蒲桃壳化学成分的研究

曾 慧，周慧娴，谢媛媛，向丽敏*，王淑美*

(1.广东药科大学，广东 广州 510006；2.国家中医药管理局中药数字化质量评价技术重点研究室，广东 广州 510006；3.广东中药质量工程技术研究中心，广东 广州 510006)

蒲桃壳为桃金娘科蒲桃属植物蒲桃Syzygiumjambos(L.)Alston的干燥果皮，又名水石榴、风鼓等，广泛分布于我国南方各省[1]。收载于《本草纲目拾遗》，始载于《罗浮志》[2]，其根、茎、叶、果实和种子均可入药[3]。蒲桃壳具有暖胃健脾、温肺止咳、破血消肿之功效，主治胃寒呃逆、脾虚泄泻、久痢、肺虚寒嗽、疽瘤等症[4]。但是目前对于蒲桃壳化学成分的研究较少。

为了进一步明确蒲桃壳的主要活性成分，为蒲桃壳资源的综合利用和开发提供参考，本实验在前期研究的基础上，继续对蒲桃壳的化学成分进行研究，从蒲桃壳乙酸乙酯部位分离得到10个化合物，其中化合物1～6、10为首次从蒲桃属中分离得到，化合物7～9为首次从该植物中分离得到。

1 材料

Avance Ⅲ 500 MHz核磁共振波谱仪(德国Bruker公司)；UHPLC-Q-Orbitrap HRMS液相色谱-质谱联用系统(美国Thermo Fisher Scientific公司)；LC 3050N型HPLC仪(北京创新通恒色谱技术有限公司)；YMC-Pack ODS-A半制备型色谱柱(250 mm×20 mm，5 μm，日本YMC公司)；YMC-Pack ODS-A半制备型色谱柱(250 mm×10 mm，5 μm，日本YMC公司)。薄层层析硅胶GF254、柱层析硅胶(100～200目、200～300目，青岛海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝胶柱(瑞士GE公司)。所用试剂均为分析纯或色谱纯(天津市致远化学试剂有限公司)。

蒲桃果实2019年6月采自广东省广州市广州大学城广东药科大学校园，经广东药科大学中药学院向丽敏博士鉴定为蒲桃Syzygiumjambos(L.)Alston的果实。将上述蒲桃果实去核，烘干得蒲桃壳药材。药材标本(编号201906)保存于广东药科大学中药学院。

2 提取与分离

将15 kg干燥蒲桃壳粉碎，加入70%乙醇60 L回流提取4次，每次2 h，减压回收乙醇得到浸膏，加入适量水溶解，依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，55 ℃减压回收各溶剂，分别得到石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取部位。

取乙酸乙酯萃取部位149.1 g，经硅胶柱层析分离，以二氯甲烷-甲醇(100∶ 0～1∶ 1)梯度洗脱，薄层检识合并得18个组分Fr.1～Fr.18。Fr.8经硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯(50∶ 1～1∶ 1)梯度洗脱，得15个组分；Fr.8-13经Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脱，得9个组分；Fr.8-13-5经ODS柱，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脱，得9个组分；Fr.8-13-5-6经半制备HPLC反复纯化，得化合物7(40.0 mg)。Fr.10经硅胶柱，以石油醚-乙酸乙酯(5∶ 1～1∶ 2)梯度洗脱，得12个组分；Fr.10-7经ODS柱，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脱，得26个组分；其中组分Fr.10-7-4析晶得化合物4(12.5 mg)。Fr.10-7-2经Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脱，得5个组分，其中组分Fr.10-7-2-2析晶得化合物9(8.4 mg)；Fr.10-7-2-1经半制备HPLC反复纯化，得化合物10(81.4 mg)。Fr-10-7-14经Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脱，得4个组分；Fr-10-7-14-2经半制备HPLC反复纯化，得化合物5(98.3 mg)。Fr.12经硅胶柱，以二氯甲烷-甲醇(50∶ 1～0∶ 100)梯度洗脱，得14个组分；Fr.12-5经Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇(2∶ 1)洗脱得化合物8(58.6 mg)。Fr.13经硅胶柱，以二氯甲烷-甲醇(100∶ 0～2∶ 1)梯度洗脱，得13个组分；Fr.13-9经Sephadex LH-20柱，以二氯甲烷-甲醇(2∶ 1)洗脱，得12个组分；Fr.13-9-5经ODS柱，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脱，得14个组分；Fr.13-9-5-3再经半制备HPLC(甲醇-水15∶ 85)纯化，得化合物1(65.4 mg)、2(40.0 mg)。Fr.13-10反复经Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脱，得Fr.13-10-4-1～Fr.13-10-4-4；Fr.13-10-4-3经半制备HPLC(甲醇-水40∶ 60)纯化，得化合物3(14.8 mg)。Fr.15经ODS柱色谱分离，以甲醇-水(20∶ 80～100∶ 0)梯度洗脱，得15个组分；Fr.15-5经Sephadex LH-20柱，以甲醇洗脱，得6个组分；Fr.15-5-2再经半制备HPLC以甲醇-水(10∶ 90)纯化，得化合物6(36 mg)。

