血清Sema 5A、RVE1水平与桥本甲状腺炎患者Th17相关因子、甲状腺功能及相关抗体的相关性研究

向慧敏，郑春梅，李 筱，王思繁，饶琴琴

陕西省汉中市中心医院精准医学诊断中心，陕西汉中 723000

桥本甲状腺炎(HT)是获得性甲状腺功能减退(简称甲减)的最常见原因，典型表现为甲状腺肿大和甲减相关症状，少数患者会出现呼吸困难、吞咽困难、声带麻痹或面部水肿等[1]。HT的特征是特异性自身抗体抗甲状腺球蛋白抗体(TgAb)和甲状腺过氧化物酶抗体(TPOAb)水平升高，甲状腺激素产生减少和弥漫性甲状腺肿，部分患者伴甲状腺激素产生减少[2]。HT被认为是一种自身免疫性疾病，HT患者甲状腺组织中可观察到大量淋巴细胞，而淋巴细胞浸润引起的组织纤维化是导致甲状腺弥漫性肿大的主要原因[3]。辅助性T细胞(Th)17是CD4+T细胞亚群，参与适应性免疫反应，与自身免疫性疾病发病密切相关[4]。自身免疫性甲状腺疾病患者甲状腺滤泡细胞中Th17标志性细胞因子白细胞介素(IL)-17水平明显升高[5]。血清神经轴突导向分子5A(Sema 5A)属于信号蛋白家族成员之一，具有免疫调节作用，在免疫细胞激活、增殖，促炎细胞因子的产生过程中起重要作用[6]。溶解素E1(RVE1)是一种内源性脂质介质，在微生物感染诱导的脓毒症炎症模型中可增加巨噬细胞吞噬活性，清除细菌，促进炎症消退[7]。RVE1还可抑制效应性T细胞分化，促使调节性T细胞增殖，在适应性免疫中发挥调节作用[8]。本研究拟探讨血清Sema 5A、RVE1水平与HT患者甲状腺功能、Th17相关因子以及TgAb、TPOAb的相关性，以期为病情评估和治疗提供参考。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2019年2月至2021年8月本院收治的109例HT患者(HT组)。其中男28例，女81例；年龄32～55岁，平均(45.02±7.82)岁；体质量指数21～25 kg/m2，平均(23.02±1.11)kg/m2；家族病史23例。纳入标准：(1)典型甲减症状和体征，颈部超声提示甲状腺弥漫性病变，TgAb、TPOAb水平升高；(2)首次经临床诊断为HT，符合《中国甲状腺疾病诊治指南：甲状腺炎》诊断标准[9]。排除标准：(1)急慢性感染；(2)类风湿关节炎、系统性红斑狼疮、多发性硬化症等其他自身免疫性疾病；(3)Graves病、单纯性甲状腺肿、甲状腺癌[10]。根据甲状腺功能将HT患者分为甲状腺功能正常组[促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)水平正常]39例、亚临床甲减组(TSH水平升高，FT3、FT4水平正常)47例，临床甲减组(TSH水平升高，FT3、FT4水平降低)23例。另选择58例体检健康者为对照组，均排除甲状腺疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、感染性疾病等。其中男13例，女45例；年龄30～52岁，平均(44.89±6.73)岁；体质量指数20～25 kg/m2，平均(22.97±1.23)kg/m2。HT组和对照组一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究获得本院伦理委员会批准，所有研究对象均知情同意并且签署同意书。

1.2方法 所有HT患者入组后24 h内采集静脉血完善实验室检查，对照组于体检当日清晨采血。血标本处理：采集血标本(3 mL)注入干燥试管，室温下静置30～60 min，待血液凝固后取上层液体离心(2 000 r/min，半径10 cm，时间5 min)获取血清后上机检测。取肝素抗凝试管中保存的标本(2 mL)，采用血细胞分离机(Ficoll密度离心法)分离外周血中单个核细胞(PBMC)，调节细胞密度在1×106/mL左右，5% CO2，37 ℃培养24 h，加入CD4、CD3、CD25单克隆抗体(购自美国BD公司)混匀后避光静置30 min。

