少数民族药蔓性千斤拔饮片质量标准研究

2022-12-26佘永红杨德泉丁野

药品评价 2022年18期

佘永红，杨德泉，丁野

1.湘西土家族苗族自治州食品药品检验所，湖南吉首 416000；2.湖南省药品检验检测研究院，湖南长沙 410001

《湖南省中药饮片炮制规范》（2010 年版）［1］千斤拔来源规定：为豆科植物蔓性千斤拔Flemingia philippinensisMerr.et Rolfe 的干燥根，或大叶千斤拔Flemingia macrophylla(Willd.) Prain 的干燥根和茎。蔓性千斤拔是千斤拔的别名［2］，蔓性千斤拔在许多少数民族地区使用历史悠久，湖南地区土家族药名为“巴起撇”，苗药称“嘎芮咣”，瑶药名“吊马桩”。《岭南采药录》［3］记载千斤拔具有祛风去湿，舒筋活络的功效。现代研究中郭橹橹等［4］采用去势成年雌鼠建立骨质疏松模型，用含千斤拔的混合粉组配方进行试验，具有一定的改善骨功能的作用。千斤拔祛风除湿，强筋壮骨的功效在现代临床中应用广泛，如含有千斤拔的外用制剂正骨水、肿痛灵酊剂及金花跌打酊等，内服药活络止痛丸、抗风湿液及钻山风糖浆等。千斤拔及其制剂治疗妇科病疗效确切，如补血调经片中千斤拔与诸药合奏，有补血理气，调经的功效。湖南地区的民族医还用于肚气虚症、水肿病、肾虚、子宫下垂、偏瘫、老年久咳、奶痈等症的治疗，湖南的土家医用本品与土党参、倒水莲、牛皮消等配伍，共奏健肚补气之功［5］。

千斤拔饮片已被《湖南省中药饮片炮制规范》2010 年版收载，但是质量标准的可控性亟待提升，为了使千斤拔饮片质量得到更有效的控制，本标准研究修订了蔓性千斤拔的性状、薄层色谱鉴别及浸出物测定，增订了水分、总灰分的检查，并对饮片中染料木苷和染料木素含量测定方法进行了研究，提升了千斤拔饮片质量标准的可控性。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AUW220D 电子天平（日本岛津公司），最大量程：82/220 g，称量精度：0.01 mg/0.1 mg；Agilent 1260高效液相色谱仪；检测器：VWD；色谱柱：安捷伦SB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），型号：880975-902，Agilent 公司；色谱工作站：Rev.B.04.03［16］；ZOOMWO Water Environmental 超纯水机；中文液晶超声波清洗器（昆山美美超声仪器有限公司）；DZTW 电子调温电热套；XMTD-4000 电热恒温水浴锅；TDZ5-WS 医用离心机；202 型电热恒温干燥箱；KSW 电炉温度控制器。

1.2 试药

染料木苷对照品（批号：111709-201702，含量以99.9%计）；染料木素对照品（批号：111704-201703，含量以99.5%计）；千斤拔对照药材（批号：121502-201803），以上对照品及对照药材均购自中国食品药品检定研究院。硅胶G 板（德国默克公司）；甲醇、乙腈为色谱纯；水为纯化水；其他试药均为分析纯。

1.3 实验样品

15 批蔓性千斤拔饮片由湖南省5 家饮片生产企业提供，产地分别来自湖南、云南、广西，经湘西土家族苗族自治州食品药品检验所杨德泉主任药师鉴定均为正品。

2 方法与结果

2.1 性状鉴别

通过考察15 批饮片的性状特征，本品呈类圆形或椭圆形厚片或短段，直径0.5～1.5 cm。外表面灰棕色或红棕色，有细纵纹及横长皮孔样斑痕；切面纤维性，皮部薄，棕红色，易与木部分离；木部黄白色或淡红色，具放射状纹理。微具豆腥气，味微甘、涩。见图1。

图1 蔓性千斤拔饮片图

2.2 薄层色谱鉴别

分别取15 批样品，粉碎，过二号筛，取约2 g，加石油醚（60 ℃～90 ℃）30 mL，超声（功率：200 W，频率：40 kHz）处理30 min，取滤液，置水浴上蒸干，加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液。同法制成千斤拔对照药材溶液。使用硅胶G 板，点样量为5 μL，以环己烷-丙酮（8∶3）为展开剂，10%磷钼酸乙醇溶液为显色剂，在105 ℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。结果15 批供试品薄层色谱所显示的斑点颜色和位置与对照药材色谱一致。见图2。

