莲子心配方颗粒工艺及其质量标准研究

★ 丘花花 李海兵 杨金火（.鹰潭一八四医院 江西 鹰潭 335000；.江西康恩贝天施康药业有限公司 江西 鹰潭 335000）

莲子心来源于睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的成熟种子中的干燥幼叶及胚根，功效清心安神、交通心肾、涩精止血。用于热入心包，神昏谵语，失眠遗精，心肾不交，血热吐血［1］。主要含有生物碱类［2-3］、黄酮、甾醇、挥发油等成分［4］。其原植物莲为多年生水生草本，广布于我国南北各地［5］，研究采用药材来源于莲子心主产区江西广昌，以保证产品疗效。

中药配方颗粒是由中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，在中医药理论指导下，经临床处方调配、使用。中药配方颗粒在保留传统汤剂辨证论治、随证加减的基础上，同时具有制备、携带、服用、储存等多方面的优势［6］。现代临床及药理研究显示，中药配方颗粒在成分保留、药理药效、临床疗效等方面优于传统汤剂或基本相当［7-9］。本文对莲子心配方颗粒制备工艺及其质量标准的研究，为企业进入配方颗粒市场提供技术参考。

1 仪器和试药

Agilent 1200 高效液相色谱仪（美国Agilent 科技）、Dikma-C18（250 mm×4.6 mm）色谱柱（北京迪马科技有限公司）、AB265-S 分析天平（METTLER TOLEDO）、DZF-6050 型减压干燥箱(太仓精宏)、KQ3200DE 型数控超声仪（昆山市超声仪器）、莲心碱高氯酸盐对照品（批号：111696-201502，中检院）、莲子心对照药材（批号：121423-200702，中检院）、莲子心饮片（批号：YZ-150901，安徽纪淞堂中药饮片有限公司，经江西省药检院袁桂平老师鉴定）、乙腈（TEDIA Company）。

2 方法与结果

2.1 莲子心配方颗粒制备工艺考察

2.1.1 提取工艺考察 采用水煎煮法提取莲子心饮片，设定考察指标：莲心碱转移率。考察加水量（A）、煎煮时间（B）、煎煮次数（C）3 个因素。见表1。取莲子心饮片18 份，每份约50 g，按L9（34）正交表的方案试验，计算莲心碱转移和方差分析。见表2、表3。

表1 正交试验因素水平表

表2 莲子心提取正交试验结果（n=2）

表3 莲子心莲心碱转移率方差分析

因素B、C 对莲心碱转移率有显著性影响，结合实际大生产，确定提取工艺为A1B3C2，即水煎煮2 次，每次1.5 h，加水量为8 倍量饮片。

2.1.2 提取工艺验证 取莲子心饮片3 份，每份约50 g，按照选定的工艺进行验证，测得3 份样品莲心碱转移率分别为31.0%、31.4%、32.6%，均值31.67%，RSD为2.63%，说明提取工艺重现性较好。

2.1.3 浓缩、干燥工艺考察 试验对浓缩温度进行了考察，结果显示，60 ℃和80 ℃浓缩对莲心碱含量没有影响，折算为药材里的含量分别为0.91 mg/g和0.90 mg/g，由于80 ℃浓缩效率更高，故选择80 ℃，真空度-0.06 MPa 至-0.08 MPa 条件下浓缩。干燥选择80 ℃，-0.1 MPa 条件下带式干燥。

2.1.4 制粒工艺考察 莲子心配方颗粒成型工艺采用一步干法制粒，以干法制粒一次性成型率、颗粒流动性（豪斯纳比）、吸湿性（65%相对湿度和93%相对湿度）、溶化性为考察指标，对影响莲子心配方颗粒干法制粒的辅料、干膏粉比例、干法制粒参数进行考察。

2.1.4.1 辅料的选择 比较可溶性淀粉、糊精对莲子心干法制粒的影响，取莲子心干膏粉、糊精、可溶性淀粉分别按照1∶1∶1 的比例，设置参数：压力8 kg/cm2，挤压速度10 r/min，送料速度10 r/min。

两种辅料制粒的一次成型率、吸湿率、颗粒流动无明显差别，考虑到成本问题，生产选用糊精作为莲子心配方颗粒干法制粒的辅料。见表4。

表4 辅料选择结果

2.1.4.2 糊精干膏粉比例选择 分别按不同辅料比加入干膏粉，设置制粒参数为：压力8 kg/cm2，挤压速度10 r/min，送料速度10 r/min。

可知，随着糊精比例降低，成型率升高，同时流动性更差和吸湿性更强，故根据实际情况选择30%～50%的辅料，更有利于产品分装和保存。见表5。

表5 辅料比例选择结果

2.1.4.3 制粒参数的选择 按照辅料30%的比例，考察挤压压力、挤压速度、送料速度对制粒的影响。试验1 压力不够出现裂片，试验4 压力太大片子开始变黑，试验2、3、5 制粒参数较合适，压片能成型又无明显变色。随着挤压速度和送料速度增加，一次性成型率提高，颗粒吸湿性变化不明显，暂定干法制粒参数：压力6～10 kg/cm2，送料速度8～10 r/min，挤压速度8～10 r/min。见表6。

