乙型肝炎病毒前基因组RNA评估恩替卡韦治疗乙型肝炎E抗原阳性慢性乙型肝炎疗效的价值

徐国球，李平生，吴细妹

（1.东莞广济医院呼吸内科；2.东莞广济医院检验科，广东 东莞 523690）

慢性乙型肝炎（chronic Hepatitis B，CHB）是由乙型肝炎病毒持续感染引起的慢性肝脏性炎症性疾病，是我国危害最严重的传染病之一，严重者会导致肝衰竭和肝细胞癌[1-2]。因此，CHB的有效治疗已成为临床研究的重点。CHB在临床主要采用抗病毒治疗，其中恩替卡韦（ETV）以抑制乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）的作用强、不良反应少等优势成为临床首选药，但对肝细胞核内的共价闭环状DNA均无明显作用，无法完全清除病毒，且近年来发现ETV治疗有阴转率低、治疗疗程长等问题[3-4]。因此，如何早期有效预测ETV的治疗效果成为临床重点研究。ALT水平升高是CHB抗病毒治疗的重要指证。然而,仅靠ALT水平并不能反映患者的肝纤维化程度。最新研究显示，以血清HBV前基因组RNA（pgRNA）阴转和低乙型肝炎E抗原（HBeAg）水平为“临床治愈”，以此作为抗病毒治疗的新阶段，对CHB患者用药安全及疗效等可能有重要意义[5]。本研究观察HBeAg阳性CHB患者ETV治疗期间的血清HBV pgRNA水平变化，探讨其在此类患者ETV治疗中疗效评估的价值。

1 资料与方法

1.1一般资料选取2019年1月至2021年6月东莞广济医院收治的确诊为HBeAg阳性的78例CHB患者为研究对象进行回顾性分析。根据患者ETV治疗12个月后是否获得完全应答分为获得组（35例）和未获得组（43例）。获得组患者中男性24例，女性11例；年龄30～47岁，平均年龄（38.42±8.23）岁；入组时谷丙转氨酶（ALT）99～129 U/L，平均ALT（115.36±12.65）U/L；入组时HBV pgRNA 5.52～9.21 log10 IU/mL，平均HBV pgRNA（7.34±1.35）log10 IU/mL。未获得组患者中男性28例，女性15例；年龄29～47岁，平均年龄（37.87±8.78）岁；入组时ALT 98～131 U/L，平均ALT（114.85±12.23）U/L；入组时HBV pgRNA 5.41～8.88 log10 IU/mL，平均HBV pgRNA（7.30±1.42）log10 IU/mL。两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。本研究经东莞广济医院医学伦理委员会批准。纳入标准：①符合《慢性乙型肝炎防治指南（2015年更新版）》[6]中HBeAg阳性CHB的诊断标准；②对本研究药物不过敏。排除标准：①患有自身免疫性疾病；②患有其他类型肝炎或肝癌；③患有病毒免疫缺陷感染疾病；④患有代谢性疾病；⑤患有严重心、肺、肾或神经系统疾病。

1.2治疗方法患者均采取口服恩替卡韦（齐鲁制药有限公司，国药准字H20203225，规格：0.5 mg/片），0.5 mg/次，1次/d，餐前或餐后2 h服用，持续治疗12个月。生化学应答：ALT水平将至40 U/L的正常水平；血清学应答：HBeAg阴转；完全应答：ALT水平恢复正常水平（≤40 U/L），且HBeAg阴转。

1.3观察指标①比较两组患者治疗过程中血清HBV pgRNA、ALT水平各时间点动态变化。分别于所有患者入组时及治疗3、6、12个月时抽取患者清晨空腹静脉血5 mL，离心（3 500 r/min 转速，时间10 min）后，取血清，采用全自动化学发光免疫分析仪（苏州长光华医生物医学工程有限公司，苏械注准20222220718，型号：AE-480）以化学发光免疫分析法检测血清HBV pgRNA水平[试剂盒购自艾康生物技术（杭州）有限公司]；采用全自动生化分析仪（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司，粤械注准20172400118，型号：BS-280）检测ALT水平。②通过Spearman系数分析血清HBV pgRNA、ALT水平与ETV治疗后各时间点间的相关性。

1.4统计学分析采用SPSS 19.0统计学软件进行数据处理。计量资料以()表示，组间比较采用独立样本t检验；不同时间点结果比较行重复测量的方差分析；相关性分析采用Spearman秩相关分析检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1两组患者治疗过程中血清HBV pgRNA水平比较两组患者入组时血清HBV pgRNA水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组患者治疗3、6、12个月的血清HBV pgRNA水平显著低于入组时，且获得组低于未获得组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组患者治疗过程中血清HBV pgRNA水平比较（log10 IU/mL，）