3 结构鉴定

化合物1:白色粉末。HRESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z：269.103 2(calcd.for C13H17O6269.102 5)，提示其分子量270。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.33(5H，m，H-2，3，4，5，6)，4.24(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：138.1(C-1)，128.1(C-3，5)，127.6(C-2，6)，127.3(C-4)，102.1(C-1′)，77.0(C-3′)，76.8(C-5′)，73.5(C-2′)，70.2(C-4′)，69.5(C-7)，61.2(C-6′)。以上数据与文献[5]报道基本一致，故鉴定为苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2:白色粉末。HRESI-MS给出准分子离子峰[M+H]+m/z：285.130 7(calcd.for C14H21O6285.133 8)，提示其分子量284。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：7.23(5H，m，H-2，3，4，5，6)，4.10(1H，m，H-8a)，3.77(1H，m，H-8b)，2.95(2H，m，H-7)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：140.2(C-1)，130.1(C-2，6)，129.5(C-3，5)，127.3(C-4)，71.8(C-8)，37.4(C-7)，104.5(C-1′)，78.2(C-3′)，78.1(C-5′)，75.2(C-2′)，71.8(C-4′)，62.9(C-6′)。以上数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定为苯乙醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物3:白色粉末。HRESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z：297.134 0(calcd.for C15H21O6297.133 8)，提示其分子量298。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：7.27(2H，m，H-3，5)，7.22(2H，m，H-2，6)，7.17(1H，m，H-4)，4.11(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.65～3.80(2H，m，H-8)，2.65(2H，t，J=7.7 Hz，H-7)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：141.8(C-1)，128.4(C-3，5)，128.2(C-2，6)，125.7(C-4)，102.9(C-1′)，76.8(C-5′)，76.7(C-3′)，73.5(C-2′)，70.1(C-4′)，67.8(C-9)，61.1(C-6′)，31.5(C-7)，31.1(C-8)。以上数据与文献[7]报道基本一致，故鉴定为苯丙醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4:无色针状晶体(甲醇)。HRESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z：185.048 8(calcd.for C8H9O5185.045 0)，提示其分子量186。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：7.94(1H，s，H-6)，4.52(2H，s，H-7)，3.57(2H，q，J=7.0 Hz，H-8)，1.19(3H，t，J=7.0 Hz，H-9)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：171.0(C-4)，149.4(C-3)，146.2(C-6)，144.5(C-5)，141.3(C-2)，67.5(C-8)，65.3(C-7)，15.5(C-9)。以上数据与文献[8]报道基本一致，故鉴定为2-乙氧基亚甲基-3，5-二羟基-γ-吡喃酮。

化合物5:白色粉末。HRESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z：263.128 7(calcd.for C15H19O4263.128 4)，提示其分子量264。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：7.78(1H，d，J=16.1 Hz，H-4)，6.25(1H，d，J=16.1 Hz，H-5)，5.92(1H，s，H-8)，5.75(1H，s，H-2)，2.53(1H，d，J=16.9 Hz，H-10a)，2.19(1H，d，J=16.9 Hz，H-10b)，2.04(3H，s，H-15)，1.93(3H，s，H-14)，1.06(3H，s，H-12)，1.03(3H，s，H-13)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：201.1(C-9)，169.6(C-1)，166.6(C-3)，151.1(C-7)，138.1(C-5)，129.6(C-4)，127.7(C-8)，119.8(C-2)，80.7(C-6)，50.8(C-10)，43.0(C-11)，24.8(C-15)，23.7(C-13)，21.4(C-14)，19.8(C-12)。以上数据与文献[9]报道基本一致，故鉴定为脱落酸。

化合物6:淡黄色固体。HRESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z：385.186 3(calcd.for C19H29O8385.186 3)，提示其分子量386。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：4.32(1H，m，H-9)，4.17(1H，d，J=7.8 Hz，H-1′)，3.63(1H，m，H-6′)，2.88～3.18(4H，m，H-2′，3′，4′，5′)，2.16(1H，d，J=16.8 Hz，H-2a)，2.05(1H，d，J=16.7 Hz，H-2b)，1.81(3H，d，J=13.0 Hz，H-13)，1.18(3H，d，J=6.4 Hz，H-10)，0.93(3H，s，H-11)，0.92(3H，s，H-12)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：197.3(C-3)，163.9(C-4)，133.3(C-8)，130.3(C-7)，125.6(C-5)，77.8(C-6)，74.5(C-9)，49.3(C-2)，40.9(C-1)，24.0(C-12)，23.0(C-11)，20.8(C-10)，18.8(C-13)，100.9(C-1′)，76.8(C-3′，5′)，73.6(C-2′)，70.0(C-4′)，61.1(C-6′)。以上数据与文献[10]报道基本一致，故鉴定为roseoside。

