三叶青的化学成分及临床应用的研究进展

柴巧莲 邹振兴 彭海霞 伍维高 王德太

（1.湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳 421005；2.衡阳伊源牧业有限公司，湖南 衡阳 421200）

三叶青，顾名思义，是一个叶柄上长着三片叶子的草本植物，属于葡萄科植物，蔓生，善攀岩[1]。三叶青喜欢阴凉的环境，多生于我国南方层林中，国外未见报道有生长，为我国独有的物种。据《本草纲目》记载，三叶崖爬藤性凉、味微甘、辛，清热解毒、活血祛风[2]。近年来，还有三叶青对于新冠肺炎有效的报道，而在中医治疗的方剂之中，三叶青就以中医药材的其中一味被纳入[3]。本文对国内外三叶青相关文献进行探讨与分析，对三叶青的主要化学成分、药理作用、临床应用进行归纳和总结。

1 三叶青的主要化学成分探讨

三叶青的药理作用取决于其所含的化学成分，文献对于三叶青化学成分的研究可见诸国内外权威媒体。研究发现三叶青含有多酚类化合物、多糖化合物、三萜及甾体类化合物等多种成分，多酚类化合物包括黄酮类和酚酸类化合物等成分[4]，轻链脂肪酸、单萜和倍半萜及含氧衍生物都是挥发油的重要成分。现在根据文献探索分述如下。

1.1 黄酮类化合物

20 世纪80 年代首次从三叶青里分离出黄酮类化合物[5]；黄酮类化合物中的茶多酚和大豆异黄酮能抑制肿瘤细胞的生长，并促进肿瘤细胞转向正常细胞转化。不同产地的三叶青黄酮类物质含量也不相同，阮明颖[6]采集中国大部分地区的三叶青，分别进行块根和茎叶黄酮类化合物成分检测，发现，总体三叶青块根黄酮类化合物含量略高于茎叶，不同地区茎叶部分总黄酮含量以浙江丽水最高、云南呈贡最低，不同地区块根总黄酮含量以广西田林最高，以云南呈贡最低。因此临床医师可以根据三叶青产地和患者病情酌情增减药量。

1.2 酚酸类化合物

酚酸类化合物也是多酚类化合物的一类。三叶青所含的酚酸类化合物通过抑制肿瘤细胞增殖、调节机体的免疫功能以及增强化疗药物的作用等途径发挥肿瘤抑制功能。Wang[7]对中国西南喀斯特山区重要食用和药用植物的生物活性化合物筛选2019、2020 年的持续研究过程中，对三叶青地上部分（APTH） 进行了可溶性环氧化物水解酶（SEH） 和一氧化氮合酶（NOS）抑制的植物化学研究。报告了APTH 中37 种成分的分离和结构鉴定，其中包括酚酸类化合物丁香酸、对水杨酸、香草酸、异香草酸等，有望成为三叶青抗肿瘤药物的研究突破口。

1.3 三萜及甾体类化合物

三萜及甾体类化合物在三叶青中含量不多，三萜类化合物中，蒲公英萜、二氢青蒿素乙醚及香树脂醇存在于地上部分，而胡萝卜苷、菜油甾醇和豆甾醇则存在于块根中；甾体类化合物中β-谷甾醇在三叶青地上部分和块根部分均可以检测，而麦角固醇则仅可以在三叶青地上部分可以检测。虽然此类物质在植物中存在很少，检测难度和提取较为不易，但是仍可以根据分子结构人工合成，或者通过扩大种养植规模、研发提纯仪器来完善。

1.4 脂肪酸和挥发油类化合物

脂肪酸和芳香酸属于三叶青的羧酸成分，芳香酸是其中容易挥发的成分[9]。三叶青脂肪酸在其石油醚萃取物中占有很大比例，有研究表明[10]，三叶青用石油醚萃取3 次后所得的16 个化合物样本中，脂肪酸样本占50%。研究表明[11]，三叶青块根中挥发油有2-葵烯等，其茎叶中挥发油成分主要为2-甲基-1-苯丙醇、二乙二醇单硬脂酸酯等。挥发油具有很好的药理作用，酯类是天然的食品添加剂，其他还有用作化妆品香料、表面活性剂等作用。

1.5 多糖化合物

多糖类也是三叶青重要的活性化合物，是三叶青糖类化合物中的一种。多糖分子量多达几万乃至几百万，是构成生命体的基本物质，对于维持生命有重要作用[12]。一项对三叶青多糖的抗氧化活性的研究表明，三叶青多糖抗氧化能力仅次于维生素C，而高于黄芪和枸杞[13]。三叶青多糖化合物具有抗氧化性、清热解毒、抗病毒、提高免疫功能等多种用途[14]。

此外三叶青还含有维生素、微量元素、氨基酸、儿茶素等多种有效成分[5]，近年来还发现新的成分，比如1-O- 反式对羟基肉桂酰基-2′-O-反式咖啡酰龙胆二糖等[15]。

