结核分枝杆菌复合群核酸检测联合痰涂片找抗酸杆菌检测对诊断肺结核的临床应用价值

陈桂茹，周欣滢，黄广荣

广东省阳江市阳春市人民医院 检验科，广东 阳江 529600

0 引言

肺结核属于传染性疾病，具有传染性强、发病率高的特点[1-2]，WHO显示，全球每年增长800万肺结核患者[3-4]，其中我国占16%，因此，不断完善肺结核的诊断、治疗、预防等具有重要意义。

1 资料和方法

1.1 一般资料

对2020年1月-2021年1月前来本院检查的260例患者进行回顾性分析，临床诊断表明，活动性肺结核的病例（TB病例）200例及非肺结核其他肺部疾病病例（non-TB病例）60例。260例患者中，男151例，女109例，最大年龄68岁，最小年龄39岁，中位年龄（49.52±2.07）岁。

纳入标准：①初诊为肺结核可疑症状者；②确诊TB病例；③确诊为non-TB病例；④可提供2～3份合格痰标本。

排除标准：①患者不同意此项研究；② 痰标本剂量少于2mL、唾液痰；③近一个月内抗结核治疗在2周以上。

每个病例收集即夜晨3份痰标本。

1.2 试剂、仪器与方法

应用二级生物安全柜，培养箱，恒温扩增荧光检测仪。改良罗氏培养基，结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒，所有仪器和试剂均来自广州迪澳生物科技有限公司。

恒温扩增技术检测：将3倍体积浓度为4%的NaOH溶液与痰标本溶液混合，震荡15s，常温条件下液化15min，液化时间与液化的实际情况有关，将攻浓度为14%的氢氧化钠溶液加入其中，剂量为0.5～1mL，随后将1mL的液化后样品倒入螺旋盖离心管中，离心5min，12000rpm，弃上清。将其与生理盐水混合，剂量为1mL，再次离心5min，12000rpm，弃上清。加入DNA提取液混合，DNA提取液100μL即可。将其放置在恒温金属浴中，100℃条件下储存10min，离心2min，同样以12000rpm为标准，收集上清液，-20℃保存备用。将备用DNA加入到检测液中，混合DNA剂量为2.0μL，将其置入恒温荧光检测仪中扩增，63℃条件下45min的恒温扩增反应，结果判读以仪器给出的曲线和时间为标准，阳性：曲线为S型，40min以下出峰时间,阴性：扩增曲线呈一条直线或倾斜的直线，出峰时间为0；扩增曲线呈S形，在40min以上，需要重新检测，出峰时间在45min以下则为弱阳性。

痰涂片参考《痰涂片镜检标准化操作及质量保证手册》，痰培养操作流程参照《分枝杆菌分离培养标准化操作程序及质量保证手册》中的方法。

1.3 评价指标及判定标准

以临床诊断结果为金标准，所有患者进行痰涂片、痰培养、恒温扩增技术、痰涂片与恒温扩增技术联用及痰涂片和痰培养联用的5种方法，分别计算出5种检测方法的准确性，得出阳性检出率。

阳性检出率=阳性例数／临床诊断肺结核病例数。

1.4 统计学处理

对所有患者的临床数据应用统计学软件SPSS 17.0进行分析，计数资料采取卡方检验，用率[n(%)]表示，若P＜0.05，则证明统计学意义存在。

2 结果

痰涂片阳性检出率57.5%，痰培养阳性检出率48.00%，恒温扩增技术阳性检出率72.00%，痰涂片与痰培养的阳性检出率59.50%，恒温扩增技术联用痰涂片的阳性检出率79.00%；恒温扩增技术阳性检出率高于痰涂片和痰培养，有统计学意义（P＜0.05），痰涂片与恒温扩增技术联用阳性检出率高于痰涂片、痰培养、恒温扩增技术、痰涂片联合痰培养，有统计学意义（P＜0.05）。详见表1。

表1 不同检测方法检测结果分析

3 讨论

肺结核是一种常见的传染性呼吸系统疾病，临床主要表现为咳嗽和咯血等，早期症状并不明显，诊断的难度比较大[5-6]，随着病情的发展，肺结核病症一旦发病，患者的免疫机制往往会出现一定程度的功能障碍[7-8]，会造成患者呼吸道感染或是衰竭等，为此临床上应该不断完善肺结核的诊断、治疗和预防[9-10]，以此保证患者生命财产安全。目前临床研究方法较多，总结如下：其中痰涂片找抗酸杆菌检查是肺结核的确诊、治疗的主要依据，但是检查阳性率在30%～60%之间，其余均呈现阴性。痰涂片法操作简便、快速，价格低廉[11-12]。而结核分枝杆菌复合群核酸检测方法属于恒温扩增检测技术[13-14]，易被污染造成假阳性。因此，使用该方法要严格按照操作流程，避免交叉污染[15]。

本次研究结果显示：痰涂片阳性检出率57.5%，痰培养阳性检出率48.00%，恒温扩增技术阳性检出率72.00%，痰涂片与痰培养的阳性检出率59.50%，恒温扩增技术联用痰涂片的阳性检出率79.00%；恒温扩增技术阳性检出率高于痰涂片和痰培养，痰涂片与恒温扩增技术联用阳性检出率高于痰涂片、痰培养、恒温扩增技术、痰涂片联合痰培养，这与宋红焕等[16]的研究基本相似，其收集确诊的活动性肺结核患者259例及其他呼吸道疾病患者68例痰标本，并同时采用痰涂片、痰培养、恒温扩增技术以及痰涂片与痰培养联用、痰涂片与恒温扩增技术联用进行结核分枝杆菌检测，以临床诊断为金标准，对3种检测方法及2种方法联用的检测效果进行评估。结果痰涂片、痰培养、恒温扩增技术及检测方法联用的阳性检出率分别为57.1%,74.5%,67.6%，痰涂片与痰培养、恒温扩增技术联用的阳性检出率分别为60.6%、76.1%。恒温扩增技术阳性检出率高于痰涂片和痰培养，痰涂片与恒温扩增技术联用阳性检出率高于痰涂片、痰培养、恒温扩增技术、痰涂片联合痰培养，以上差异均有统计学意义（P＜0.05）。

综上所述，为提高结核病实验室检测水平和工作效率，临床中应该应用敏感性、特异性高的检测方法，痰涂片与恒温扩增技术联用检测值得临床应用。