表6 干法制粒工艺考察结果

2.2 莲子心配方颗粒质量标准研究

2.2.1 薄层色谱鉴别 取本品2 g，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL溶解，作为供试品溶液。取莲子心对照药材2 g，加水30 mL 回流提取1 h，滤过，滤液蒸干，自“加甲醇30 mL”起，同法制成对照药材溶液。另取莲心碱高氯酸盐对照品，用甲醇制成浓度1 mg/mL 溶液，作为对照品溶液。取糊精0.2 g，同法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（通则0502）试验，分别吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-二乙胺（5∶4∶1），展开，取出晾干，喷稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照药材色谱及对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图1。

图1 莲子心配方颗粒的TLC图

2.2.2 检查 按《中国药典》2020年版四部通则0104 颗粒剂项下的有关规定，对本品3 批样品的粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度等进行检查。测得3 批样品粒度分别为：7.3%、6.6%、6.4%，水分分别为4.1%、3.7%、4.4%，3 批颗粒粒度、水分、溶化性、装量差异、微生物限度均符合规定。

2.2.3 含量测定

2.2.3.1 含量测定方法 （1）色谱条件：色谱柱为Dikma- C18（250 mm×4.6 mm）；流动相为乙腈-0.015 mol/L 十二烷基磺酸钠溶液-冰醋酸（56∶43∶1）；检测波长282 nm。

（2）对照品溶液的制备：取莲心碱高氯酸盐对照品，加甲醇制成每1 mL 含25 μg 的溶液，即得。

（3）供试品溶液的制备：取本品约1.0 g，精密称定，精密加入2%盐酸甲醇溶液25 mL，称定重量，回流30 min，放冷，再称定重量，用2%盐酸甲醇溶液补足重量，摇匀，滤过，精密量取滤液5 mL，置10 mL 量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，即得。

（4）阴性对照溶液的制备：取糊精0.2 g，同法制备成阴性对照溶液，即得。

（5）测定法：分别精密吸取上述溶液各10 μL，检测、分析。

2.2.3.2 专属性试验 按照选定的方法分别制备供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液，按照以上色谱条件，分别进样，结果显示，目标成分分离度良好，阴性无干扰。见图2。

图2 莲子心配方颗粒HPLC图谱

2.2.3.3 线性与范围 精密称取莲心碱高氯酸盐对照品，用甲醇配制成浓度为0.033 76 mg/mL 的对照品溶液。吸取上述对照品溶液，照选定的色谱方法，分别进样2.5，5，10，20，30 μL，进行RP-HPLC 分析，测得峰面积分别为63.4、126.6、239.0、478.3、721.7，以莲心碱高氯酸盐峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，绘制标准曲线：Y=706.7X+3.645，r=0.999 0。表明莲心碱高氯酸盐在0.084 4 μg～1.012 8 μg 范围内线性关系良好。

2.2.3.4 仪器精密度试验 取莲子心配方颗粒，依据选定的方法制备供试品溶液，连续检测分析6 次，测得莲心碱高氯酸盐峰面积分别为146.0、145.9、145.9、145.8、145.5、145.9，RSD为0.12%（n=6）。说明仪器精密度良好。

2.2.3.5 重复性试验 取莲子心配方颗粒，依据选定的方法制备6 份供试品溶液，检测分析，测定6 份样品含量分别为0.78、0.78、0.76、0.77、0.78、0.77 mg/g，平均含量为0.77 mg/g，RSD为0.82%（n=6）。

2.2.3.6 回收率试验 取已知莲心碱含量的莲子心配方颗粒，共6 份，精密称定，分别按表7加入对照品，自“精密加入2%盐酸甲醇溶液25 mL”起同供试品制备方法制备样品，按选定的色谱方法进行操作与分析，测定莲心碱的含量，计算6 份样品中莲心碱的加样回收率均值为98.46%，RSD=1.42%，说明该方法准确性好。见表7。

表7 加样回收率试验

2.2.3.7 成品含量测定 取莲子心配方颗粒，依据选定的方法制备供试品溶液，并以选定的色谱条件检测，测得三批莲子心配方颗粒莲心碱含量分别为0.77、0.79、0.76 mg/g。

3 讨论

生物碱为莲子心的主要药效成分，现代药理学研究发现莲子心中莲心碱具有较好的抗炎［10］、降压［11］、抗心律失常［12］、抗氧化［13］、抗肿瘤［14］以及抑制血小板聚集［15］等作用，试验以莲心碱为莲子心配方颗粒的指标成分优化了其制备工艺，优化后的工艺稳定可行。同时建立了成品的质量控制方法，其中莲心碱含量测定方法经验证，专属性、精密度、准确度、线性与范围均符合相关要求。成品三批数据稳定，鉴于产品批次较少，暂定本品含莲心碱不得少于0.50 mg/g。

综上，优化后的莲子心配方颗粒制备工艺稳定，质量控制方法可操作性强，可为配方颗粒企业生产和检验提供参考。