SYN、Tβ4与非小细胞肺癌临床特征及预后的关系

伍永升，宋利明，王正煜，范志刚

非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer， NSCLC)是原发于支气管黏膜、腺体及肺泡上皮的一种恶性肿瘤，具有发病率高、病死率高的特点[1]。目前，临床主要依据患者TNM分期采用合适的诊疗计划进行治疗，但NSCLC作为一种高度异质性疾病，在疗效及预后等方面仍存在明显的个体差异，仅通过TNM分期作为方案制定的依据难以满足治疗需求。奚剑敏等[2]在NSCLC的研究中提出，突触素(SYN)的检测有利于预测NSCLC患者的预后，可作为病情进展评估的重要标志，但仍有部分学者持有不同意见。SYN属于钙结合糖蛋白，分布于神经元突触前囊泡膜，参与钙调节及囊泡运输的过程。而胸腺素β4(Tβ4)对细胞运动、增殖分化有一定影响，属于肌动蛋白的鳌合型分子。马艺欣等[3]认为，Tβ4高表达与NSCLC预后不良相关，可能参与上皮细胞转化成间质表型细胞的生物学过程。因此，本研究通过分析SYN、Tβ4在不同组织中的表达情况及作用机制，旨在探索SYN、Tβ4与NSCLC临床特征及预后的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2020年2月—2021年2月收治的NSCLC 98例。纳入标准：经病理学检查确诊；临床资料完整；均未接受放化疗。排除标准：肝肾功能异常者；合并其他血液、肿瘤疾病；存在自身免疫性疾病。98例中男53例，女45例；年龄40～78(61.42±18.56)岁；疾病类型：腺癌66例，鳞癌32例；分化程度：低分化28例，中分化32例，高分化38例；肿瘤分期：Ⅰ期28例，Ⅱ期34例，Ⅲ期36例；淋巴结转移情况：转移39例，无转移59例。

1.2方法 所有患者在CT下经皮穿刺活检取材，在肿瘤组织及癌旁组织(距肿瘤组织5 cm)处取材。SYN、Tβ4抗体均购自Abcam公司，通用型SP试剂盒、DAB显色管及抗原修复液等材料均购自北京中杉金桥生物有限公司。采用免疫组化法检测SYN、Tβ4表达情况，具体步骤：将手术获取的组织进行包埋处理，切取厚度为4 μm的石蜡切片，经基础脱蜡、水化后，加0.3% H2O2内源性过氧化氢酶15 min。经过抗原热修复后，将SYN、Tβ4抗体放入37 ℃环境中孵育120 min，封闭剂温育30 min，随后滴加二抗温育30 min，将DAB作为显色剂，用苏木素染色，随后进行常规脱水、封片处理。结果评定：选10个高倍视野(×400)进行观察。SYN、Tβ4显示淡黄至深棕色则为阳性，最终评分为染色强度×阳性细胞百分比。阳性细胞比例评分为0分：≤10%，1分：11%～25%，2分：26%～50%，3分：51%～75%，4分：≥75%。染色强度：0分：无色，1分：淡黄色，2分：棕色，3分：深棕色。最终评分：0～4分表示阴性，5～12分表示阳性。

1.3观察指标 ①对比不同组织中SYN、Tβ4的表达情况。②分析SYN、Tβ4表达与临床特征的关系。③通过电话、复查等方式随访1年，根据预后情况分为预后良好组(1年内无复发、转移、死亡)和预后不良组(1年内死亡、病情进展)，分析患者预后不良的影响因素。

2 结果

2.1SYN、Tβ4表达情况 NSCLC组织中SYN阳性表达率低于癌旁组织，Tβ4阳性表达率高于癌旁组织(P<0.01)。见表1。

2.2SYN、Tβ4表达与临床特征的关系 NSCLC组织中SYN、Tβ4表达与年龄、性别、病理类型、肿瘤大小、吸烟史、分化程度无关(P>0.05)，与淋巴结转移及TNM分期有关(P<0.05)。见表2。

2.3影响NSCLC患者预后不良的单因素分析 98例中在1年内无复发、转移、死亡60例，为预后良好组；1年内死亡、病情进展38例，为预后不良组。经单因素分析，2组年龄、肿瘤大小、分化程度、病理类型比较差异无统计学意义(P>0.05)。2组TNM分期、淋巴结转移及SYN、Tβ4表达情况比较差异有统计学意义(P<0.05，P<0.01)。见表3。

表3 影响NSCLC患者预后的单因素分析[例(%)]

