miR-1296、miR-1243在甲状腺癌中的表达及其与术后复发、转移的关系*

刘海楠，冯玉俊，郭连峰，王林娜，赵正历

1.河北省残疾人康复中心，河北石家庄 050081；2.衡水市人民医院，河北衡水 053000

甲状腺癌(TC)是头颈部常见的恶性肿瘤，其中80%～90%为甲状腺乳头状癌(PTC)，多数患者术后预后良好，但仍有30%的患者术后出现复发、远处转移，导致患者预后较差[1-2]。因此，积极寻找TC病情评估及监测术后复发、远处转移的标志物具有重要意义。研究发现，微小RNA(miRNA)参与恶性肿瘤的发生、进展，可为临床有效治疗癌症提供新的策略[3]。miR-1296被证实在三阴性乳腺癌中具有巨大的治疗功效，且在胶质瘤等多种癌症中发现了miR-1296表达异常减少[4-5]。此外，miR-1243也是与恶性肿瘤密切相关的miRNA，具有调控肿瘤细胞增殖、迁移和侵袭的作用[6]。目前国内外关于miR-1296、miR-1243在TC中表达情况的研究较少，本研究重点探讨TC癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平及其与术后复发转移的关系，初步探讨二者对TC发生发展及预后的影响。

1 资料与方法

1.1一般资料 经河北省残疾人康复中心和衡水市人民医院伦理委员会审批通过，选取2020年3月至2021年3月于河北省残疾人康复中心和衡水市人民医院治疗的85例TC患者，男33例、女52例，年龄26～75岁、平均(54.89±9.37)岁，病理类型：乳头状癌72例、滤泡状癌13例，病灶数目：单发50例、多发35例，肿瘤最大径：≤2 cm 46例、>2 cm 39例；临床分期：Ⅰ～Ⅱ期53例、Ⅲ～Ⅳ期32例，有颈部淋巴结转移者30例，分化程度：低分化42例、中分化26例、高分化17例。纳入标准：(1)符合TC诊断标准[7]；(2)首次检出；(3)术前未进行放化疗；(4)无手术禁忌；(5)对本研究知情同意并签署知情同意书。排除标准：(1)术前已发生其他脏器转移者；(2)合并严重感染或其他恶性肿瘤者；(3)精神疾病患者。

1.2仪器与试剂 RNA提取试剂盒购自北京索莱宝科技有限公司，批号20191226。反转录试剂盒购自美国Promega公司。SYBR Premix Ex Taq Ⅱ试剂盒购自武汉科昊佳生物科技有限公司。miR-1296、miR-1243、U6引物均购自上海生工生物工程股份有限公司。

1.3方法 所有患者均取术中TC癌组织及癌旁组织(癌旁2 cm)，即刻送检，采用实时荧光定量PCR检测miR-1296、miR-1243表达水平。取100 mg组织标本，采用RNA提取试剂盒以Trizol法提取总RNA，采用反转录试剂盒反转录合成cDNA，参照SYBR Premix Ex Taq Ⅱ试剂盒说明书设计反应体系和反应条件，进行PCR，反应步骤：95 ℃ 15 min，95 ℃ 15 s，55 ℃ 30 s，70 ℃ 30 s，共40个循环；miR-1296正向引物为5′-ATGGACTTCCGGTCAGGTTCA-3′，反向引物为5′-GCCCTTGCCCAGTAGCTTCA-3′；miR-1243正向引物为5′-CAGGCATGGAGACGCTACTGA-3′，反向引物为5′-TCCGATCGCAGGTGACTGA-3′；以U6为内参基因，U6正向引物为5′-CTCGCTTCGGCAGCACATATACT-3′，反向引物为5′-ACGCTTCACGAATTTGCGTGTC-3′。应用公式2-ΔΔct计算miR-1296、miR-1243的相对表达水平。

1.4观察指标 (1)癌组织、癌旁组织中miR-1296、miR-1243表达水平。(2)不同临床病理特征(性别、年龄、病理类型、病灶数目、肿瘤最大径、临床分期、颈部淋巴结转移、分化程度)患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平。(3)随访1年，统计患者术后复发、远处转移情况[8]，比较复发与未复发患者、远处转移与无远处转移患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平。

2 结 果

2.1癌组织、癌旁组织中miR-1296、miR-1243表达水平比较 TC患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平均较癌旁组织低(P<0.05)，见表1。

表1 癌组织、癌旁组织中miR-1296、miR-1243表达水平比较

2.2不同临床病理特征患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平比较 不同性别、年龄、病理类型、病灶数目、肿瘤最大径、肿瘤分化程度患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)；临床分期Ⅲ～Ⅳ期者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平较Ⅰ～Ⅱ期者低(P<0.05)，有颈部淋巴结转移者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平较无转移者低(P<0.05)。见表2。

表2 不同临床病理特征患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平比较

续表2 不同临床病理特征患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平比较

2.3miR-1296、miR-1243表达水平与TC临床病理特征的相关性 Spearman相关性分析显示，TC组织中miR-1296、miR-1243表达水平与临床分期、颈部淋巴结转移(无=0，有=1)均呈负相关(r<0，P<0.05)，见表3。

