啶酰菌胺等8 种杀菌剂对烟草叶斑病菌的生物活性

汪汉成, 黄 宇, 杨金初, 李治模, 蔡刘体,韦克苏, 孟建玉, 李 忠

(1. 贵州省烟草科学研究院，贵阳 550081；2. 贵州大学 农学院，贵阳 550025；3. 河南中烟工业有限责任公司技术中心，郑州 450000；4. 贵州省烟草公司 遵义市公司，贵州 遵义 563099)

由叶斑病菌Didymella segeticola引起的烟草叶斑病是近期在贵州烟区发现的新病害，主要为害叶片，初始症状为叶片上出现褐色小病斑，周围有淡黄色晕圈，褐色病斑会很快扩展至整个叶片，严重时相邻病斑会融合形成大面积褐色病斑，烟株感染后通常自底部叶片迅速向中上部叶片扩展，具有暴发性和危害性强的特点，严重时局地烟株发病率达80%以上，可导致烟叶成片腐烂[1]。该病害易于烟株旺长期开始发生，具有造成重大损失的风险，尚无有效抗病品种，亟待建立高效防控技术。

化学防治是烟草叶斑类病害防治最经济有效的方法，对于由D.segeticola引起的烟草叶斑病,目前尚未有登记药剂，相关防控技术研究也鲜有报道。现阶段，烟草真菌性叶斑类病害常用的防控药剂有菌核净(dimethachlon)、咪鲜胺(prochloraz)、多菌灵 (carbendazim)、代森锰锌(mancozeb) 等，少量使用的药剂有啶酰菌胺(boscalid)、苯醚甲环唑 (difenoconazole)、丙环唑(propiconazole) 和氟硅唑 (flusilazole) 等。为了评价这些药剂在防治烟草叶斑病方面的可行性，笔者就啶酰菌胺等8 种杀菌剂对D.segeticola的生物活性进行了初步研究，结果报道如下。

1 材料与方法

1.1 供试材料

菌株：烟草叶斑病菌D.segeticola菌株YBZ121、YBZ221 和YBZ111，由贵州省烟草科学研究院微生物实验室分离、鉴定。

测试培养基与烟叶：马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA)[2]，用于病原菌的培养和敏感性测定。供试烟草品种为云烟87，烤烟主栽品种，按照常规育苗方法将其播种植于漂浮育苗池，烟苗8 叶期时，采集底部3-4 叶位烟叶，洗净晾干后用于药剂的保护和治疗作用测定。

药剂：93%的菌核净原药，购自广州卡芬生物科技有限公司；99.10%的咪鲜胺原药，江苏辉丰农化股份有限公司生产；95.30% 的氟硅唑原药，南通柯林化学品有限公司生产；95%丙环唑原药，江苏丰登农药有限公司生产；96.80%苯醚甲环唑原药，山东寿光双星农药有限公司生产；85%代森锰锌可湿性粉剂，杜邦中国集团有限公司生产；96%多菌灵原药，江苏蓝丰生物化工股份有限公司生产；99.90%啶酰菌胺原药，Sigma-Aldrich 有限公司生产。

将菌核净溶于丙酮，咪鲜胺、氟啶胺、氟硅唑、丙环唑和苯醚甲环唑均分别溶于甲醇，多菌灵溶于0.20 mol/L 的稀盐酸，代森锰锌溶于无菌水中，均分别配成1.00 × 104mg/L 的母液，4 ℃低温保存，备用。