表1 NSCLC患者不同组织中SYN、Tβ4表达情况[例(%)]

表2 NSCLC患者SYN、Tβ4表达与临床特征的关系[例(%)]

2.4影响NSCLC患者预后的多因素Logistic回归分析 将单因素分析差异有统计学意义的指标纳入多因素Logistic回归分析，以预后情况为因变量(预后良好=0，预后不良=1)，自变量赋值：TNM分期：Ⅰ～Ⅱ期=0，Ⅲ期=1；淋巴结转移：否=0，是=1；SYN：阳性=0，阴性=1；Tβ4：阴性=0，阳性=1。结果显示，TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移及SYN阴性表达、Tβ4阳性表达是NSCLC患者预后不良的独立危险因素(P<0.05，P<0.01)。见表4。

3 讨论

NSCLC是临床常见的肺癌类型，约占肺癌的80%[4-5]。彭博和张临友[6]报道，多数NSCLC患者预后较差且容易出现复发等情况。随着研究的深入，探索影响NSCLC预后的分子机制，逐渐发展为临床研究的热点。

大量研究证实，Tβ4在膀胱癌、结肠癌及甲状腺髓样癌等多种疾病中均出现异常表达的情况，其阳性表达率的上升与肿瘤发生、转移息息相关[7]。卢晴晴等[8]研究发现，SYN在辅助诊断小细胞肺癌时的敏感度较高，其高表达与患者低生存率存在一定联系。而在NSCLC中关于SYN的相关研究较少。本研究结果显示，NSCLC组织中Tβ4阳性表达率高于癌旁组织，SYN阳性表达率低于癌旁组织，与眭玉霞等[9]研究结果基本一致。推测原因在于Tβ4可能通过诱导原肌球蛋白、β-肌动蛋白的表达，间接参与网络重组过程，其诱导的肿瘤细胞形态学变化与细胞-基质转化极为相似，从而促进细胞运动与存活，当Tβ4表达上调时，能明显促进肿瘤细胞的转移能力[10]。

表4 影响NSCLC患者预后的多因素Logistic回归分析

在肿瘤细胞进一步发生上皮-间质的转化过程中，SYN可能发挥明显的抑制作用。在此过程中相关胶原蛋白、蛋白聚糖等黏性物质被有效降解，促使细胞外基质成分发生改变，显著降低细胞黏附性，而SYN表达下调时，转化抑制作用受限，造成肿瘤细胞迁移[11]。GÜBELI等[12]在对体外进化肽结合单体肌动蛋白的研究中发现，Tβ4与肌动蛋白同为转谷氨酰胺酶的内源性底物，在该酶的凋亡程序中具有重要意义。而转谷氨酰胺酶可通过促进蛋白质间发生共价交联，使相关蛋白在结构和功能上发生一定改变，能有效调节肿瘤的发生。刘爱凤等[13]研究发现，SYN在肺淋巴上皮瘤样癌组织中阴性表达。而本研究发现，NSCLC组织中SYN、Tβ4的表达与淋巴结转移及TNM分期有关。提示，SYN阴性表达、Tβ4阳性表达与肿瘤细胞发生淋巴结转移、促进病情发展有关。分析原因在于，Tβ4能明显加速间充质干细胞的增殖速度，利用其自身的更新和多向分化能力，对肿瘤细胞发生表型转移具有重要意义，其作用机制可能与白细胞介素-8的依赖性有关[14]。而ZHONG等[15]提出SYN基因在肾上腺皮质瘤中的甲基化程度有所提升。其主要通过化学修饰的方式将蛋白质、核酸等基因组形成甲基化产物，对相关基因表达的调控有一定的作用。在NSCLC组织中SYN甲基化程度升高，导致其阳性表达率下降。此外，本研究多因素Logistic回归分析显示，TNM分期、淋巴结转移及SYN、Tβ4表达情况为NSCLC患者预后不良的独立危险因素。证实了SYN、Tβ4表达情况可作为NSCLC患者预后评估的有效依据。在以往体外实验中发现，Tβ4表达下调对抑制肿瘤细胞增殖、侵袭有着重要作用[16]。因此，当Tβ4表达上调、SYN表达下调时，NSCLC患者预后通常不能达到理想状态，但具体机制仍需进一步研究。

综上所述，NSCLC组织中SYN、Tβ4表达与淋巴结转移及TNM分期有关，SYN阴性表达、Tβ4阳性表达是预后不良的独立危险因素。