2 三叶青的药理作用

三叶青对于肿瘤、肝炎都有很好的治疗作用，而且具有降血脂降血糖、去辣椒引起的上火、美容祛斑、改善腺体分泌等多种功能，现在分述如下。

2.1 三叶青的抗肝脏损伤作用

肝病在我国属于常见病和多发病，西药对肝病的治疗效果常常并不理想，肝脏疾病时，食欲不振，反酸嗳气等，此时不管是扶肝脏正，还是健脾都可以让疾病向好的方向转化，三叶青此刻就扮演着养肝护脾的功效。例如免疫性肝脏损伤是由免疫应答以及免疫应激反应引起的肝损伤。三叶青抗炎平衡免疫性肝损伤小数体内Treg/Th17 的比值，使Treg 介导的炎症抑制反应增强，使Th17 介导的炎症反应减少，使炎症抑制因素大于炎症反应因素，保护肝脏免于免疫性肝损伤[16]。三叶青抗肝脏损伤的功能，有可能还与其抗氧化功能相关。周新明[17]用护肝透毒汤加减治疗慢性乙肝，结果显示，加入三叶青的方剂治疗组治愈、好转率显著高于其他两组。认为三叶青能抗肝炎病毒、护肝，恢复肝功能，提升A/G 比值等作用。

2.2 三叶青的抗肿瘤作用

三叶青可以诱导肿瘤细胞死亡以及提高机体对肿瘤细胞的免疫力具有重要作用[18]。三叶青提取物在体内和体外均有抗肿瘤活性，三叶青黄酮类化合物能够抑制非小细胞肺癌A549 的增殖，促进其凋亡，保护脂多糖诱导的老年小鼠急性肺部损伤，黄酮类化合物还可以通过调节Wnt/β-catenin 信号系统抑制结肠癌细胞增殖[19]。这些都表明三叶青提取物在肿瘤药物的研发中存在的研究价值，有可能成为肿瘤领域的一个发展方向。

2.3 三叶青的抑菌作用

三叶青具有很好的抑菌作用，对于大肠埃希氏菌引起的肠胃炎具有治疗作用[20]。舒成等人[21]运用不同剂量的提取物对表皮葡萄球菌的抑制作用，结果显示，三叶青提取物在300 mg/L 到1200 mg/L 时，抑菌效果随着剂量的增加而增加，充分显示了三叶青提取物的抑菌效能。

2.4 三叶青的抗炎作用

三叶青对于炎症疾病具有一定的治疗效果，抗炎物质主要是黄酮类、酚酸类、多糖类成分[22]，黄酮类植物存在于很多药用植物中，具有很好的抗炎作用。研究表明[23]，在体外，以黄酮类为主的三叶青提取物通过减少一氧化氮、诱导型一氧化氮合酶和环氧合酶的含量，来阻止细胞的炎症反应。在线粒体内暴露的脂多糖也会导致氧化损伤, 以黄酮类为主的三叶青提取物减轻了线粒体损伤，减少了氧积累，恢复了谷胱甘肽水平[24]。结论认为以黄酮类为主的三叶青提取物可帮助减轻炎症引起的损伤。研究认为，三叶青抗炎作用主要体现在以下几个方面：三叶青通过调控体内炎性因子、增强增加抗炎因子而发挥抗炎作用；三叶青通过调整炎症相关蛋白来发挥抗炎作用，例如，在抗COPD 实验中，三叶青抗炎降低模拟COPD 肺部MMP-9 和TIMP-1 等炎性蛋白的表达，从而达到印制COPD 炎性症状的目的；三叶青阻断炎性通路，抑制细胞炎症反应[25]。总之，三叶青抗炎作用机制为抑制炎症因子分泌、增加抗炎因子分泌、降低细胞炎性蛋白的表达、阻断炎症通路的激活而发挥抗炎作用[26]。

2.5 三叶青的其他作用

实际上三叶青除了上述功能之外，还具备其他的一些功能，例如调节人体免疫功能等。

2.5.1 三叶青免疫调节作用

三叶青提取物具有免疫调节作用。Gai 等人[27]发现三叶青乙酸乙酯提取物在免疫性肝损伤小鼠模型中可以调节小鼠的免疫功能，且不同剂量对免疫功能调节的程度也不一样。研究表明[28]，黄酮类化合物具有重要的免疫调节作用，三叶青含有丰富的黄酮类物质，因此也具有免疫调节作用。

2.5.2 三叶青降血糖作用

植物多糖是纯天然、无毒副作用的降低血糖物质，如聚合多糖、南瓜多糖等，研究发现，三叶青多糖对模拟糖尿病小鼠具有降低血糖的作用，原因可能为三叶青多糖作用于小鼠胰岛细胞，促进行小鼠胰岛素的释放，从而使血糖浓度降低。Ru 等人[29]从三叶青藤叶中纯化出一种新的多糖（THDP-3）。在抗糖尿病实验中，表明THDP-3 在治疗机制研究中具有很大潜力。此外，研究者使用THDP-3 的降血糖活性结果表明，该化合物可以作为潜在的抗糖尿病药物。