1.2 试验方法

1.2.1 杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制作用 配制含有系列浓度各药剂的PDA 平板，其中：菌核净、氟硅唑和丙环唑的最终测试质量浓度为0、0.16、0.31、0.63、1.25 和2.50 mg/L；苯醚甲环唑的为0、0.08、0.16、0.31、0.63 和1.25 mg/L；多菌灵的为0、0.50、1.00、1.5、2.00 和2.50 mg/L；代森锰锌的为0、3.10、6.30、12.50、25 和50 mg/L；咪鲜胺的为0、0.13、0.25、0.50、1 和2 mg/L；啶酰菌胺的为0、0.013 0、0.025 0、0.05、0.10 和0.20 mg/L。制备直径为5 mm 的菌蝶，将其接种于不同质量浓度梯度含药平板中央，各处理3 次重复，接菌后将平板置于25 ℃恒温培养箱中黑暗培养，5 d 后“十字交叉”法测量菌落直径，计算各药剂不同剂量下对病原菌菌丝生长的抑制率[3]。

1.2.2 杀菌剂对烟草叶斑病的保护和治疗作用测定 选择强致病力菌株YBZ121 为测试菌株。用质量浓度为0.01%的吐温-80 配制各供试药液。苯醚甲环唑、丙环唑、氟硅唑、啶酰菌胺、多菌灵及菌核净的最终测试质量浓度均为100、25 和0 mg/L；代森锰锌的为400、100 和0 mg/L；咪鲜胺的为200、50 和0 mg/L。1.2.2.1 保护作用测定 采用手动喷雾器向离体叶片正反两面均匀喷施各浓度药液，直至流淌。以喷施同体积无菌水处理为对照。于施药24 h 后，用无菌接种针在叶片主脉两侧对称部位制造相同伤口，分别接菌直径为5 mm 的病原菌菌饼。每处理3 片烟叶，共6 次重复。接菌后将叶片置于25 ℃、相对湿度 90%及12 h/12 h 光暗交替的人工气候箱中培养，6 d 后测量叶片病斑面积，计算各药剂处理对烟草叶斑病的防控效果[4-5]。

1.2.2.2 治疗作用测定 方法与保护作用测定相同，不同之处是接菌1 d 后再喷药[4-5]。

1.2.3 数据处理 利用Excel 和SPSS 23.0 软件进行数据统计分析，以药剂质量浓度对数值为横坐标、菌丝生长抑制率几率值为纵坐标，建立各药剂对病原菌菌丝生长的毒力回归方程，计算EC50值和相关系数 (r)[6]。

2 结果与分析

2.1 杀菌剂对病原菌菌丝生长的抑制作用

结果 (表1) 表明：8 种供试杀菌剂对3 株D.segeticola菌株的菌丝生长表现出不同的抑菌活性，其中，抑菌活性最强的是啶酰菌胺，其EC50值范围为0.033 0～0.055 0 mg/L，平均值为(0.047 0 ± 0.012 0) mg/L；其次依次为苯醚甲环唑、咪鲜胺和丙环唑，其EC50值范围分别为0.075 0～0.085 0 mg/L、0.22～0.38 mg/L 和0.56～0.79 mg/L；代森锰锌的抑菌活性最差，其EC50值范围为12.88～33.82 mg/L。D.segeticola不同菌株菌丝生长对同种药剂的敏感性存在差异，其中对代森锰锌的差异最大，最不敏感菌株 (YBZ111) 的EC50值是最敏感菌株 (YBZ121) 的2.63 倍，各菌株对其余7 种供试药剂的敏感性差异均较小。

表1 8 种杀菌剂对Didymella segeticola 菌丝生长的抑制作用Table 1 Inhibitory effects of eight fungicides on the mycelial growth of Didymella segeticola

续表1Table 1 (Continued)

2.2 杀菌剂对烟草叶斑病的保护和治疗作用

供试8 种杀菌剂对烟草叶斑病表现出不同的保护和治疗作用。各药剂的防治效果均随药剂质量浓度的增加而增强，而在相同剂量下，大部分药剂保护处理时的防效高于其治疗处理时的防效(表2)。其中，氟硅唑、苯醚甲环唑、丙环唑、啶酰菌胺和菌核净对烟草叶斑病保护作用较强，其在25 mg/L 药剂质量浓度处理下的防效均 ＞85%；其次为多菌灵，25 mg/L 时的防效为82.74%；最弱的为代森锰锌，100 mg/L 时的防效为70.51%。相比而言，治疗作用效果较好的有啶酰菌胺和氟硅唑，其在25 和100 mg/L 下的防效均 ＞80%，且不存在显著性差异；咪鲜胺在50 和200 mg/L 下的防效分别为85.24%和87.62%；苯醚甲环唑和多菌灵在25 和100 mg/L 下的防效均分别为76.00%和89.20%、及77.52%和82.43%；菌核净和代森锰锌的相对防效较弱，100 mg/L 处理时防效分别为78.93%和63.31%。