注：与同组入组时比较，*P＜0.05。HBV pgRNA：乙型肝炎病毒前基因组RNA。

组别 例数 入组时 3个月 6个月 12个月获得组 35 7.34±1.35 6.75±0.89* 6.41±0.23* 6.03±0.24*未获得组 43 7.30±1.42 6.94±0.98* 6.68±0.25* 6.34±0.26*F组间，P组间 5.213，＜0.05 F时间，P时间 44.382，＜0.05 F交互，P交互 3.474，＜0.05

2.2患者ETV治疗后各时间点血清HBV pgRNA水平与获得完全应答的相关性分析相关性分析显示，血清HBV pgRNA水平与获得完全应答呈显著负相关性（P＜0.05），见表2。

表2 两组患者ETV治疗后各时间点血清HBV pgRNA水平与获得完全应答的相关性分析

2.3两组患者治疗过程中ALT水平比较两组患者入组时ALT水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；两组患者治疗3、6、12个月的ALT水平显著低于入组时，且获得组低于未获得组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 两组患者治疗过程中ALT水平比较（U/L，）

表3 两组患者治疗过程中ALT水平比较（U/L，）

注：与同组入组时比较，*P＜0.05。ALT：谷丙转氨酶。

组别 例数 入组时 3个月 6个月 12个月获得组 35 115.36±12.65 73.25±7.36* 47.55±5.65* 32.47±5.69*未获得组 43 114.85±12.23 79.51±7.45* 51.25±6.08* 48.97±6.73*F组间，P组间 45.852，＜0.05 F时间，P时间 12.193，＜0.05 F交互，P交互 14.261，＜0.05

2.4患者ETV治疗后各时间点ALT水平与获得完全应答的相关性分析通过相关性分析显示，ALT水平与获得完全应答呈显著负相关性（P＜0.05），见表4。

表4 两组患者ETV治疗后各时间点ALT水平与获得完全应答的相关性分析

3 讨论

CHB是导致肝衰竭、肝癌的主要危险因素，每年有60万～90万人死于HBV感染的相关性疾病，抗HBV治疗药物主要包括干扰素及核苷酸类药物[7-8]。近年临床研究发现，CHB治疗过程中，部分患者追求快速治愈，即停止治疗后获得病毒学应答、HBsAg消失、ALT恢复正常水平及肝脏组织病变改善，但核苷酸类药物治疗周期长，停药易复发，且长期服用患者依从性较差，易存在耐药风险[9]。干扰素治疗可提高HBeAg血清转换，患者HBeAg水平越低，停药后复发率越低[10]。本研究使用ETV对HBeAg阳性CHB患者进行治疗，并用HBV pgRNA评估其疗效。

CHB患者血清中存在HBV RNA为3.5 kb的pgRNA，这些pgRNA存在于形态结构类似与病毒样颗粒中，并利用cccDNA作为模板在病毒核衣壳内转录，最后释放完整的子代病毒[11]。由于pgRNA产生过程中不受核苷酸类抗病毒药物影响，可直接反映患者肝细胞内cccDNA的转率活性。因此，相比于HBsAg、HBV DNA及ATL等传统的血清学指标，血清HBV RNA水平可以更好地反映肝内病毒复制水平，并可作为一个潜在的核苷酸安全用药及停药指标[12-13]。HBeAg阳性CHB患者在接受ETV治疗后会逐步实现HBV pgRNA阴转、HBeAg血清学转阴等目标。本研究通过观察HBeAg阳性的CHB患者获得应答及未获得应答不同时期的HBV pgRNA表达水平，发现未获得组CHB患者血清中均能检测出较高的HBV pgRNA水平，获得组的患者血清HBV pgRNA水平明显低于未获得组，这表明血清HBV pgRNA水平可有效体现HBeAg阳性的CHB患者是否转阴。通过本研究还可发现，除了血清HBV pgRNA水平，ALT水平也是抗病毒治疗效果的影响因素。

本研究通过相关性分析发现，血清HBV pgRNA、ALT水平与获得完全免疫呈负相关，说明血清HBV pgRNA、ALT水平是作为HBeAg是否转阴的决定性因素之一。但获得组HBeAg阳性CHB患者前期与HBV pgRNA相关性比12个月时相关性强，这种良好的血清学相关性有助于早期判断HBeAg阳性CHB患者体内病毒复制水平；随着治疗时间的延长，HBV pgRNA与HBeAg的相关性水平下降，从侧面反映了治疗后的HBeAg水平不能完全准确地反映肝内cccDNA的转录活性[14]。近年研究发现，经核苷酸治疗的CHB患者血清HBV pgRNA下降水平与肝内cccDNA呈正相关，且还可反映肝内cccDNA转录活性，说明停药时血清HBV pgRNA水平也可预测患者是否出现病毒学反弹的风险[15-16]。

综上所述，血清HBV pgRNA、ALT水平与HBeAg阳性CHB患者ETV的疗效具有相关性，可用于评估疗效。但考虑本研究纳入样本较少，相关结论需进一步扩大论证。