乳酸左氧氟沙星中乳酸的鉴别和含量测定

2022-12-17鄢雷娜陈伟康

化学工程师 2022年11期

陈希，鄢雷娜，章红，陈伟康

（江西省药品检验检测研究院国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西南昌 330029）

目前，乳酸的测定方法主要有化学鉴别[1]、离子色谱法（IC法）、气相色谱法（GC）和高效液相色谱法（HPLC法）。乳酸左氧氟沙星标准采用化学反应方法鉴别乳酸（采用溴试液氧化乳酸产生乙醛，乙醛与亚硫酸铁氰化钾反应形成暗绿色环判断为阳性反应），该鉴别方法专属性不强[1]，有必要建立专属性更强的测定方法。IC法专属性虽然较好，但样品一般需要蒸馏或固相净化小柱等净化步骤以除去有机杂质，前处理步骤多耗时多[2-4]。GC法更需要将乳酸衍生化处理成挥发性的化合物，衍生试剂毒性大且前处理过程复杂繁琐[5-7]。HPLC法无需前处理即可测定乳酸，但由于乳酸极性较大，在普通C18色谱柱中保留时间极短，存在与其他有机酸较难区分的问题[8-10]。本研究采用有机酸专用色谱柱（月旭UltimateOAA 4.6×300mm）实现了乳酸等8种有机酸的分离测定。

1 实验部分

1.1 仪器及试剂

LC-20AD型高效液相色谱仪（日本岛津公司）；MS205DU型电子天平（瑞士METTLER TOLEDO公司）。

左氧氟沙星对照品（含量：97.3%批号：130455-201607中国食品药品检定研究院）；L-乳酸锂对照品（L-乳酸含量89.1%批号：MKCK3402厂家：ALDRICH）；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

1.2 样品

乳酸左氧氟沙星原料（生产企业1：浙江医药股份有限公司新昌制药厂，批号：2190225-190901；生产企业2：上虞京新药业有限公司，批号：DK24-1904 281-VI；生产企业3：江西大地制药有限责任公司，批号：190105-2）。

1.3 色谱条件

流动相A 0.01mol·L-1KH2PO4（用H3PO4调节pH值至2.5）；

流动相B 甲醇，梯度洗脱，梯度表详见表1。

表1 梯度洗脱表Tab.1 Gradient elution table

流速：1.0mL·min-1；色谱柱：月旭UltimateOAA（4.6×300mm）；柱温30℃；进样量10μL；检测波长210nm。

1.4 溶液配制

乳酸储备溶液称取L-乳酸锂对照品0.5558g，置于50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为乳酸储备溶液（含乳酸约10mg·mL-1）。

系统适用性溶液称取草酸、酒石酸、甲酸、抗坏血酸、HAc、柠檬酸和琥珀酸7种有机酸各适量，分别置50mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，制成含7种有机酸各约10mg·mL-1的储备溶液。分别取上述7种有机酸及乳酸储备溶液各适量，置10mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，制成含草酸、酒石酸、甲酸、抗坏血酸、乳酸、醋酸、柠檬酸和琥珀酸分别约为50、1000、1000、50、1000、1000、1000和1000μg·mL-1的溶液作为系统适用性溶液。

乳酸标准系列溶液分别移取乳酸储备溶液适量，加水制成含乳酸约为50、100、250、500、750和1000μg·mL-1的溶液。

供试品溶液称取乳酸左氧氟沙星原料约0.29g，置于100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀（含乳酸约500μg·mL-1，左氧氟沙星约2mg·mL-1）。

左氧氟沙星溶液称取左氧氟沙星对照品约20mg，置于10mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

2 结果与讨论

2.1 系统适用性试验

取系统适用性溶液，按照“1.3色谱条件”测定，结果各组分按草酸、酒石酸、甲酸、抗坏血酸、乳酸、HAc、柠檬酸和琥珀酸的顺序依次出峰，各组分的分离度均大于1.5，抗坏血酸峰和乳酸峰之间分离度为3.5，乳酸峰和HAc峰之间分离度为1.8，色图谱详见图1。

图1 系统适用性色谱图Fig.1 System suitability chromatogram

2.2 专属性试验

分别取水、左氧氟沙星溶液、乳酸溶液（含乳酸约500μg·mL-1）和供试品溶液，按照“1.3色谱条件”测定。乳酸保留时间约5.9min，左氧氟沙星保留时间约17min，且水、左氧氟沙星溶液在乳酸保留时间均无色谱峰，即不干扰乳酸测定，可以采用保留时间定性方法鉴别乳酸左氧氟沙星中的乳酸。专属性图谱详见图2。

图2 专属性色谱图Fig.2 Specific chromatogram

2.3 方法学考察

2.3.1 线性关系考察取乳酸标准系列溶液分别按“1.3色谱条件”测定。以乳酸峰面积为纵坐标（y），以乳酸浓度（x）为横坐标进行线性回归，回归方程为：Y＝492.490X－544.844，r2＝0.9999；表明乳酸浓度在50～1000μg·mL-1之间与峰面积呈良好线性关系。

2.3.2 精密度取乳酸溶液（含乳酸约500μg·mL-1），按“1.3色谱条件”测定6次。计算乳酸峰面积和保留时间的RSD，分别为0.07%和0.03%，表明本方法精密度良好，结果见表2。

表2 精密度测定结果Tab.2 Results of precision

2.3.3 重复性精密称取乳酸左氧氟沙星原料（生产企业：浙江医药股份有限公司新昌制药厂）约0.29g，置于100mL量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀（6份）。按“1.3色谱条件”测定。用回归方程计算样品中乳酸的含量，平均含量为17.3%，RSD为1.1%，乳酸保留时间RSD为0.02%，结果见表3。说明本方法重复性良好。

表3 重复性测定结果Tab.3 Results of repeatability

2.3.4 定量限与检出限取乳酸溶液（含乳酸约500μg·mL-1）适量，用水稀释成浓度约为1.0μg·mL-1和0.3μg·mL-1的乳酸溶液。分别按“1.3色谱条件”测定，结果乳酸浓度为1.0和0.3μg·mL-1时，信噪比分别大于10和3。

本方法乳酸的定量限与检出限可以定为1.0μg·mL-1和0.3μg·mL-1。

2.3.5 准确度精密称取乳酸左氧氟沙星原料（生产企业：浙江医药股份有限公司新昌制药厂）约0.14g，置于100mL量瓶中（9份），分别加浓度约为10mg·mL-1的乳酸储备溶液1.5、2.5和3.5mL（每个浓度3份），再分别加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别按“1.3色谱条件”测定，计算回收样中的乳酸浓度和回收率。

结果乳酸回收率为99.80%～101.55%，平均回收率为100.6%，回收率RSD为0.6%，说明本方法准确度良好，结果见表4。