表2 8 种杀剂对烟草Didymella segeticola 叶斑病的保护和治疗作用Table 2 Protective and curative effects of eight fungicides against D. segeticola leaf spot

3 小结与讨论

D.segeticola是近年被诊断的重要植物病原菌，在贵州烟草和茶叶上均有危害[1,7-8]，然而对其防控技术却缺乏研究，尚无任何防控药剂登记。病原菌菌丝生长阶段和孢子萌发阶段均是其侵染危害的重要阶段，抑制病原菌菌丝生长是病害防治药剂筛选的重要依据之一。由于D.segeticola的孢子较难培养，故本研究测定并比较了8 种杀菌剂对D.segeticola菌丝生长的敏感性，发现琥珀酸脱氢酶抑制剂啶酰菌胺，三唑类杀菌剂苯醚甲环唑、丙环唑和氟硅唑，咪唑类杀菌剂多菌灵和咪鲜胺对D.segeticola菌丝生长均有较强的抑制活性。目前，鲜见有杀菌剂对D.segeticola生物活性的报道，刘顺涛等报道了苯醚甲环唑和多菌灵对与D.segeticola同属的西瓜蔓枯病病原菌Didymellabryoniae的毒力分别为0.056 0 和0.69 mg/L[9-10]，本研究测定结果与其基本一致。啶酰菌胺及三唑类杀菌剂戊唑醇和苯醚甲环唑对D.bryoniae的敏感性基线分别为0.032 0、0.12 和0.031 0 mg/L，本研究所测定的啶酰菌胺及3 种三唑类杀菌剂结果与其类似[11]。另外，代森锰锌对D.segeticola的抑菌作用弱于已报道的该药剂对Didymella applanata毒力作用 (EC50在1.33～2.88 mg/L)[12]，这可能与Didymella属真菌不同菌株对相同药剂的敏感性间存在着差异有关。

除室内敏感性测定外，活体植物组织上评价药剂的防控效果也是病害防治药剂筛选的重要依据。本研究在活体烟叶上评价了8 种杀菌剂对由真菌D.segeticola导致的叶斑病的保护和治疗效果，发现其保护防效均高于治疗防效，该结果与这些药剂对烟草灰霉病和烟草立枯病的防治效果[4,13]类似；同时发现保护作用和治疗作用均较好的药剂有啶酰菌胺、苯醚甲环唑、氟硅唑和咪鲜胺等。已有研发表明，咪鲜胺的内吸传导活性较弱[14]，而本研究发现其在离体叶片上仍具有较好的治疗活性，推测其原因可能与本研究通过离体叶片喷雾时药剂通过叶片气孔等孔口进入叶组织有关，随后需要进一步研究和验证。烟叶生产上常使用的菌核净、多菌灵等也具有较好的防治作用，但病原菌对这些药剂产生抗性的风险较高。为此，D.segeticola叶斑病发生时可优先选用啶酰菌胺、苯醚甲环唑、氟硅唑等药剂进行防治。此外，本文仅测定了药剂对D.segeticola的菌丝生长阶段的抑菌活性，其对病原菌孢子形成与萌发等其他生活史阶段的生物活性、以及其田间防效均有待进一步深入研究。此外，烟草是一种小面积种植的经济作物，2022 年全国年种植面积约86 万公顷，登记防控烟草病虫害的药剂种类较少，下一步有待通过政策引导等措施加强防控药剂的登记，促进烟草病虫害防控水平的提升。