CD133及PANTR1在乳腺癌中的表达特征及其与细胞体外增殖和侵袭能力的关系

左永刚 温玉清 王 璇 马明德

乳腺癌为女性常见恶性肿瘤，临床患病率较高，且近年随着人们生活方式变化及生活压力的增加，临床发病率呈明显升高趋势，且逐渐趋于年轻化，严重威胁女性群体身心健康及生命安全[1-2]。临床针对乳腺癌的诊治措施已获得明显进步，而复发与转移仍是该病患者总生存率未得到明显提高的关键所在[3-4]。CD133为肿瘤干细胞的特征性表面标志物之一，但在肿瘤的发生发展中的机制尚未明晰[5]。PANTR1被发现参与胃癌、结直肠癌等肿瘤细胞的恶性表型的调节[6]。因此，明确CD133与PANTR1在乳腺癌组织内的表达特征与其同细胞体外增殖和侵袭能力之间的关系，对于临床及时了解乳腺癌病情严重程度、制定科学规范化治疗措施、提高患者生存率具有重要意义。基于此，本研究以380例乳腺癌患者为研究对象，探究CD133与PANTR1在乳腺癌中的表达及其临床意义。报告示下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2019年10月至2020年10月本院诊治的380例女性乳腺癌患者为研究对象。纳入标准：患者均经病理检查证实为乳腺癌；患者病历有关资料齐全；患者纳入遵照自愿原则，依从性较高，且签署知情同意书。排除标准：存在神经疾患者；合并免疫系统病症者；合并血液系统疾病者；存有精神疾患、视听障碍或难以进行正常交流者；存在全身性感染者；存有严重的脑器质性疾病者；合并严重的脑器质性疾病者。所有患者年龄31～57岁，平均年龄(40.67±4.35)岁；体重指数18.6～27.1 kg/m2，平均体重指数(23.89±0.64)kg/m2。

1.2 方法

1.2.1 标本采集与检测 于术中取所有患者的癌组织(癌组织组)与癌旁正常组织(癌旁正常组织组)，以逆转录聚合酶链式反应(PT-PCR)法检测2组的CD133与PANTR1表达，即取乳腺癌组织与各组细胞总RNA，取RNA 1 μg施以逆转录反应，设定3个重复样本，以GAPDH为内参，之后以2-ΔΔCt法计算CD133与PANTR1 RNA相对表达量。

1.2.2 细胞体外增殖能力 取相对数生长期的MCF-7细胞，以每孔5×105个密度接种在6孔细胞培养板中，并划分成对照组、CD133过表达组、PANTR1过表达组、CD133抑制组以及PANTR1抑制组，对照组予以Lipofectamine 2000转染，CD133过表达组予以Lipofectamine 2000以及CD133序列，PANTR1过表达组给予Lipofectamine 2000以及PANTR1序列，CD133抑制组予以Lipofectamine 2000以及si-CD133序列，PANTR1抑制组给予Lipofectamine 2000以及si-PANTR1序列；之后以1%FBS培养基重悬细胞，调节细胞密度为每孔3×104个，设置0、24、48、72、96 h时间点，各组设定5个重复样本，加入1/10体积CCK-8试剂，测定450 nm处的光密度值，以0 h为基值计算96 h细胞增殖倍数，以此为细胞相对增殖能力。

1.2.3 细胞侵袭能力 以1%FBS培养基重悬细胞，调整细胞密度为每孔3×104个，接种至存有Matri-gel基质胶的Transwell小室中，下室置入10%FBS培养基，24 h后固定细胞，0.1%结晶紫染色，400×光镜拍照并计数，各组选5个随机视野并予以细胞计数。

1.3 观察指标

(1)癌组织及癌旁组织中CD133与PANTR1表达情况。(2)对照组与CD133过表达组、PANTR1过表达组、CD133抑制组以及PANTR1抑制组CD133与PANTR1表达情况。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 2组CD133与PANTR1表达对比

癌组织组的CD133与PANTR1 mRNA相对表达量均高于癌旁正常组织组，有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 2组CD133与PANTR1表达对比

