医用自交联透明质酸钠凝胶对肠吻合和切口愈合的影响

韦 进, 许心怡, 谢欣怡, 杨海帆, 程 宏

(1. 江苏省连云港市红十字中心血站, 江苏 连云港, 222000;2. 扬州大学医学院/江苏省非编码RNA基础与临床转化重点实验室/扬州大学转化医学研究院, 江苏 扬州, 225000)

腹部手术可能引发腹膜粘连，而抵抗外源性刺激是机体的一种自我保护功能，可将腹部炎症程度控制在一定范围内[1-2], 还可增加缺血组织的血供，促进创伤部位愈合[3-4]。但术后腹腔粘连可对机体造成很大损害，并对患者的治疗产生不利影响，已经成为相关研究[5-6]关注的焦点。随着肠吻合技术在外科手术中的广泛应用，探寻具有抗肠吻合口粘连作用的医用制剂变得尤为重要。医用自交联透明质酸钠凝胶作为一种新型医用制剂，可降低盆腔手术后腹膜与黏液粘连或腹部手术后子宫与近端组织粘连的发生率和严重程度[7-8]。本研究探讨医用自交联透明质酸钠凝胶对大鼠术后肠吻合口愈合和腹壁切口愈合的影响，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物与材料

本研究实验方案和操作规程经扬州大学医学院实验动物伦理委员会审核批准。成年健康雄性SD大鼠[上海超百加实验动物有限公司，许可证编号2008-0016(上海)SCXK, 通行证号码2008001624632]76只，体质量250～300 g, 常规条件饲养。选取64只大鼠建立结肠吻合口模型，随机分为实验组和对照组，每组32只，其余12只大鼠纳入非手术组。实验组、对照组、未手术组SD大鼠体质量分别为(259.69±5.88)、(259.44±7.07)、(260.50±7.34) g, 差异无统计学意义(P>0.05)。医用自交联透明质酸钠凝胶(HyaRegen Gel)购自常州百瑞吉生物医药有限公司，其余常规试剂购自扬州必帮生物技术有限公司。

1.2 实验方法

参照文献[9-10]中的方法建立大鼠结肠吻合口模型，手术均由同一人完成，手术过程见图1。实验组、对照组大鼠术前12 h禁食水; 采用3%戊巴比妥钠(30 mg/kg)肌肉注射麻醉后，仰卧位固定; 取腹壁正中切口打开腹腔，于乙状结肠腹膜反折处近端3 cm处水平切断结肠，以6-0无创缝线单层端-端吻合肠管; 实验组用1 mL医用自交联透明质酸钠凝胶涂敷于大鼠结肠吻合口部位，包括吻合口远近端1 cm处，对照组大鼠吻合口不做任何处理; 以3-0可吸收缝线缝合腹膜和肌层，以1号缝线缝合皮肤; 术毕外用抗生素软膏涂抹切口，待大鼠清醒后分笼饲养，每笼2～3只。术后禁食水10 h, 连续 3 d肌肉注射庆大霉素(4 U/d)预防感染; 以标准饲料喂养大鼠，环境温度和湿度分别保持于18～22 ℃和(60±20)%; 术后7、14 d, 2组分别处死6～8只大鼠进行观察[11-13]。

1.3 观察指标

1.3.1 存活率: 观察实验组、对照组大鼠术后是否存活至实验完成(若死亡需记录死亡原因)，计算存活率。

1.3.2 腹壁切口和腹膜/肌层愈合情况: 术后7、14 d, 分别检查实验组、对照组大鼠腹壁切口表面皮肤愈合情况和腹膜/肌层愈合情况，检查过程见图2。参照外科手术切口愈合标准判定愈合情况，分为一期愈合(手术切口无感染，按预期愈合)、二期愈合(创面缺损大，常伴有感染)和痂下愈合(切口化脓感染，被痂皮覆盖)。

1.3.3 肠吻合口愈合情况: 以结肠吻合口为中点，于远近端各2 cm处切断结肠，避免损伤粘连的肠壁; 用生理盐水清洗去除肠管内容物; 取1个三通管，一头与血压计相连，一头与血压计气泵相连，另一头与切取的结肠近端相连(结肠远端用3-0丝线结扎); 将结肠完全浸入装有生理盐水的容器中，打开三通管的所有阀门，用气泵以均匀的速度逐渐加压; 当浸入生理盐水中的结肠吻合口产生第 1个气泡时，血压计上显示的汞柱刻度即为吻合口抗张强度[11-13]。大鼠结肠抗张强度检测过程见图3。另取未手术组6只大鼠，于对照组和实验组大鼠结肠吻合处相同部位切取正常结肠，按上述方法测定正常结肠抗张强度，作为正常对照。

1.4 统计学分析

2 结 果

2.1 大鼠存活率

2组大鼠术后生命体征平稳，自主活动能力稍恢复，每天观察大鼠2次, 2组大鼠均未出现死亡及感染情况，存活率为100.00%。

2.2 腹壁切口及腹膜/肌层愈合情况

术后7、14 d, 实验组大鼠腹壁切口表面皮肤的愈合情况和腹膜/肌层愈合情况与对照组比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1 术后7、14 d大鼠腹壁切口及腹膜/肌层愈合情况[n(%)]

2.3 肠吻合口愈合情况

对照组、实验组大鼠术后7、14 d的肠吻合口抗张强度均低于未手术组大鼠正常结肠抗张强度，差异有统计学意义(P<0.05); 术后7、14 d, 涂敷医用自交联透明质酸钠凝胶的实验组大鼠肠吻合口抗张强度均高于未涂敷的对照组大鼠，差异有统计学意义(P<0.05)。见图4。

3 讨 论

本研究发现，术后7、14 d时，涂敷医用自交联透明质酸钠凝胶的实验组大鼠结肠吻合口抗张强度高于未涂敷的对照组大鼠，但低于未手术组大鼠的结肠抗张强度，差异有统计学意义(P<0.05)。由此提示，医用自交联透明质酸钠凝胶材料的使用有助于提高大鼠术后肠吻合口的抗张强度。本研究还发现，实验组和对照组大鼠的成活率均为100.00%, 无死亡和感染情况发生，且2组大鼠术后7、14 d时腹壁切口表面皮肤愈合情况和腹膜/肌层愈合情况相近。

在确保疗效的前提下，药物制剂还应具有毒副作用小的特点。本研究发现，医用自交联透明质酸钠凝胶作为一种药物制剂具有良好的有效性和安全性，有利于增加大鼠结肠吻合口的拉伸强度，对大鼠无毒性，未引起或加重感染，亦未影响腹壁切口和腹膜/肌层的愈合，建议进一步开展临床研究。

目前，在临床研究中被用于防止粘连的材料主要为高分子量自交联透明质酸钠，具有亲水性好、免疫原性低等优点[14]。与传统透明质酸不能快速降解、长期防粘连效果不理想的特点不同，医用自交联透明质酸钠凝胶不仅亲水性好、免疫原性低，而且可长期存在并发挥作用[11，15-17]。有研究[15]认为，透明质酸钠大分子网络结构可以结合大量的水形成物理屏障，从而调节细胞功能。本研究推测，医用自交联透明质酸钠凝胶或许也通过该途径促进肠吻合，但确切的分子机制有待进一步研究。

综上所述，医用自交联透明质酸钠凝胶可显著提高大鼠结肠吻合口的抗张强度，且不影响腹壁切口和腹膜/肌层愈合。但本研究存在一定局限性，一是样本数量较小，二是从动物实验到临床应用还需更多的实践加以推动，未来的研究需进一步深入评估医用自交联透明质酸钠凝胶的安全有效性。