三七与丹参合剂对大鼠疼痛变化的影响

付立波 王一冰 朱妮娜 王紫怡

(长春师范大学生命科学学院，吉林 长春 130032)

三七有效成分提取物三七皂苷可修复受损的神经元〔1〕，而三七皂苷有R1、R2、R4、R6 等物质〔2〕。丹参根及根茎有活血化瘀、安神养血、清心除烦等功能〔3，4〕，丹参中主要成分是丹参酮，丹参酮可阻止男性激素产生，减少皮脂产生，减轻由细菌引发的炎症疾病〔5〕，具有活血化瘀、改善微循环的作用，并且丹参酮对多种革兰阳性球菌抗菌感染有良好的抑制作用〔6，7〕，因此市场需求量大，开发利用价值高〔8，9〕。我们前期〔10，11〕研究发现，单体三七水煮液对大鼠有镇痛作用，而与丹参合剂对雄性正常大鼠和炎症大鼠痛觉变化的影响研究，在国内外尚未见报道，为了进一步验证三七与丹参中药合剂对大鼠的痛觉调节作用，本试验采用灌胃及行为药理学等方法，观察与记录不同浓度的三七与丹参合剂对大鼠痛觉变化的影响，为三七与丹参合剂在临床上镇痛应用提供理论依据，同时也为临床中药在镇痛方面的研究与开发提供了新的思路。

1 材料与方法

1.1实验动物 8只雄性大鼠购于吉林大学试验动物中心，每个大鼠单独饲养，自由进食喝水，正常光照，温度21～25℃。

1.2药品 主要成分为丹参与三七胶囊，购于长春市康爱大药房。将丹参与三七胶囊称量后置于瓷缸中，隔水加热制备成母液，之后用母液来配制20.95、41.90、62.85 mg/ml的丹参与三七的合剂。

1.3主要仪器 智能热板仪(型号为YLS-3E)、电子压痛仪(型号为YLS-6B)，均由安徽省正华生物仪器设备有限公司提供；灌胃针(型号为：810216)由上海化科实验器材有限公司提供。

1.4大鼠疼痛实验

1.4.1正常大鼠疼痛实验 在进行行为学实验之前对雄性正常大鼠进行为时 7 d的热板和压板致痛适应性训练。适应性训练后第1天8只大鼠灌胃生理盐水，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min后爪缩爪反应潜伏期(HWL)，作为对照组数据。适应性训练后第2天8只大鼠灌胃20.95 mg/ml三七与丹参合剂，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作为低剂量组数据。适应性训练后第3天8只大鼠灌胃41.90 mg/ml三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点HWL，作为中剂量组数据。适应性训练后第4天8只大鼠灌胃62.85 mg/ml三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点HWL，作为高剂量组数据。

1.4.2炎症大鼠疼痛实验 在进行行为学实验前3～4 h，在每只大鼠的左侧足皮下注射新配制的2%鹿角菜溶液作为致炎剂，每只每次注射 0.1 ml。大鼠在注射致炎剂后，脚掌肿胀变红，尾巴开始变黑，几天后个别大鼠还会有断尾现象。致炎剂长时间放置会变性，对实验数值产生影响，每次致炎时都应重新配置。正常大鼠疼痛实验后第1天，炎症大鼠建模后，8只大鼠灌胃生理盐水，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作为Y-对照组数据。第2天8只大鼠灌胃20.95 mg/ml三七与丹参合剂，用热板与压板测痛仪测定灌胃前及灌胃后5、10、15、20、30、45、60 min HWL，作为Y-低剂量组数据。适应性训练后第3天8只大鼠灌胃41.90 mg/ml三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点HWL，作为Y-中剂量组数据。适应性训练后第4天8只大鼠灌胃62.85 mg/ml三七与丹参合剂，同上方法测定灌胃后不同时间点HWL，作为Y-高剂量组数据。

1.5疼痛测试

1.5.1热板法 实验前将热板仪器预热到 52℃，一只手握住大鼠的身体，另一只手捏住大鼠腿部关节部位使其腿完全伸直，将模型大鼠后爪放置热板上，当其后爪完全与热板面充分接触时，打开开关，待大鼠感到疼痛主动回缩后爪时，关闭开关，此时记录的数据作为大鼠的HWL。

1.5.2压板法 使用压力测痛仪对大鼠进行压力测试。将大鼠爪的关节处置于压力测痛仪测痛区域，打开开关，待大鼠感到明显疼痛后爪往回收缩时，关闭开关停止计时，记录大鼠HWL。

1.6统计学分析 采用SPSS16.0 统计学软件进行独立样本t检验、单因素方差分析。

2 结 果

2.1灌胃丹参和三七合剂对正常大鼠HWL的影响 低、中、高剂量组灌胃5、10、15、20、30 min时热板及压板试验HWL均显著高于对照组(P<0.05);中、高剂量组灌胃45 min时压板试验HWL均显著高于对照组(P<0.05)。说明丹参和三七合剂对正常大鼠有镇痛作用，且在灌胃后5 min时效果最佳。见表1。

表1 正常大鼠热板与压板HWL比较

2.2灌胃丹参和三七合剂对炎症大鼠HWL的影响 Y-低、中、高剂量组灌胃5、10、15、20、30 min时热板及压板试验HWL均显著高于Y-对照组(P<0.05);Y-中、高剂量组灌胃45 min时压板试验HWL均显著高于Y-对照组(P<0.05)。说明丹参和三七合剂对炎症大鼠有镇痛作用，且在灌胃后5 min时效果最佳。见表2。

表2 炎症模型大鼠HWL比较

3 讨 论

本研究结果表明，三七与丹参合剂对大鼠具有一定的消炎镇痛效果，并且5～30 min的效果较佳，45 min时药效基本消除。

阿片类药物是如今临床用于镇痛的核心药物。数据显示，90%以上的患者在使用阿片类药物的过程中均会出现便秘，便秘也会随着药剂量增加而严重，并且低剂量阿片药品会引起呼吸频率的下降，在增加剂量后潮气会减少，一次给予较大剂量的阿片药物时可出现呼吸暂停、恶心、呕吐、腹胀、多汗、眩晕、忧虑、抑郁、皮肤瘙痒、口干等症状〔14～16〕。有研究表明，三七总皂苷与电针效应相似，具有明显镇痛、抗炎及免疫调节作用，并且三七总皂苷可能是阿片样肽受体的激动剂而不具有成瘾的副作用〔12〕。在临床上，经常用阿司匹林、布洛芬等作为止疼药物，但副作用较大，三七一直作为金疮药的主要成分，有止血、散淤、止痛的功能，安全性好〔13〕。

丹参可以抑制体内中枢神经，降低神经反应能力，起到镇痛的作用。实验证明给大鼠注射丹参溶液后，在大鼠受刺激后的丘脑后核放电明显减少，这说明丹参对中枢有抑制作用〔17，18〕。以往研究发现当归、川木通、蒲黄、北五味子等草本植物均可参与大鼠的痛觉调节作用〔19～22〕。本实验采用灌胃及行为药理学等方法，观察与记录不同浓度的丹参与三七合剂对雄性正常及炎症大鼠痛觉变化的影响，探究与对比中草药合剂与单一中草药镇痛的效果，也为临床中药在镇痛方面的研究与开发提供了新的思路，同时为现代医学用中草药代替阿片类药品镇痛提供实验基础与理论依据。