CircPAPPA、miR-3127-5p表达与子痫前期妊娠结局的相关性分析

王小凤，韩程成，康 瑛，贺同强，曹引丽

(西北妇女儿童医院妇产科，陕西 西安 710061)

子痫前期(pre-eclampsia，PE)是一种妊娠特异性综合征，全球发病率为4%～8%，主要发生在妊娠中后期，其特点是血压升高并伴有蛋白尿、多器官并发症，严重影响母婴结局，是导致孕产妇和胎儿死亡的重要原因，具体发病原因尚不明确[1-2]。有研究认为PE的发生与滋养细胞侵袭力不足导致子宫螺旋动脉重铸障碍有关[3]。环状RNA(circular RNA，circRNA)可调控细胞增殖、迁移与侵袭等多种细胞功能，研究显示，circRNA可调控胎盘滋养细胞侵袭及血管生成，参与PE的发生发展[4]。环状RNA妊娠相关蛋白A(circular RNA pregnancy-associated plasma protein-A，CircPAPPA)属于circRNA之一，CircPAPPA在PE患者胎盘与血浆中表达水平降低，下调CircPAPPA通过抑制滋养层细胞增殖促进PE的发生发展[5]。miR-3127-5p可调控肿瘤细胞增殖与迁移、上皮间质转化及肿瘤耐药，如在肝癌中，敲减miR-3127-5p可通过靶向调控细胞周期素依赖性激酶10(cyclin-dependent kinase 10，Cdk10)的表达抑制肝癌细胞侵袭及迁移[6]。通过starbase在线分析显示，CircPAPPA、miR-3127-5p存在靶向结合位点，推测CircPAPPA、miR-3127-5p共同参与PE的发生发展。目前CircPAPPA、miR-3127-5p在PE的临床研究报道不多，本研究探讨CircPAPPA、miR-3127-5p在PE患者血清中的表达情况，探讨二者与PE的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2020年6月至2022年3月在西北妇女儿童医院产前检查的93例PE孕妇为研究对象，作为PE组，年龄(27.35±5.76)岁；选择同期健康孕妇90例作为对照组，年龄(26.87±5.81)岁。根据病情严重程度，将PE患者分为轻度组(53例)和重度组(40例)。纳入标准：①符合PE诊断标准[7]；②自然妊娠且为单胎的孕妇；③年龄20～40岁；④有完整的产检记录。排除标准：①原发性高血压、糖尿病、甲状腺功能亢进等患者；②有精神疾病的患者；③心、肝、肾等主要脏器病变及感染性疾病、免疫系统疾病等；④胎儿畸形、胎盘早剥等其他产科并发症。本研究经我院伦理委员会批准，患者均知情并同意。

1.2 方法

1.2.1 临床资料收集

记录患者年龄、孕前身体质量指数(body mass index，BMI)、分娩孕周、孕次、产次等资料，测量收缩压、舒张压，收集24h尿液，采用双缩脲法检测24h尿蛋白。

1.2.2 血清CircPAPPA、miR-3127-5p的检测

采用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)检测血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平。所有孕妇孕20～34周采集空腹静脉血5mL，15 000rpm离心10min收集血清,-80℃保存。在血清中加入TRIzol试剂(百奥莱博，货号：GL1311)提取总RNA，分光光度仪(赛默飞，型号NanoDrop 2000C)检测RNA纯度和浓度，按照逆转录试剂盒RT Master Mix for qPCR II(MCE，货号：HY-K0510A)说明书合成cDNA，在CFX96荧光定量PCR仪(伯乐)上，使用SYBR Green qPCR Master Mix(MCE，货号：HY-K0501A)试剂盒进行PCR反应。引物序列购自生工生物工程(上海)股份有限公司，其中CircPAPPA上游引物序列(5′-3′)：TGTGGCCTCCATCCTACATCTCAA；下游引物序列(5′-3′)：CAGGTGCGGACACTGGACTTAC。GAPDH上游引物序列(5′-3′)：TGACTTCAACAGCGACACCCA；下游引物序列(5′-3′)：CACCCTGTTGCTGTAGCCAAA。miR-3127-5p上游引物序列(5′-3′)：ATCAGGGCTTGTGGAATGGG；下游引物序列(5′-3′)：GAACATGTCTGCGTATCTC。U6上游引物序列(5′-3′)：TGGCTCAACTACGATCGGCA；下游引物序列(5′-3′)：GGACTCACCGATGGTACAGA。实验结束后，分别以GAPDH、U6为内参，采用2-△△Ct法计算CircPAPPA、miR-3127-5p的相对表达水平。

