子宫颈癌组织中miR-153和Survivin的表达及其临床意义

刘淑允

子宫颈癌为常见恶性肿瘤，在临床具有较高的发病率，且近年发病逐渐趋于年轻化。由于子宫颈癌在发病早期无明显症状，多数患者经临床检查确诊时已处于中晚期，威胁生命安全[1-2]。临床应探寻更为合理的筛查措施和诊断方式，以尽早检查出子宫颈癌前病变，保障患者健康及生命安全[3-4]。微小RNA-153(miR-153)为非编码单链RNA分子，参与生物体细胞增殖、凋亡等多种调控，其异常表达与各种妇科肿瘤的发生联系紧密[5]。而生存素(Survivin)为抗凋亡基因，与人体多数肿瘤的发生、预后有关[6]。但临床关于miR-153与Survivin在子宫颈癌患者癌组织内的表达的相关研究报道较为缺乏，还有待进一步研究。基于此，本研究以58例子宫颈癌患者为研究对象，分析两者在子宫颈癌患者癌组织内的表达与意义。结果示下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院2018年3月至2019年3月诊治的58例子宫颈癌患者为研究对象，采集所有患者的癌组织(观察组)与癌旁组织(对照组)。研究经医学伦理委员会批准。纳入标准：患者均经病理检查证实；患者的病历资料齐全；术前均未服用抗肿瘤药物或接受任何放、化疗者；患者纳入遵从自愿原则，依从性较高，签署知情同意书。排除标准：存有其他恶性肿瘤者；合并免疫系统病症者；存在神经疾患者；存有肝肾等重要脏器功能严重不全者；存有精神疾患或难以进行正常交流者；存有全身性感染者；合并血液系统疾病者。所有患者年龄30～64岁，平均年龄(50.79±2.38)岁；体重指数18.7～26.9 kg/m2，平均体重指数(23.57±0.64)kg/m2；肿瘤直径：≥4 cm 31例，<4 cm 27例；淋巴结转移：有34例，无24例；临床分期：20例Ⅰ期，13例Ⅱ期，25例Ⅲ期。

1.2 方法

标本采集：于施行手术时，取患者的癌组织与癌旁组织标本，以逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测miR-153，以免疫组化法检测Survivin。检测方法：(1)RT-PCR法：以RT-PCR法测定转染效果，Trizol法提取组织内的总RNA，之后严格依据试剂盒步骤提取核酸，制备逆转录反应体系，最终以2-ΔΔCt法计算miR-153水平。 (2)免疫组化法：选择2组的标本予以石蜡切片的制备，以一般方法脱蜡、包埋、切片，把切片置在0.01 mol/L枸橼酸钠缓冲液内，施以15 min加热，以此对抗原修复；取出后以0.01 mol/L磷酸盐缓冲液(PBS)溶液施行3次清洗，加入过氧化氢溶液进行25 min孵育，然后再一次的以PBS溶液清洗5次，加入5%山羊血清，在室温条件下进行10 min封存，之后滴加一抗在4 ℃冰箱内过夜，第2天用PBS清洗3次，滴加二抗，在室温条件下孵育30 min；二氨基联苯胺(DAB)染色，苏木精复染，脱水、透明与封固，在镜下观察，另外以空白PBS液当成阴性对照。结果评判：依据细胞染色程度与染色细胞百分率予以综合评分，0分：无着色；1分：黄色；2分：棕黄色；3分：黄褐色。依照阳性细胞百分率评分：0分：<10%；1分：≥10%～40%；2分：>40%～70%；3分：>70%。以上两项得分相加，满分在2分及以上为高表达，反之为低表达。

1.3 观察指标

(1)2组miR-153、Survivin表达情况。(2)miR-153、Survivin表达与子宫颈癌患者临床病理特征关系。(3)miR-153、Survivin表达与子宫颈癌患者预后关系。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 2组miR-153、Survivin表达对比

观察组miR-153相对表达量低于对照组，Survivin高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 2组miR-153、Survivin表达对比

2.2 miR-153、Survivin表达与子宫颈癌患者临床病理特征关系

miR-153、Survivin表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期无关，差异无统计学意义(P>0.05)；与淋巴结转移有关，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

2.3 miR-153、Survivin表达与子宫颈癌患者预后关系

Kaplan-Meier结果显示：miR-153低表达患者3年生存率低于miR-153高表达者，Survivin高表达患者3年生存率低于Survivin低表达者，差异有统计学意义(χ2=4.117、4.203，P=0.043、0.040)。见图1-2。

3 讨论

受病毒感染、女性分娩次数等影响，子宫颈癌的发病率呈升高趋势。子宫颈癌发病机制较为复杂，临床尚未完全明晰，临床多认为人乳头瘤病毒(HPV)感染是子宫颈癌发生独立危险因素，而抽烟、性生活开始过早等均参与该病的发生发展[7-8]。同时，子宫颈癌患病初期无明显表现，导致多数患者忽视有关症状，进而错失最佳治疗时机[9-10]。临床需探寻一快速有效的检查措施，以提高疾病的早期诊断率，指导临床施行个体化的治疗，以增强病情控制效果。

临床多项研究表明，基因、蛋白均会参与子宫颈癌的发生与发展[11-12]。miRNA参与多条信号通路的调控，而miR-153为与肿瘤相关的miRNA之一[13]。miR-153在乳腺癌、导管腺癌内表达均呈显著降低态势，可阻碍癌变细胞的增殖与侵袭，而在结直肠癌中则为过高表达水平，会间接强化癌变细胞的侵袭水平，促进疾病进展。Survivin属目前筛选分离的分子量最小、凋亡抑制活性最强的抑制因子，其通过对半胱氨酸蛋白酶Caspase-3与Caspase-7活性予以阻碍，从而发挥抗凋亡作用，并通过对细胞周期的调控加速癌变细胞的增殖，在多个肿瘤细胞内均呈高表达状态[14-15]。但临床关于miR-153与Survivin在子宫颈癌内的相关分析研究报道较为缺乏，尚需进一步探究。本研究结果显示：观察组miR-153相对表达量低于对照组，Survivin高于对照组；miR-153、Survivin表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期无关，与淋巴结转移有关；且Kaplan-Meier结果显示：miR-153低表达者，Survivin高表达患者3年生存率较低。表明miR-153与Survivin参与子宫颈癌的发生发展，且miR-153越低、Survivin越高，则患者的生存率更低。其原因为miR-153有抑癌作用，其表达水平降低可能促使子宫颈癌细胞增殖；Survivin相对高表达会抑制子宫颈癌细胞凋亡，改变细胞周期，促使癌细胞增殖过度，与疾病的发生、发展有关。但尚需值得注意的是，本次试验还存有样本量较少的局限性，可能会对本试验结果精准性构成一定干扰。因此，后续临床还需持续完善试验设计，不断扩充样本量，以此进行更深层次探究，进一步了解miR-153、Survivin与子宫颈癌的关系，继而为临床制定规范、个体化的诊治措施提供更为可靠的指导，以最大程度地提高患者生存率。

表2 miR-153、Survivin表达与子宫颈癌患者临床病理特征关系(例，%)

图1 miR-153低表达者Kaplan-Meier生存曲线图

图2 Survivin高表达者Kaplan-Meier生存曲线图

综上所述，子宫颈癌患者癌组织内的miR-153呈低表达，Survivin呈高表达状态，两项指标均与淋巴结转移有关，且miR-153表达越低，Survivin表达越高，则患者生存率更低，临床需予以高度重视。