胃癌组织中PD1表达的临床价值

余洁丽 陈火国 刘志良 胡继龙 黄 灿 银天骄

胃癌是一种恶性肿瘤，位于胃黏膜上皮，主要发生在50岁以上的人群，尤其是男性患者[1]。胃癌在我国的发病率具有一定的差异性，西北地区比南方要高。胃癌的发病原因主要与饮食结构、工作原因、幽门螺旋杆菌感染等原因具有一定的关系[2]。胃癌在任何胃部都有可能发病，大多数发病于胃窦部和胃大、小弯处。大多数的胃癌属于腺癌，早期无任何的表现症状，与胃炎、胃溃疡等具有一定的相似性，因此，往往不能引起足够的重视[3]。由于现在生活方式的加快，胃癌发病趋于年轻化，且大多数患者发现确诊时病灶已经转移，5年生存率为20%左右，因此我们要早期诊断来提高预后[4]。程序性死亡受体(PD1)可以与配体相互作用诱发T细胞的凋亡，具有调控效应的作用，因此本研究对胃癌患者的PD1水平进行检测，探讨其临床价值。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2021年12月到2022年3月到本院就诊的胃癌患者30例作为研究组，并选择相同时间健康体检人员作为对照组。研究组男性18例、女性12例，年龄32～55岁，平均(45.2±1.8)岁；对照组男性25例，女性5例，年龄35～53岁，平均(49.3±1.6)岁。2组患者的一般资料进行对比，具有可比性。

1.2 纳入和排除标准

纳入标准[5]：①未进行任何化疗药物治疗的患者；②未合并其他肿瘤和恶性疾病的患者；③资料健全的患者；④病灶无深部转移的患者；⑤知情同意，自愿参加；⑥配合良好的患者。排除标准[6]：①有接受化疗药物治疗的患者；②合并其他肿瘤或恶性疾病的患者；③合并有其他慢性病或心脏病、肝肾功能障碍的患者；④依从性较差的患者。

1.3 方法[7]

分别采集研究组癌组织和对照组的正常组织，并采用免疫组织化学二步法对标本组织进行染色并检测PD1的表达。将标本进行制备成4 μm的切片，脱蜡和水化，在温室内滴入3%的过氧化氢并放置10 min，再用PBS冲洗3次，每次5 min，并用pH值为6.0的柠檬酸盐缓冲液用微波炉加热20 min进行抗原修复，待冷却后再用PBS进行冲洗3次，每次5 min，滴入PD1抗体并放置于4 ℃温度下进行孵化过夜，再次使用PBS进行冲洗3次，每次5 min，在标本切片上滴入50 μl二抗试剂并放置室温下进行孵化大约20 min，并用PBS进行冲洗3次，每次5 min,在标本切片上加入100 μl DAB显色剂在显微镜下进行显色3～5 min后，用蒸馏水进行终止显色，最后进行封片。

1.4 结果判定

PD1阳性表现为细胞核、细胞质、细胞膜出现黄色到黄褐色颗粒。

1.5 统计学方法

2 结果

2.1 2组PD1表达率对比

对照组为健康人群，在胃黏膜组织中PD1无表达；研究组胃癌组织中，PD1表达阳性有26例，阳性表达率为86.7%，2组结果具有统计学差异(χ2=45.882，P<0.05)。

2.2 PD1表达与胃癌临床病理特征的关系

通过数值分析，发现PD1与临床病理特征没有直接的相关性(P>0.05)。见表1。

3 讨论

胃癌是一种恶性程度高的肿瘤，浸润性和转移能力较强，以手术治疗和化疗为主，治疗虽可以改善患者一定的生存期，但是晚期胃癌预后仍然不理想。目前对胃癌的发病机制尚不十分清楚，没办法研制出治疗胃癌特异性的药物[8-9]，因此对于胃癌的早期诊断显得尤为重要。分子生物学的发展在恶性肿瘤中发挥着重要的作用，可提升癌症的治疗效果。

表1 胃癌患者PD1表达与临床病理的关系/例

PD1是一种免疫抑制的分子，可以在淋巴细胞和巨噬细胞中进行表达。有研究指出PD1在抗肿瘤、感染、自身免疫系统等方面具有很好的免疫调节作用。PD1可以调解CD4和CD8细胞分子的功能，可以使活化的细胞凋亡，在免疫系统疾病中发挥着重要的作用，Anti-PD1或anti-PDL1抗体通过阻断PD1与PDL1的相互作用，以达到增强抗肿瘤活性。有研究者指出[10]，PD1的抗体能够对T淋巴细胞的功能有一定的恢复作用，进而对肿瘤细胞进行识别和增强免疫。也有研究者表明PD1与肿瘤细胞的免疫逃逸具有一定的关系，PD1更广泛地负调节免疫应答，其表达上调可增强肿瘤的免疫逃逸[11]。也有研究者认为PD1在恶性实体瘤和血液恶性肿瘤中的水平也会升高，如结肠癌、肺癌、乳腺癌等[12]。PD1是细胞表面受体亚家族的成员之一，在T淋巴细胞上进行表达，具有一定的负向调节，能抑制淋巴细胞的增殖和因子的产生，降低T淋巴细胞的分泌穿孔素和颗粒酶，停滞细胞周期。有研究者通过研究发现PD1的免疫功能可以通过酪氨酸磷脂酶2的介导抑制[13]。程序性死亡配体(PD-L1)与PD1结合对淋巴细胞有一定的抑制效果，PD-L1表达水平与T细胞的活性有直接关系，与PD1结合继而影响在肿瘤环境中的T细胞活性，发挥一定的抑制作用。PD1的信号通路对T细胞的抑制作用可以通过多种途径进行。近年来，很多研究者对于PD1在癌组织中的表达水平与临床诊断关系的研究越来越深入，PD1的表达水平在黑色素瘤组织中的TILs具有较高的水平，会对T细胞造成一定的阻碍，耗竭T细胞的效应，对肿瘤免疫具有一定的拮抗。也有文献说明[14-15]，PD1对肿瘤细胞的免疫抑制功能可以通过阻断通路实现。国外研究者指出，PD1在免疫细胞上能够表达，也能在异种移植物受体小鼠上表达，我们通过对胃癌患者进行PD1的检测，可以发现PD1在胃癌细胞中具有较高的表达情况。

在此次研究中，我们通过对胃癌患者和健康人群进行PD1水平检测，结果发现健康人群胃黏膜组织中PD1无表达，胃癌患者癌组织中PD1阳性表达率为86.7%，两者结果纳入统计标准(P<0.05)。通过数值分析，发现PD1与临床病理特征未有直接的相关性(P>0.05)。这说明PD1对胃癌具有很高的检测价值，与多重研究结果一致。但也有学者对少量的胃癌患者进行PD1水平检测，但选择样本较少，未能得到很好的结果。因此，对于PD1表达在胃癌中的更深入的临床意义还需要进一步研究探讨。

综上所述，PD1表达水平可作为胃癌组织的诊断指标，具有很高的诊断价值。