2.2 对照组与CD133过表达组、PANTR1过表达组MCF-7细胞生长情况对比

CD133、PANTR1过表达组MCF-7细胞增殖倍数与侵袭细胞数均高于对照组，有统计学差异(P<0.05)。见表2。

2.3 对照组与CD133抑制组以及PANTR1抑制组MCF-7细胞生长情况对比

CD133、PANTR1抑制组的MCF-7细胞增殖倍数与侵袭细胞数均低于对照组，有统计学差异(P<0.05)。见表3。

表2 对照组与CD133过表达组、PANTR1过表达组MCF-7细胞生长情况对比

表3 对照组与CD133抑制组以及PANTR1抑制组MCF-7细胞生长情况对比

3 讨论

乳腺癌为严重危害女性生命健康的常见恶性肿瘤之一，发病率及病死风险均较高[7]。尽管乳腺癌的诊断与治疗取得长足进展，然而乳腺癌细胞易于脱落，其复发、转移及死亡率未有明显的改善。相关研究表明，乳腺癌内存有具有干细胞特性的细胞，此类细胞可能是乳腺癌进展、复发的根本所在，临床应加以重视[8-9]。

肿瘤是由存在不同增殖潜能的异质细胞组合而成，此类细胞虽数目较少，但可通过移植进而产生肿瘤，故被称作肿瘤干细胞[10-11]。CD133作为肿瘤干细胞标志之一，属于Prominin家族成员，含有5次跨膜结构，分子量为120 kb，其首次发现于白血病患者中[12-13]。但临床关于CD133在乳腺癌组织内的表达尚未明晰。本研究结果显示，癌组织组的CD133[(0.023±0.002)]高于癌旁正常组织组[(0.006±0.001)]，提示在乳腺癌患者癌灶组织内CD133表达水平明显升高。CCK-8与Transwell试验检测细胞的增殖能力与侵袭能力研究结果显示，CD133过表达组细胞增殖倍数[(10.54±1.45)]与侵袭细胞数[(43.88±3.69)个]均高于对照组[(6.84±0.69)]，而CD133抑制组的细胞增殖倍数[(5.23±0.25)]与侵袭细胞数[(18.35±1.64)个]均低于对照组[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)个]，可见CD133参与乳腺癌的复发与转移，其过高表达对于乳腺癌细胞增殖、侵袭能力具有增强作用。而PANTR1基因为处在人染色体2q12上的长链非编码RNA(LncRNA)，在胃癌等不同种类的肿瘤组织内均高度表达，在多种恶性肿瘤内发挥促癌作用[14-15]。本研究结果显示，癌组织组的PANTR1 mRNA相对表达量[(0.018±0.002)]高于癌旁正常组织组[(0.005±0.001)]，表明PANTR1在乳腺癌组织内呈高表达。CCK-8与Transwell试验检测细胞的增殖能力与侵袭能力分析结果显示，PANTR1过表达组细胞增殖倍数[(10.26±1.13)]与侵袭细胞数[(45.67±4.28)个]高于对照组[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)个]，而PANTR1抑制组的细胞增殖倍数[(5.17±0.34)]与侵袭细胞数[(18.13±1.22)个]低于对照组[(6.84±0.69)、(23.25±2.15)个]，表明PANTR1与乳腺癌患者癌细胞的增殖、侵袭能力密切相关。根据上述结果，可见CD133与PANTR1在乳腺癌组织内呈异常表达状态，其高表达会增强癌细胞的增殖与侵袭能力，促使病情恶化，进而危及患者生命安全。其原因为CD133与PANTR1可通过促进乳腺癌细胞Pum1/E2F3的表达，而E2F3可通过与miR-125b与miR-432-5p等多种蛋白与RNA相互作用，进而增强癌细胞增殖与侵袭能力，影响乳腺癌的恶性行为。而Pum1则可当成E2F3的上游基因，可促使E2F3的表达。但仍需注意的是，临床现阶段对于CD133、PANTR1与Pum1蛋白的相互作用尚未完全明晰，后续还需不断完善试验设计，进一步分析CD133、PANTR1与Pum1蛋白相互作用，为CD133、PANTR1作为乳腺癌诊治的新靶点提供研究基础。

综上所述，CD133、PANTR1在乳腺癌组织内呈异常表达，且与癌细胞的增殖与侵袭能力密切相关。