采用Cobas E411电化学发光全自动免疫分析系统(瑞士罗氏公司)，运用电化学发光免疫法测定血清TSH、FT3、FT4、TPOAb和TgAb水平，试剂盒购自上海酶联生物科技有限公司。正常参考范围：TSH为0.27～4.20 IU/L，FT3为3.1～6.8 pmol/L，FT4为12～22 pmol/L，TPOAb为0～34 IU/mL，TgAb为0～115 IU/mL。采用Multiskan FC全自动酶标仪(美国赛默飞公司)运用酶联免疫吸附试验检测血清Sema 5A、RVE1、IL-17、IL-23水平，试剂盒购自美国赛默飞公司。采用EPICS-XL流式细胞仪检测Th17占比。

2 结 果

2.1HT组、对照组实验室指标比较 HT组血清Sema 5A、IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb水平，以及外周血Th17占比高于对照组(P<0.05)，血清RVE1、FT3、FT4水平低于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 HT组、对照组实验室指标比较

组别nTSH(IU/L)FT3(pmol/L)FT4(pmol/L)TgAb(IU/mL)TPOAb(IU/mL)HT组1094.64±1.034.24±1.0414.84±2.96293.26±35.26215.44±18.24对照组582.02±0.564.65±1.2516.02±3.2612.02±2.355.62±1.32t12.8202.3132.36760.58887.362P<0.0010.0220.019<0.001<0.001

2.2HT各亚组间实验室指标比较 临床甲减组血清Sema 5A、IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb水平，外周血Th17占比高于亚临床甲减组、甲状腺功能正常组(P<0.05)，血清RVE1、FT3、FT4水平低于亚临床甲减组、甲状腺功能正常组(P<0.05)。亚临床甲减组血清Sema 5A、IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb水平，外周血Th17占比高于甲状腺功能正常组(P<0.05)，血清RVE1水平低于甲状腺功能正常组(P<0.05)，FT3、FT4水平与甲状腺功能正常组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 HT各亚组间实验室指标比较

组别nTSH(IU/L)FT3(pmol/L)FT4(pmol/L)TgAb(IU/mL)TPOAb(IU/mL)甲状腺功能正常组393.51±0.304.82±0.7716.23±2.58270.62±12.77205.12±5.65亚临床甲减组474.93±0.49*4.75±0.6915.94±3.42302.49±18.02*218.39±16.05*临床甲减组235.94±0.20*#2.21±0.10*#10.25±0.28*#312.79±10.57*#226.91±5.73*#F319.90553.33641.23873.61229.176P<0.001<0.001<0.001<0.001<0.001

2.3HT患者血清Sema 5A、RVE1水平与其他实验室指标的相关性 HT患者血清Sema 5A水平与外周血Th17占比及IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb呈正相关(P<0.05)，RVE1水平与外周血Th17占比及IL-23、IL-17、TSH、TgAb、TPOAb呈负相关(P<0.05)，Sema 5A、RVE1水平与FT3、FT4无明显相关性(P>0.05)。见表3。

表3 HT患者血清Sema 5A、RVE1水平与其他实验室指标的相关性

续表3 HT患者血清Sema 5A、RVE1水平与其他实验室指标的相关性

3 讨 论

HT是引起自身免疫性甲状腺疾病和甲减的最常见原因，与环境、药物、妊娠、营养和传染病等多种因素有关，目前HT的治疗方式以甲状腺激素治疗为主，但接受甲状腺激素替代治疗后患者仍会出现相关临床症状，严重影响生活质量[11]。TgAb、TPOAb常见于自身免疫性甲状腺疾病患者血清中，TgAb、TPOAb的存在不仅影响甲状腺组织，导致甲状腺功能异常，还影响糖脂代谢，导致机体其他组织或器官损害[12]。Th17在HT发病中起着至关重要的作用，甲状腺内Th17浸润与甲减以及局部纤维化密切相关[13]。IL-17和IL-23是Th17关键的细胞因子，其中IL-17是Th17的效应细胞因子，而IL-23参与幼稚CD4+T细胞诱导Th17发育过程，还可扩大Th17群并维持其存活，IL-23/IL-17轴已被研究证实参与HT发病和进展过程[14]。