图2 蔓性千斤拔饮片TLC色谱图

2.3 检查

水分、总灰分照《中国药典》2020 年版四部测定，结果见表1。

2.4 浸出物

照《中国药典》2020 年版四部水溶性浸出物测定法，用热浸法测定，结果见表1。

表1 蔓性千斤拔饮片水分、总灰分、浸出物测定结果

2.5 含量测定

2.5.1 色谱条件安捷伦SB-C18 色谱柱（250 mm× 4.6 mm，5 μm）；流速1.0 mL/min；检测波长为260 nm；柱温30 ℃。进行梯度洗脱，洗脱梯度见表2。理论板数按染料木苷峰计算不低于8 000。

表2 流动相梯度洗脱程序

2.5.2 对照品溶液的制备精密称取染料木苷对照品16.45 mg，加60%乙醇制成染料木苷对照品储备液（328.671 0 μg/mL）。另精密称定染料木素对照品14.24 mg，加60%乙醇制成染料木素对照品储备液（283.376 0 μg/mL）。精密吸取上述对照品储备液，加60%乙醇制成含染料木苷浓度为16.433 6 μg/mL、染料木素浓度为11.335 0 μg/mL 的混合对照品溶液。

2.5.3 供试品溶液的制备取本品样品粉末（过二号筛）约0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇25 mL，称定重量，超声（功率：200 W，频率：40 kHz）处理30 min，放冷，补足减失的重量，摇匀，取续滤液，即得。

2.5.4 系统实用性试验进样量：10 μL，结果表明，分离度大于1.5，理论板数均在70 000 以上，样品中其他成分对染料木苷、染料木素的测定无干扰。见图3。

图3 液相色谱图：A.染料木苷、染料木素对照品；B.蔓性千斤拔样品；C.空白溶剂

2.5.5 线性关系考察分别精密吸取浓度为328.671 0 μg/mL 的染料木苷及浓度为283.376 0 μg/mL 的染料木素对照品储备液，制成分别含染料木苷浓度为1.643 4、3.286 7、8.216 8、16.433 5、32.867 1、65.734 2 μg/mL及分别含染料木素浓度为1.416 9、2.833 8、7.084 4、14.168 8、28.337 6、56.675 2 μg/mL 的混合对照品溶液，精密吸取上述系列混合对照品溶液各10 μL，按“2.5.1”项下色谱条件进行测定，以染料木苷、染料木素浓度为（μg/mL）为横坐标，峰面积积分值为纵坐标进行线性回归。染料木苷回归方程为：y=54.917x-7.038 1，r=0.999 9；染料木素回归方程为：y=80.979x-3.317 9，r=1.000 0。结果表明：染料木苷和对染料木素对照品线性范围分别在1.643 4～65.734 2 μg/mL 和1.416 9～56.675 2 μg/mL 之间呈良好的线性关系。

2.5.6 精密度试验取“2.5.3”项下的供试品溶液（批号201911103），按“2.5.1”项下色谱条件测定染料木苷峰面积RSD 为0.27%（n=6），染料木素峰面积RSD 为1.2%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.5.7 稳定性试验取“2.5.3”项下的供试品溶液（批号201911103），分别于配制后的0、4、8、12、16、24 h，进行测定，染料木苷峰面积RSD 为0.57%,染料木素峰面积RSD 为0.52%，表明配制后24 h内供试品溶液稳定性好。

2.5.8 重复性试验取样品粉末（批号201911103）6 份，按“2.5.3”项制备供试品溶液，按“2.5.1”项下色谱条件测定，含染料木苷和染料木素的总量（按干燥品计算）分别为0.079%、0.077%、0.079%、0.077%、0.081%、0.079%，RSD 为2.0%，表明该方法重复性良好。

2.5.9 耐用性试验采用拟定的方法，选用2 种高效液相色谱仪、2 种检测器，2 根不同品牌的色谱柱，（1）仪器：Agilent 1260 Infinity，检测器VWD；色谱柱：SB-C18（250 mm×4.6mm，5 µm），型号：880975-902，Agilent 公司。（2）仪器：Agilent 1260 Infinity Ⅱ，检测器DAD；色谱柱：Acclaim™ Polar Advantage IIC18（250 mm×4.6 mm，5 µm），型号：JADE-PAK，Thermo 公司。平行测定同一生产企业3 个批号的样品（201911103、201911104、201911105），结果3 份样品染料木苷和染料木素的总量分别为（1）0.078 7%、0.080 7%、0.079 2%；（2）0.078 7%、0.080 4%、0.079 0%。（1）与（2）测定的3 份样品含量结果之间的RSD 分别为0%、0.27%，0.18%。结果表明，本方法耐用性良好。

2.5.10 回收率试验取已测定含量（含染料木苷0.481 1 mg/g、染料木素0.305 8 mg/g）的同一批蔓性千斤拔（批号201911103）供试品9 份，按干燥品计算（水分7.57%），按80%、100%和120%的水平精密加入浓度为328.671 0 μg/mL 的染料木苷对照品储备液及浓度为283.376 0 μg/mL 的染料木素对照品储备液各适量，按“2.5.3”项下方法制备供试品溶液，测定结果见表3、表4。