超声检查联合γ-干扰素酶联免疫斑点法在附睾结核诊断中的价值

尹 航，范正超，黄天浩，朱晓黎，刘建震，李崇斌

(河北省胸科医院泌尿外科，河北石家庄 050041)

附睾结核是能够引起男性不育的生殖系统结核疾病，也是肺结核或泌尿系统结核疾病的常见并发症，由于其具有隐匿性、缺乏特异性实验室血清指标，因此早期诊断困难，严重影响患者治疗[1-3]。近年来超声显像已用于阴囊疾病诊断。高兴福[4]认为，彩色多普勒超声对阴囊疾病有重要的诊断价值，可作为阴囊疾病常规检查方法之一。γ-干扰素(interferon γ， IFN-γ)酶联免疫斑点法(enzyme-linked immunosorbent spot，ELISPOT)是一种新的检测结核诊断方法，临床已用于结核病的诊断[5]。刘建华等[6]研究显示，IFN-γ ELISPOT对附睾结核的早期诊断具有一定的敏感度和特异性。本研究拟纳入46例附睾结核患者，探讨超声检查及IFN-γ ELISPOT在附睾结核诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料纳入本院2018年6月-2019年2月经手术病理确诊的附睾结核男性患者46例为研究对象，年龄20～71岁，平均(45.92±12.42)岁。同期纳入因附睾隐痛或阴囊坠胀不适来本院就医的非附睾结核男性患者20例，年龄20～68岁，平均(45.27±12.61)岁。纳入标准：①附睾结核患者经结核抗体检测及结核感染T细胞、尿结核涂片检测，结果为阳性；②附睾结核患者术后病理检测证实为附睾结核；③患者经超声诊断后又接受IFN-γ ELISPOT检测。排除标准：①男性存在染色体异常者；②患恶性肿瘤者；③肝、肾功能不全者；④合并先天免疫性疾病、生殖器畸形者。本研究受试者知晓，经本院伦理委员会讨论批准。

1.2 超声检查采用Philips iU22超声检查仪，设置探头频率为7.5～10 MHz，嘱咐患者取仰卧位，充分暴露阴囊，然后对患者附睾进行观察，探查附睾内是否有病灶，结合彩色多普勒超声检查，观察病灶形状、大小及内部回声特点。

1.3 ELISPOT检测方法收集入组患者8 mL静脉血装于乙二胺四乙酸(EDTAK2)采血管中，在2 h内分离出单个核细胞。在ELISPOT培养板中预包被IFN-γ抗体，再注入细胞悬液，悬浮细胞密度为2.5×105，体积为100 μL。设置阳性对照孔和阴性对照孔，其分别加入等体积的植物血凝物和细胞悬浮液。在实验孔中分别加入PoolB、ESAT-6、PoolA，各溶液浓度均为5 μg/mL。置于培养箱中培训16～24 h，2 h后加入生物素化抗IFN-γ，孵育1 h，再加入二抗，温育1 h，加物液显色。再加入水终止反应，然后分析斑点数量。

结果判定：依据斑点数量判定，每孔中排除阴性孔中斑点数，斑点数≥30为阳性结果。若 PoolA、PoolB、ESAT-6抗原，至少有1种抗原的检测结果是阳性，判定为阳性；若3种抗原的测试结果都显示阴性，判定为阴性。

2 结 果

2.1 附睾结核超声表现病理确诊的46例附睾结核病例中，38例经超声诊断为附睾结核，尾部附睾结核有27例，头部附睾结核有8例，头体尾均侵犯的附睾结核有27例。超声显示，25例内部回声减低，有较丰富的血流信号；7例阴囊内可见不规则低回声，血流信号明显减少或未见血流信号；6例回声较强且分布不均，散在斑点状强回声，未见明显血流信号。

2.2 超声检查联合IFN-γ ELISPOT对附睾结核的诊断价值超声检查在附睾结核诊断中的准确度为84.85%、灵敏度为82.61%、特异度为90.00%；阳性预测值为95.00%，阴性预测值69.23%。IFN-γ ELISPOT诊断附睾结核42例，IFN-γ ELISPOT在附睾结核诊断中准确度为87.88%、灵敏度为91.30%、特异度为80.00%；阳性预测值91.30%，阴性预测值80.00%。超声检查联合IFN-γ ELISPOT在附睾结核诊断中准确度为90.91%、灵敏度为97.83%、特异度为75.00%；阳性预测值90.00%，阴性预测值93.75%。见表1。