Sema 5A属于Semaphorins信号蛋白家族中第5类信号素，可通过促进内皮细胞增殖和抑制其凋亡，促进血管生成，还可促使上皮间充质转化，参与肿瘤细胞增殖、迁移过程[15]。Sema 5A还可调节神经元兴奋传导和突触形成，与强迫症的严重程度有关[16]。在自身免疫性疾病中Sema 5A也具有重要作用，现有报道显示类风湿关节炎患者血清Sema 5A水平明显升高，Sema 5A通过诱导巨噬细胞向破骨细胞分化，促使类风湿关节炎疾病活动度增加以及关节破坏[17]。原发性免疫性血小板减少症患者血浆Sema 5A水平升高，Sema 5A通过下调其受体plexin-B3表达促使Th1分化和疾病活动度增加[18]。本研究发现HT患者血清Sema 5A水平也出现异常，明显高于对照者，且临床甲减组血清Sema 5A水平高于亚临床甲减组、甲状腺功能正常组，Sema 5A水平与TgAb、TPOAb、TSH呈正相关，说明Sema 5A参与HT发病过程，Sema 5A水平越高，HT患者特异性自身抗体水平越高，甲状腺功能越差。Sema 5A参与HT发病的机制尚不清楚，本研究相关性分析结果显示，Sema 5A与IL-17、IL-23呈正相关，表明Sema 5A可能在HT免疫反应中起到重要作用，推测Sema 5A通过激活T细胞，促使Th17分化和细胞因子IL-17、IL-23产生，活化IL-17/IL-23轴，IL-23进一步诱导Th17增殖分化，扩大Th17群，加剧免疫反应和炎性反应，促使HT发病和进展[19]。

RVE1是促使炎症消退的内源性介质，炎症应激下二十碳五烯酸转化为18R-氢-二十碳五烯酸的过程中可产生特异性促炎症消退介质(SPM)，SPM被白细胞活化产生RVE1，RVE1通过降低中性粒细胞趋化性，抑制炎症部位淋巴细胞聚集，增强巨噬细胞吞噬功能等促使炎症消退[20]。RVE1与多种炎症性疾病有关，RVE1可减少炎症性骨吸收，抑制破骨细胞增殖，促使成骨细胞生成，参与骨重塑过程[21]。RVE1还可促使抗炎细胞因子IL-10产生，抑制促炎介质IL-6、干扰素-γ、IL-17等表达，控制单纯疱疹病毒引起的间质角膜炎病情[22]。在牙周炎小鼠模型中，早期给予RVE1可抑制牙龈组织中T细胞浸润，降低Th17细胞占比和牙龈组织中IL-6、IL-17 mRNA表达[8]。RVE1在HT发病机制的研究十分少见，其间关系尚不清楚，本研究发现HT患者血清RVE1水平明显低于对照者，且RVE1水平与TgAb、TPOAb、TSH呈负相关，提示RVE1缺失可能与HT自身抗体产生以及甲减有关。进一步分析显示，RVE1水平与IL-17、IL-23呈负相关，表明RVE1可能调控Th17分化以及相关细胞因子IL-17、IL-23表达，参与HT免疫反应过程。ONER等[23]报道，RVE1可通过抑制IL-6、转化生长因子-β阻止CD4+T细胞活化，减少IL-17的合成，抑制免疫反应，促使炎性反应消退。SAWADA等[24]的研究结果表明，RVE1可抑制树突状细胞和γδ T细胞分化，抑制IL-17和IL-23的合成，减少炎症细胞浸润。RVE1缺失可能导致Th17过度分化，使IL-17、IL-23生成增加，加剧免疫失调和炎性反应，导致HT发生。

综上所述，HT患者血清Sema 5A水平升高，RVE1水平降低。Sema 5A过度合成，RVE1缺乏与HT特异性自身抗体TgAb、TPOAb产生及甲减有关。Sema 5A、RVE1可能通过调控Th17分化以及IL-17、IL-23表达参与HT发病过程。