高级别脑胶质瘤中GFAP、p53、Ki67的表达水平及临床意义

程钰，李永来，黄璐

安康市中心医院病理科，陕西 安康 725000

脑胶质瘤又被称为脑干肿瘤，在颅内肿瘤中占比37%～52%，通常是神经胶质瘤，其中，较为多见的是极性成胶质细胞瘤与星形细胞瘤[1]。脑胶质瘤中，恶性超过75%，恶性脑胶质瘤又称高级别胶质瘤。依据相关文献显示，高级别脑胶质瘤好发于中年及青少年，且多数为男性[2]。血清指标检测因为其重复性高、客观、简便等优点，在肿瘤疾病诊治方面得到广泛关注。胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein，GFAP)属于胶质肿瘤的一种标志蛋白，它能够在细胞分裂、增殖及血-脑脊液屏障维护等方面发挥作用，往往被应用于明确颅内胶质肿瘤的来源[3]。p53蛋白是由于p53基因突变而产生的，属于肿瘤促进生长因子之一，可以对p53基因的作用进行抑制，同时，p53基因出现突变，使细胞增殖失控，进而引发癌变[4]。然而相关文献显示，p53蛋白于胶质瘤内的阳性表达率约为50%，于低级别胶质瘤内阳性表达率更低[5]。Ki67属于一种细胞增殖标志物，在细胞核中存在，且同细胞周期息息相关，广泛应用于临床。目前有文献显示，伴随脑胶质瘤级别的增加，Ki67的表达也不断增加[6]。本研究主要探讨高级别脑胶质瘤中GFAP、p53、Ki67的表达水平及临床意义，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料回顾性分析2019年1月至2021年12月在安康市中心医院诊治的126例脑胶质瘤患者的临床资料。纳入标准：(1)通过影像学、病理学等诊断为脑胶质瘤；(2)同世界卫生组织(WHO)公布的公布的枢神经系统胶质瘤病理分级标准相符[7]；(3)临床资料完整；(4)未接受放、化疗等干预。排除标准：(1)心、肾、肺、肝功能障碍；(2)其他脑类疾病；(3)严重感染者。其中男性62例，女性64例；年龄34～76岁，平均(50.25±8.36)岁；肿瘤直径1～8 cm，平均(5.96±0.52)cm。按照世界卫生组织(WHO)中肿瘤病理分级标准，分为高级别组(Ⅲ～Ⅳ级脑胶质瘤)70例与低级别组(Ⅰ～Ⅱ级脑胶质瘤)56例。

1.2 检测方法将所有研究对象的脑组织用中性甲醛10%固定之后，用石蜡包埋，并切片4 μm，之后实施免疫组化染色，期间选择上海亿新生物科技有限公司生产的GFAP、p53、Ki67单克隆抗体(鼠抗人)、磷酸缓冲盐溶液缓冲液、DAB显色剂，严格依据试剂盒说明书操作。依据免疫组化染色评分判断结果[8]：(1)阳性细胞计数，随机挑选5个400倍视野，对阳性细胞数进行观察，之中0～5%记0分，6%～25%记1分，26%～50%记2分，51%～75%记3分，超过75%记4分；(2)染色强度，对胞质颜色进行观察，颜色为棕黄、淡黄、棕褐色记阳性细胞，其中无着色记0分、淡黄色记1分、棕黄色记2分、棕褐色3分。最终评分为阳性细胞计数评分同染色强度评分的乘积，阳性为≥2分，阴性为＜2分。

1.3 统计学方法应用SPSS20.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，比较采用t检验，计数资料比较采用χ2检验；采用Spearman相关性分析GFAP、p53、Ki67阳性表达率与病理分级的相关性。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者的GFAP、p53、Ki67阳性表达率比较高级别组患者的GFAP阳性表达率明显低于低级别组，p53、Ki67阳性表达率明显高于低级别组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组患者的GFAP、p53、Ki67阳性表达率比较[例(%)]

2.2 不同病理特征患者的GFAP、p53、Ki67阳性表达率比较不同性别、年龄、肿瘤原发位置及肿瘤大小患者的GFAP、p53、Ki67阳性表达率比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表2。

表2 不同病理特征患者的GFAP、p53、Ki67阳性表达率比较[例(%)]

2.3 GFAP、p53、Ki67阳性表达率与病理分级的相关性经Spearman相关分析结果显示，GFAP阳性表达率与病理分级呈负相关(r=-0.663，P=0.001)，p53、Ki67阳性表达率与病理分级呈正相关(r=0.732、0.441，P=0.001、0.001)。