2.5.3 三叶青降血脂作用

三叶青多糖类对降血脂有一定的作用。Ru等人[30]研究了超声波- 酶法提取三叶青多糖（THP） 的工艺条件、单糖组成及抗氧化、降血脂活性。根据FRAP 法、DPPH 法和羟自由基清除法进行的总抗氧化能力测定，THP 显示出较强的抗氧化活性，使氧化作用的丙二醛（MDA）降低，长链脂肪合成增加、短链脂肪合成减少，改善患者的血脂构成，预防高脂饮食（HFD）诱导的高脂血症。

2.5.4 抗神经、细胞毒性

三叶青不管是在体内或体外都有抗神经毒和抗细胞毒作用。Chu 等人[31]研究发现，三叶青所含的青黄酮可以改善谷氨酸诱导的神经毒性。谷氨酸又称为α- 酮戊二酸，广泛存在于谷物中，而过量食用谷氨酸钠则引起腺体分泌减少等阿托品化的不良反应，因此对于性腺也是不利的，民间曾经有动物不宜吃得过饱会影响受孕的说法。三叶青则可以抵抗谷氨酸类物质的神经毒性，改善谷氨酸过量的临床症状。糖氨基甲酸乙酯（EC） 作为广泛存在于发酵食品中的致癌物，其细胞毒性与氧化应激有关[32]。天然来源的多糖由于其抗氧化能力在过去引起了人们的极大关注。

3 三叶青临床应用研究

三叶青的药理作用使其在临床中药治疗过程中得以广泛应用。三叶青对于体内大部分器官都有作用。

3.1 三叶青治疗癌症的应用研究

三叶青黄酮类成分是其抗癌的主要成分。吕晓皑等人[33]研究三叶青软坚散结抗癌方剂治疗乳癌的临床效果，结果显示，含有三叶青方剂的抗癌药在治疗完全缓解率明显较对照组好。魏克民等人[34]给120 例恶性肿瘤患者服用含三叶青提取物的药片金芪片90 天，结果显示总有效率78.33%，提示三叶青对于恶性肿瘤的治疗作用得到了临床验证。

3.2 三叶青治疗急性支气管炎的临床研究

刘璐等人[35]用麻杏石甘汤加减治疗小儿急性支气管肺炎，麻杏石甘汤剂中加入三叶青，结果显示治疗效果较好，提示三叶青对于急性支气管肺炎的治疗有效性。

3.3 三叶青其他临床应用研究

在2019 年末爆发的新型冠状病毒肺炎给整个人类带来了巨大的灾难，给人类的生命安全带来巨大影响，有人提出可以利用中西医结合治疗方式来进行治疗，后来何钦等[36]治疗2019 年末初发的新冠肺炎，采用中西医结合的方式治疗取得了一定的效果，其中中药方剂中的三叶青中药功能为清热解毒，作为治疗新冠肺炎中药的一剂重要药材使用，对于当时治疗人类疾病起到了可见的作用。三叶青还被用于治疗常见的妇科疾病[37]、治疗小儿外感发热[38]、还可以抗精神病的焦虑、抑郁等症状等。

4 三叶青毒性实验研究

由于三叶青可以治疗多种疾病，乃至癌症，被民间称作“药王”。俗话说，是药三分毒，三叶青也不例外，三叶青的活性成分是生物碱等，而过多食用也会造成对机体的毒性作用。在临床应用时常常先在动物体内做实验，然后在人体做实验。动物实验表明[39]，三叶青的地上部分提取物（THAA） 及三叶青粗提物灌胃给药最大耐受剂量分别是日用量的360 倍和321.6 倍，表明三叶青治疗量较为安全。三叶青藤叶配方颗粒的小鼠急性毒性实验则表明[40]，小鼠灌胃给药最大耐受剂量是日常治疗剂量的121.6 倍。动物实验表明，虽然三叶青有较好的治疗作用，但是需要注意其毒副作用，需要在医师指导下使用。

5 结语与展望

三叶青作为传统的药物资源，从古至今都发挥着巨大作用。三叶青具有免疫调节、抗癌等功用，还具有抗肝损伤、抗氧化、降低血糖和降低血脂的功效。临床上被用作多种疾病的主要用药和辅助用药，并取得了较好效果。近年来，随着新冠肺炎疫情的反复，价格昂贵的三叶青引起了人们的高度重视，对于三叶青黄酮类化合物、酚酸类化合物、多糖类化合物的研究也见诸媒体。三叶青所起到的作用是有限的，而且多数三叶青是野生的，种养难度也很高。需要去采摘，我们相信未来通过对三叶青的不断深入研究，一定能够将三叶青从野生变为人工种养，以及先进的加工提纯方法，或者可以合成效果类似的物质，让三叶青更好造福人类。