表3 miR-1296、miR-1243表达水平与TC临床病理特征的相关性

2.4不同预后患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平 随访1年，所有患者均完成随访，复发14例，发生远处转移10例。复发者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平较未复发者低，远处转移者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平较无远处转移者低(P<0.05)。见表4。

表4 不同预后患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平

续表4 不同预后患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平

2.5miR-1296、miR-1243表达情况与TC术后复发、远处转移的交互作用 以TC患者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平均值为界，分为低表达(<均值)和高表达(≥均值)。交互作用分析显示，癌组织中miR-1296低表达、miR-1243低表达与TC术后复发、远处转移中呈正向交互作用(γ=2.034、1.718，P<0.05)，且均为超相乘模型。见表5、6。

表5 癌组织中miR-1296、miR-1243表达情况与TC术后复发的交互作用分析

表6 癌组织中miR-1296、miR-1243表达情况与TC术后远处转移的交互作用分析

3 讨 论

TC是起源于甲状腺滤泡上皮或滤泡旁上皮细胞的恶性肿瘤，细针穿刺活检是临床诊断TC的重要方法，但穿刺活检结果易受肿瘤大小、位置等因素影响，导致部分患者不能确诊[9]。越来越多的研究显示，miRNA可作为TC诊断的标志物[10-11]。

miR-1296是一种参与多种肿瘤发生发展的标志物，如ZANG等[12]认为miR-1296能抑制乳腺癌细胞的生长、迁移和侵袭。DENG等[13]研究显示miR-1296表达与非小细胞肺癌预后相关，并通过Wnt信号抑制细胞增殖和侵袭。但miR-1296在TC中的研究较少。本研究结果显示，TC患者癌组织中miR-1296表达水平明显低于癌旁组织，且随着TC患者临床分期的增加、发生颈部淋巴结转移，癌组织中miR-1296表达水平降低更明显。可见，癌组织中miR-1296表达水平与TC的发生有关，并参与了TC肿瘤增殖及转移。目前已知的miR-1296靶基因包括SRPK1、KEGG等，但miRNA的调节网络相当复杂，miR-1296被证实与MAP17存在结合位点，二者表达呈负相关，其可能通过靶向调控MAP17参与TC的发生、发展[14]。而MAP17能通过降低p53的稳定性促进PTC的发生[15]。本研究还发现，TC癌组织中miR-1296表达水平与临床分期、颈部淋巴结转移呈负相关，进一步说明miR-1296低表达与TC进展有关。但季昳弛等[14]的研究结果显示，癌组织中miR-1296相对表达量与PTC患者肿瘤最大径密切相关。而本研究中不同肿瘤最大径TC患者癌组织中miR-1296表达水平无明显差异，与上述研究结果存在一定差异，这可能与研究对象、样本量不同有关，仍需通过大样本的前瞻性研究进一步验证。

此外，有报道指出PTC患者癌组织中miR-1243表达下调，与PTC的进展呈负相关，可能具有抑癌作用，但其机制尚未明确[16]。本研究结果显示，TC患者癌组织中miR-1243表达水平均低于癌旁组织，且TC癌组织中miR-1243表达水平与临床分期、颈部淋巴结转移呈负相关，与上述研究结果基本一致，说明miR-1243参与TC的发生，并可能发挥抑制TC进展的作用。miR-1243具有靶向抑制Akt1、Akt2表达的作用，而Akt1、Akt2则能促进肿瘤细胞增殖、转移，miR-1243表达下调导致对Akt1、Akt2的抑制作用降低，从而促进PTC的发生发展[17-18]。但miR-1243是否能通过其他途径调节TC的发生发展尚未可知。本研究结果显示，复发、远处转移者癌组织中miR-1296、miR-1243表达水平明显低于未复发、无远处转移者，提示癌组织中miR-1296、miR-1243表达与TC患者预后有关。本研究进一步分析了TC癌组织中miR-1296、miR-1243表达与术后复发转移的关系，结果发现癌组织中miR-1296低表达与miR-1243低表达均会明显增加术后复发、远处转移风险，且二者在TC术后复发、远处转移中均呈超相乘模型的正向交互作用，即miR-1296与miR-1243同时低表达会增加各自对预后的作用效应。分析其原因可能在于，miR-1296能抑制肿瘤细胞的生长、迁移和侵袭，其表达致使其上述抑制作用减弱，而miR-1243表达水平降低导致其靶向抑制Akt1、Akt2表达的作用减弱，证实Akt1、Akt2表达及活性增加，因此miR-1296与miR-1243同时低表达会促进肿瘤细胞增殖、转移，增加术后复发、远处转移风险。由此可见，采用miR技术调控癌组织中miR-1296、miR-1243表达可影响TC恶性生物学特征即预后，可为TC的靶向治疗提供新思路。

综上所述，miR-1296、miR-1243在TC癌组织中的表达明显降低，二者表达水平与TC临床分期、颈部淋巴结转移呈负相关，且在TC术后复发转移中发挥负向调控作用，可作为评估TC临床病理特征及预后的生物标志物。但本研究仍存在一定局限性，未探究TC患者血清中miR-1296、miR-1243水平及临床意义，未来工作中仍需进一步深入探讨。