2.4 典型病例患者女性，55岁，反复头晕半年来院。头颅CT提示：右侧丘脑、基底节区及右侧顶、枕、颞叶改变，考虑肿瘤性病变。建议MRI平扫+增强检查。查颅脑磁共振平扫+增强+DWI+MRS：右侧顶、枕、颞叶、右侧海马区、胼胝体压部占位，考虑肿瘤性病变，高级别胶质瘤可能(枕叶病灶边缘弥散稍受限)，脑疝形成。给予安排急诊手术。病理大体肉眼所见：灰白灰红脑样碎组织一堆，总体积7.0 cm×5.0 cm×2.0 cm。病理回报：“颅内肿瘤”高级别胶质瘤，形态学结合免疫组化考虑胶质母细胞瘤(WHOⅣ级)，IDH-1阴性，见图1～9(SP法)。

图1 肿瘤HE切片(10×)

图2 出现血管增生(10×)

图3 坏死(10×)

图4 肿瘤细胞密度增大(10×)

图5 细胞核出现异型性(10×)

图6 免疫组化GFAP：膜浆阳性(10×)

图7 免疫组化Olig2：核阳性(10×)

图8 免疫组化p53：核阳性(10×)

图9 Ki67高表达，增殖指数高(10×)

3 讨论

脑胶质瘤起病慢，病情逐渐加重，具有复杂性与多样性，轻症者呈现出头痛、头晕等症状，重症者则可能产生发作性昏迷、红核震颤等，且胶质瘤患者往往在就诊时恶性程度就较高，所以及时诊断非常重要。相关文献显示，细胞周期调控同肿瘤进展息息相关，抑癌基因、癌基因丧失调控细胞周期的作用后，会较大幅度地提升细胞癌变概率[9]。近几年，伴随研究的逐渐深入，发现诸多基因于互相作用下能加快肿瘤的发展。

GFAP属于损坏星形胶质细胞后产生的标志物之一，具有特异性，能够判断中枢神经系统出现的肿瘤细胞来源[10]。于缺血状况下，成熟星形细胞被刺激后后就能产生GFAP，所以，GFAP能够对脑细胞缺血状况进行判断，同时也能作为此类型脑胶质瘤的评价指标[11]。本次研究表明，高级别脑胶质瘤患者的GFAP阳性表达率明显低于低级别脑胶质瘤患者，差异有统计学意义(P＜0.05)，说明恶性程度较高的肿瘤细胞使GFAP的分泌及释放受到了抑制。相关文献显示，脑胶质瘤细胞中GFAP的表达同恶性程度为负相关关系，高恶性程度的肿瘤细胞切片后几乎没有GFAP表达[12]。这同本次研究相符。所以，GFAP能够鉴别脑胶质瘤的级别。

人体中p53基因分为突变型、野生型两种，p53野生型基因属于抑癌基因之一，于调节细胞周期、细胞凋亡期间作用显著[13]。外界诸多因素干扰下，DNA不能对损伤进行修复，p53野生型基因会在较短时间内使细胞出现凋亡，抑制潜在癌变细胞的发育与生长，进而体现它在人体内的抑癌价值[14]。然而，p53野生型基因于人体内会由于诸多原因导致突变，进而丧失抑癌功能，p53突变之后不能对癌细胞增殖进行抑制，进而产生肿瘤。此外，相关研究表明，p53蛋白产生于p53突变基因，同ras/cmyc癌基因等诱导细胞癌变，加快肿瘤发生的速度[15]。本次研究中，p53于高级别脑胶质瘤患者中的阳性表达率为82.86%，明显高于低级别脑胶质瘤患者的39.29%，差异均有统计学意义(P＜0.05)，说明p53能够鉴别脑胶质瘤的级别，同时经Spearman相关分析显示，p53阳性表达率同病理分级为正相关关系。

Ki-67在增殖细胞内的核抗原中存在，它的免疫反应同细胞周期有一定相关性，是当前应用最广泛的一种指标，同时在肿瘤细胞增殖活性检测中也比较可靠[16]。Ki-67能够反映肿瘤细胞生长的活跃程度，换句话说就是Ki-67水平越高，恶性程度越高，肿瘤细胞生长越活跃[17]。本研究显示，p53于高级别脑胶质瘤患者中的阳性表达率为81.43%，明显高于低级别脑胶质瘤患者的33.93%，说明Ki-67可以反映脑胶质瘤的恶性程度，同时经Spearman相关分析显示，Ki-67阳性表达率同病理分级为正相关关系。这同黄卓彦等[18]的研究相符。

综上所述，GFAP于高级别脑胶质瘤中的阳性表达率较低，且同病理分级呈负相关关系，p53、Ki67于高级别脑胶质瘤中的阳性表达率较高，同病理分级呈正相关关系。