化合物7:无色油状。HRESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z：357.134 1(calcd.for C20H21O6357.133 8)，提示其分子量358。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：8.93(2H，s，H-4，4′)，6.89(2H，d，J=1.7 Hz，H-2，2′)，6.80～6.68(4H，m，H-5，5′，6，6′)，4.61(2H，d，J=4.3 Hz，H-7，7′)，4.12(2H，m，H-9b，9b′)，3.76(6H，s，2×OCH3)，3.72(2H，dd，J=9.1，3.7 Hz，H-9a，9a′)，3.03(2H，dd，J=6.4，4.6 Hz，H-8，8′)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：147.5(C-4，4′)，145.9(C-3，3′)，132.2(C-1，1′)，118.6(C-6，6′)，115.1(C-5，5′)，110.4(C-2，2′)，85.2(C-7，7′)，70.9(C-9，9′)，55.6(3，3′-OCH3)，53.6(C-8，8′)。以上数据与文献[11]报道基本一致，故鉴定为(+)-pinoresinol。

化合物8:白色粉末。HRESI-MS给出准分子离子峰[M-H]-m/z：153.018 2(calcd.for C7H5O4153.018 8)，提示其分子量154。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：6.78(1H，d，J=8.2 Hz，H-5)，7.29(1H，dd，J=8.2，2.1 Hz，H-6)，7.33(1H，d，J=2.1 Hz，H-2)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：167.3(-COOH)，150.0(C-4)，144.9(C-3)，121.9(C-1)，121.7(C-6)，116.6(C-2)，115.2(C-5)。以上数据与文献[12]报道基本一致，故鉴定为原儿茶酸。

化合物9:白色针状晶体(甲醇)。HRESI-M给出准分子离子峰[M-H]-m/z：122.023 5(calcd.for C6H4NO2122.024 2)，提示其分子量123。1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ：13.33(1H，s，-COOH)，9.07(1H，dd，J=2.1，0.6 Hz，H-2)，8.78(1H，dd，J=4.8，1.7 Hz，H-6)，8.26(1H，dt，J=7.9，2.0 Hz，H-4)，7.54(1H，ddd，J=7.9，4.8，0.8 Hz，H-5)；13C-NMR(125 MHz，DMSO-d6)δ：166.3(-COOH)，153.3(C-6)，150.2(C-2)，136.9(C-4)，126.6(C-3)，123.8(C-5)。以上数据与文献[13]报道基本一致，故鉴定为烟酸。

化合物10:无色油状。HRESI-MS给出准分子离子峰[M+H]+m/z：163.060 0(calcd.for C6H9O5163.060 6)，提示其分子量162。1H-NMR(500 MHz，Methanol-d4)δ：4.51(1H，dd，J=7.3，4.7 Hz，H-2)，2.81(1H，dd，J=15.9，4.7 Hz，H-3a)，2.71(1H，dd，J=15.9，7.3 Hz，H-3b)，3.74，3.69(3H，s，2×OCH3)；13C-NMR(125 MHz，Methanol-d4)δ：175.1(C-1)，172.6(C-4)，68.7(C-2)，52.8，52.4(2×OCH3)，40.0(C-3)。以上数据与文献[14]报道基本一致，故鉴定为苹果酸二甲酯。

4 讨论

本实验在前期研究的基础上，继续对蒲桃壳的化学成分进行研究，从中分离得到10个化合物，鉴定出1个吡喃酮类(4)、1个木脂素类(7)、1个二甲酯类(10)、3个有机酸类(5、8～9)、4个糖苷类化合物(1～3、6)，其中化合物1～6、10为首次从蒲桃属中分离得到；化合物7～9为首次从该植物中分离得到。化合物5具有较好的抗肿瘤、降血糖及抗炎活性[15]；化合物1～3具有抗补体活性[16]；化合物8具有显著的抑菌[17]、抗氧化[18]及降血糖活性[19]。然而，本研究仅限于蒲桃壳乙酸乙酯部位的分离，对于其药理作用及其机理，仍需要进一步的药理研究，以期为蒲桃壳化学成分的生物活性评价与药用研究提供基础。