表1 超声检查及IFN-γ ELISPOT对附睾结核诊断价值分析

3 讨 论

结核病是由传染性病原体引起的疾病，其发病率逐年增加，中国结核病每年新增病例占亚洲的55%。肺外结核以泌尿生殖系统结核比较常见，泌尿生殖系统结核是一种较为常见的疾病，可引起泌尿系统器官损伤，临床表现为尿急、尿频、尿痛、腰部疼痛、乏力等，由于其症状具有非特异性，因此早期诊断困难，易出现误诊，由此延误最佳治疗时机[7]。附睾是与睾丸外侧紧密相连的器官，是一个复杂的管状网络，可将睾丸传出管连接到输精管。附睾结核多数继发于泌尿系统结核，结核杆菌随尿液上行感染导致精囊感染、前列腺感染结核，并沿着输精管导致附睾头感染[8]。研究认为，附睾结核中结核菌会由肾到前列腺、精阜、输精管再到附睾，造成附睾有不同程度的结节，并导致的附睾结核多位于附睾尾部，另外经肺结核等其他脏器结核血行感染传播引起的附睾结核患者，不仅要检查双肾及肺部，还要检查其他部位[9]。附睾结核可造成附睾组织内附睾管和附睾外段输精管完全或部分阻塞，造成患者出现无精或少精的现象，引起男性不育，严重时还会引起患者整个附睾坏死，因此附睾结核在临床中后遗症急需重视[10]。在临床上，有窦道形成、附睾硬结、皮肤形成粘连、附睾化脓性感染等特异性特征的附睾结核患者的诊断较为容易；但一些存在非特异性附睾结节的患者，早期诊断困难，因此寻找可早期诊断附睾结节的临床方法显得尤为重要。

ELISPOT及超声检查对附睾结核的早期诊断能提供一定的依据。ELISPOT是一种新兴的结核检测方法，操作简单，具有可重复性。结核杆菌感染后会激活巨噬细胞产生肿瘤坏死因子α和白细胞介素6等，活化特异性T淋巴细胞，该细胞再次被结核杆菌激活后分泌IFN-γ，IFN-γ ELISPOT可用于分析IFN-γ变化情况，并被用于结核杆菌的筛查工作中[11-12]。ELISPOT检测原理：特异性抗原刺激T淋巴细胞后分泌的细胞因子会被膜包被的特异性单克隆抗体捕获后与生物素标记的二抗、碱性磷酸酶的亲和素结合，然后孔底显示出紫色斑点[6]。ELISPOT也存在不足之处：对检测条件要求较高，在抗原检测过程中若有细菌污染，则检测结果不准确，且实验材料费较高，不适合二次操作[13-14]。

附睾结核的主要病理变化是结核结节形成，组织损坏，损坏的组织形成干酪样病变；另一个病理变化是附睾结核钙化:由于附睾结核的纤维化导致输精管道闭塞或狭窄，干酪坏死的附睾组织发生钙质沉淀，病变部位见斑点状钙化灶[15]。附睾结核超声诊断具有无创、快速的优势。有研究认为附睾结核早期血流表现丰富，附睾内存在结核杆菌感染，病变周边微动脉会出现扩张；随着病情进展，附睾内病灶内干酪样坏死及钙化形成，病灶区内血流信号表现为减少或无信号[16-17]。有研究显示，急性期附睾结核因炎症反应血流较为丰富，后因附睾内出现干酪样坏死及结节钙化，导致附睾内血管组织损伤，引起附睾核内血流信号减少[18]。

本研究显示超声检查在附睾结核诊断中准确度为84.85%、灵敏度为82.61%、特异度为90.00%；ELISPOT在附睾结核诊断中准确度为87.88%、灵敏度为91.30%、特异度为80.00%；超声检查联合IFN-γ ELISPOT在附睾结核诊断中准确度为90.91%、灵敏度为97.83%、特异度为75.00%，提示超声检查联合IFN-γ ELISPOT对附睾结核具有一定的诊断价值，可明显提高单独超声检查对附睾结核诊断的灵敏度。超声医师虽熟练掌握附睾结核的声像图表现及病理演化过程，但附睾结核的临床诊断仍需结合患者临床表现及结核病史，综合分析，最终诊断需依据病理结果。

综上所述，超声检查联合IFN-γ ELISPOT对附睾结核具有较高的诊断价值，能够为临床及早治疗患者提供依据。