1.2.3 妊娠结局判断

对所有PE孕妇进行随访，记录不良妊娠结局，包括胎儿生长受限、新生儿死亡、早产、胎儿窘迫、新生儿窒息等。根据妊娠结局分为良好组(31例)和不良组(19例)。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 PE组与对照组一般资料比较

PE组与对照组的年龄、孕前BMI、孕次、产次比较差异均无统计学意义(P>0.05)，PE组剖宫产比例、舒张压、收缩压、24h尿蛋白显著高于对照组，分娩孕周显著低于对照组(P<0.05)，见表1。

表1 PE组与对照组一般资料比较Table 1 Comparison of general data between the PE group and the control

2.2 PE组与对照组血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平比较

与对照组比较，PE组患者血清CircPAPPA表达水平显著降低，miR-3127-5p表达水平显著升高(t值分别为10.862、15.749，P<0.05)，见表2。

表2 PE组与对照组血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平比较Table 2 Comparison of serum CircPAPPA and miR-3127-5p expression levels between the PE group

2.3 不同严重程度PE患者血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平及24h尿蛋白比较

与轻度组比较，重度组PE患者血清CircPAPPA表达水平显著降低，miR-3127-5p表达水平、24h尿蛋白显著升高(t值分别为7.774、9.652、18.493，P<0.05)，见表3。

表3 不同严重程度PE患者血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平比较Table 3 Comparison of serum CircPAPPA and miR-3127-5p expression levels of PE patients with different

2.4 PE患者血清CircPAPPA、miR-3127-5p水平与临床指标相关性

相关性分析显示，PE患者的血清CircPAPPA、miR-3127-5p与年龄、BMI、孕周、生产方式、孕次、产次无关，CircPAPPA与舒张压、收缩压、24h尿蛋白呈负相关(P<0.05)，miR-3127-5p与舒张压、收缩压、24h尿蛋白呈正相关(P<0.05)，见表4。

表4 PE患者血清CircPAPPA、miR-3127-5p水平与临床指标的相关性Table 4 Correlations between serum CircPAPPA, miR-3127-5p levels and clinical indicators in PE patients

2.5 PE患者血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平相关性

PE患者血清CircPAPPA与miR-3127-5p表达水平呈负相关(r=-0.610，P<0.05)，见图1。

图1 PE患者血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平相关性Fig.1 Correlation between expression levels of CircPAPPA and miR-3127-5p in serum of PE patients

2.6 不同妊娠结局孕妇血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平比较

93例PE患者，有44例发生不良妊娠结局，其中生长受限20例，宫内窘迫12例，早产8例，死亡4例。与良好组比较，孕中、晚期不良妊娠结局孕妇血清CircPAPPA表达水平显著降低，miR-3127-5p表达水平显著升高(孕中期：t值分别为2.582、4.407；孕晚期：t值分别为6.095、6.501，P<0.05)，见表5、表6。

表5 孕中期不同妊娠结局孕妇血清CircPAPPA、 miR-3127-5p表达水平比较Table 5 Comparison of serum CircPAPPA and miR-3127-5p expression levels of pregnant women with different pregnancy outcomes in the second

表6 孕晚期不同妊娠结局孕妇血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平比较Table 6 Comparison of serum CircPAPPA and miR-3127-5p expression levels of pregnant women with different pregnancy outcomes in the third

