8.27△△模型组 - 612.11±124.78* 106.83±12.90**阳性组 0.26 282.00±105.06**△△58.84±5.51△△红丝酸模75%醇提物 1.95 477.25±175.39△ 86.00±13.99△红丝酸模75%醇提物 3.9 374.42±106.25*△△ 76.58±17.46*△△红丝酸模75%醇提物 7.8 366.11±134.07*△△ 75.89±15.97*△△红丝酸模水提物 1.95 471.50±107.42△ 82.17±9.94△△红丝酸模水提物 3.9 347.11±121.90*△△ 78.85±9.53*△△红丝酸模水提物 7.8 342.67±160.92*△△ 79.60±8.32*△△

2.3 胃溃疡出血指数 由表2 中所知，与空白组比较，模型组出血指数明显增大，具有显著性差异（P＜0.05），也说明小鼠胃出血模型造模成功；与模型组比较，红丝酸模水提取物及醇提取物中、高剂量均可以明显减少小鼠胃的出血指数，有显著性差异（P＜0.05）。

表2 红丝酸模对模型小鼠胃溃疡出血指数的影响（±s，n=10）

表2 红丝酸模对模型小鼠胃溃疡出血指数的影响（±s，n=10）

与空白组比较，*P＜0.05；与模型组比较△P＜0.05

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综上所述，红丝酸模水提物及醇提物中、高剂量组与模型组比较能显著缩短出血时间、凝血时间（P＜0.01），能显著降低出血指数（P＜0.05），肉眼可见出血点数和条数减少，颜色呈不同程度黑褐色着染，胃黏膜损伤明显减弱。说明该剂量组红丝酸模具有一定的止血作用，能对抗乙醇引起的胃黏膜出血性损伤。

3 讨论

凝血时间和出血时间均为研究止血类药物的常用筛选指标［12］。出血时间的长短主要与血液中血小板的质量和数量以及毛细血管收缩性能有关；凝血时间的长短主要与体内各种凝血因子的功能和含量有关。本实验表明红丝酸模水提物及醇提物中、高剂量组均能缩短小鼠凝血和出血时间，说明其具有一定的止血作用。正常的止血功能是由血管、血小板和血液凝固来完成的，三者相互联系，协同作用。当血管壁破损时血小板才迅速定位于应当形成止血栓的位置，并与血管内皮暴露出来的胶原纤维和基膜结合，快速黏附到血管壁上，继之血小板被活化，同时发生聚集，并释放出多种凝血物质。在止血的初级阶段血小板的积聚十分重要［13］。后期本课题组将在进一步对红丝酸模止血活性成分进行筛选的同时，对其止血作用机制进行初步研究，包括血小板的生成和聚集、血管收缩性能、凝血因子和血液黏稠度等方面，以期为本院科研制剂的开发提供一些借鉴。

目前国内胃溃疡出血模型常见的造模方法有幽门结扎法、水浸拘束法、消炎痛法、乙酸烧灼法及乙醇法等胃溃疡模型［14］。此外，还可以采用热性中药进行造模，比如用干姜、肉桂和附子等各100 g 建立热盛模型；辣椒水和乙醇混合给大鼠灌胃造成胃热模型等。本实验表明红丝酸模水提物及醇提物高中剂量组对酒精性胃溃疡有明显的治疗作用，然而不同的造模方法，可以形成不同的独特证候，后期本实验也将进一步对不同动物模型进行筛选研究，观察红丝酸模对不同证候的胃溃疡模型是否具有治疗效果，为临床合理应用提供依据。