3 讨论

3.1 PE发病的可能影响因素

PE特发于妊娠期妇女，可导致孕妇出现高血压、水肿和蛋白尿等症状，严重者可引发子痫、心脏衰竭等各种并发症，并引起胎儿生长受限，是导致孕产妇及胎儿死亡的主要原因，早期诊断及加强早期治疗具有重要意义[8]。非编码RNA(miRNA、circRNA、lncRNA)在血清、血浆中表达稳定，多项研究报道显示，PE患者外周血miRNA、circRNA表达谱与健康人群有差异，通过检测血液中非编码RNA可判断疾病的发生、病情与预后[9]。

3.2 CircPAPPA与PE的相关性

CircRNA通过调节基因表达和转录调控细胞增殖、侵袭及血管生成，参与多种疾病病理过程，如妊娠期高血压、糖尿病、PE等多种妊娠期并发症的发生与发展，已有报道显示，CircRNA在PE患者外周血异常表达，成为PE诊断及病情评估的标志物[10]。CircPAPPA是妊娠相关蛋白A的环状RNA，PAPP-A是孕早期唐氏筛查的参考指标，主要由胎盘绒毛膜滋养层细胞产生，通过调节胰岛素样生长因子(insulin like growth factor，IGF)的活性影响胎盘的发育，PAPP-A在PE中表达水平降低，预测PE发生的敏感度较低[11]。本研究结果显示，PE患者血清中CircPAPPA表达水平显著降低，且重度组PE患者的血清CircPAPPA表达水平显著低于轻度患者，提示CircPAPPA可能参与PE的发生，与PE患者病情严重程度有关。

3.3 miR-3127-5与PE的相关性

circRNA可充当miRNA的海绵分子调控基因表达而参与疾病进展，miR-3127-5p属于miRNA，在肿瘤领域研究的较多，miR-3127-5p在结直肠癌、宫颈癌中下调表达，过表达miR-3127-5p可抑制肿瘤细胞的迁移、侵袭和上皮间质转化过程[12]。另有研究显示，miR-3127-5p可参与调节血管平滑肌细胞功能而参与腹主动脉瘤的发病机制[13]。本研究结果显示，miR-3127-5p在PE患者血清中表达水平显著升高，且轻度PE患者、重度PE患者血清miR-3127-5p表达水平依次升高，提示其可能与PE病情严重程度有关。

3.4 CircPAPPA、miR-3127-5与PE妊娠结局的相关性

相关性分析显示，PE患者CircPAPPA与舒张压、收缩压、24h尿蛋白呈负相关，miR-3127-5p与舒张压、收缩压、24h尿蛋白呈正相关，进一步提示CircPAPPA、miR-3127-5p与PE患者病情严重程度相关。PE的发病机制尚不完全清楚，多数研究认为PE的发生与滋养细胞浸润子宫螺旋动脉过浅有关[14]。Li等[15]研究显示，circPAPPA通过调控miR-3127-5p表达抑制同源框A7(homeobox A7，HOXA7)表达调节滋养层细胞的增殖、迁移和侵袭，介导PE的进展。本研究显示，PE患者血清CircPAPPA、miR-3127-5p表达水平呈负相关，且通过starbase在线分析显示，CircPAPPA、miR-3127-5p存在靶向结合位点，证实CircPAPPA可靶向负调控miR-3127-5p表达，因此推测CircPAPPA通过靶向调控miR-3127-5p表达，抑制滋养细胞增殖与侵袭，导致子宫螺旋动脉重铸障碍，血管重塑障碍，促进PE的发生发展。PE是造成不良母婴结局的重要疾病之一，本研究显示，孕中期、孕晚期不良妊娠结局孕妇血清CircPAPPA表达水平显著低于良好组，miR-3127-5p表达水平显著高于良好组，提示CircPAPPA、miR-3127-5p与PE妊娠结局相关。CircPAPPA水平降低，miR-3127-5p水平升高，可能通过影响滋养细胞浸润加重PE病情，进而影响妊娠结局。

综上所述，PE患者血清CircPAPPA表达水平降低，miR-3127-5p表达水平升高，且与PE病情严重程度及妊娠结局相关，有一定临床应用价值，但其具体作用机制仍需做进一步研究。