超微粉山楂消脂胶囊的制备方案研究

杜建华 徐海燕 罗德祥

528000广东省佛山市中医院，广东佛山

山楂消脂胶囊是广东省佛山市中医院常用的经验方，由山楂与大黄两味中药组成，有降脂、清热凉血、除积滞等作用，效果好、不良反应少、服用方便，能有效改善高脂饮食引起的肥胖和脂代谢紊乱，受到广大患者及医师的青睐[1]。既往中药胶囊以全粉药材为主，但空心胶囊囊号固定，全粉药材装入量少，加之内容物为细粉，粒径小、流动性差，导致载入量存在差异[2]。超微粉碎技术是近年迅速发展起来的一项高新技术，也是粉体工程中的一项重要内容，包括对粉体原料的超微粉碎、高精度分级和表面活性改变等，随着超微粉碎技术的发展，对药材原料进行细胞级粉碎技术，可提高药材细胞内容物的溶出率，节省药材，提高药物生物利用度及中药制剂质量[3]。目前，对山楂消脂胶囊进行超微粉碎工艺制备是否会影响胶囊药代动力学参数成为研究重点，本研究对超微粉山楂消脂胶囊和细粉山楂消脂胶囊的生物利用度进行比较，为超微粉碎技术的应用提供参考。

资料与方法

实验动物：16 只健康雄性SD 大鼠，无特定病原体SPF级，体重210～280 g(广东医科大学实验动物中心提供)；基础饲料，正常饮食、饮水，单笼饲养，饲养1周。

试剂与仪器：山楂消脂胶囊(佛山市中医院院内制剂，批准文号：0432002)；大黄酸(中国药品生物制品检定所提供)、色谱纯、蒸馏水；Waters empower 1525/2996 高效液相色谱仪、TGL-15M 台式微量高速冷冻离心机(湖南平凡科技有限公司)、电子天平(上海玉研科学仪器有限公司)、粉碎机(FC160F型，上海坤麟制药机械有限公司)、贝利微粉机(BFM-6BI 型，济南倍力粉技术工程有限公司)。

方法：①山楂消脂混悬液制备：取山楂、大黄各10 g，打成粗粒，然后分成2 份，一份经粉碎机粉碎后形成100目粒径的细粉，另一份经贝利微粉机粉碎后得到200目粒径细粉。用电子天平秤获取超微粉2.5 g、细粉2.5 g，分别置入容量瓶内，添加超纯水超声溶解、定容，获取山楂消脂混悬液溶液，浓度0.05 g/mL。②对照品溶液制备：大黄素1.6 g，用甲醇溶解、定容，浓度160 μg/mL。经倍数稀释，配制0.24 μg/mL、0.48 μg/mL、0.96 μg/mL、24.0 μg/mL、36.0 μg/mL、48.0 μg/mL、60.0 μg/mL的对照品溶液。③动物给药：16 只大鼠随机分为超微粉组和细粉组，各8只。进行研究前12 h禁食。超微粉组给予超微粉混悬液0.5 g/kg；细粉组给予细粉混悬液0.5 g/kg。在给药5 min、15 min、30 min、45 min、1 h、2 h、4 h、6 h、9 h、12 h、24 h后分别提取眼眶血0.5 mL，加入肝素管内，用微量高速冷冻离心机离心8 min，4 000 r/min，留取上层血清0.2 mL，测定大黄素浓度。

观察指标及检测方法：①血浆样品：上层血清样本加入0.1 mol/mL 盐酸0.05 mL 酸化，添加乙酸乙酯1.5 mL，混合振荡10 min，再离心8 min，8 000 r/min，沉淀蛋白，吸取乙酸乙酯层液体1.0 mL 吹干。于离心后残渣中添加甲醇0.1 mL，涡旋振荡，离心10 min，12 000 r/min，留取上清液0.07 mL，采用高效液相色谱分析法检测。②色谱条件：检测波长为254 nm，流速为1.0 mL/min，柱温为室温，大黄酸出峰时间约为7 min。将大黄酸对照品溶液置入离心管内，添加大鼠空白血浆0.1 mL，分别配制浓度为0.16 μg/mL、0.32 μg/mL、0.64 μg/mL、16.0 μg/mL、24.0 μg/mL、32.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的大黄酸血浆样本，采用高效液相色谱分析法检测大黄酸峰面积，仪器为高效液相色谱仪，计算血药浓度。将不同时间点的采样经PKSolver 2.0 程序药代动力学模拟处理，计算药代动力学参数，包括末端消除半衰期(t1/2)、达峰时间(Tmax)、清除率(CL)、药峰浓度(Cmax)、药时曲线下面积(AUC)。

统计学方法：数据应用SPSS 22.0 软件分析；计量资料以()表示，采用t检验；P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

大黄酸对照品溶液血浆样品精密度：将大黄酸对照品溶液按0.16 μg/mL、16.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的血浆浓度，每个浓度平行测6 份，在1 d 内测定6 次，测得3 种不同浓度血浆样品的精密度分别为2.18%、6.35%、6.40%。见表1。

表1 大黄酸对照品溶液血浆样品精密度

血浆样品回收率：于空白血浆0.1 mL 加入大黄酸对照品溶液0.2 mL，取0.16 μg/mL、16.0 μg/mL、40.0 μg/mL 的大黄酸浓度溶液0.2 mL，每个浓度平行测5 份，测定的大黄酸峰面积为S，另取浓度为0.24 g/mL、24.00 g/mL、40.00 g/mL 的大黄酸对照品溶液0.2 mL，加入0.1 mL 甲醇，测定的大黄酸峰面积为A，回收率=S/A×100%，计算得到其平均提取回收率为86.80%，＞85%符合药物动力学研究要求。见表2。

表2 血浆样品回收率

两组药动学参数比较：超微粉组t1/2短于对照组，Tmax、Cmax、AUC 高于细粉组，CL 低于细粉组，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表3。

表3 两组药代动学参数比较()

表3 两组药代动学参数比较()

讨论

近年来，超微粉碎技术在中药领域中的应用日益广泛，以超微粉替代普通细粉，可提高中药胶囊的药效，节省药材；同时制备成超微粉颗粒，可提高超微粉流动性，增加胶囊内的药量，从而提高中药制剂的质量[4]。山楂消脂胶囊常用于肥胖、高血脂、脑卒中等疾病的治疗，治效显著，得到医师及患者的认可[5-6]。医院在制备山楂消脂胶囊时，通常将中药材粉碎成细粉，过筛，混匀后装入胶囊。但基于细粉状的缺陷，比如药物装载量有限、粒径小、流动性差，容易导致胶囊装载量存在差异。因此对山楂消脂胶囊应用超微粉碎技术，以期提高药物细胞内容物溶出率，但是否会影响山楂消脂胶囊的生物利用度，需进行进一步研究。

本组研究对山楂消脂胶囊采用超微粉碎技术，将超微粉替代原来的普通细粉，同时采用高效液相色谱分析法检测超微粉的药物动力学参数，以大黄酸为对照，对大黄酸对照品试验溶液进行精密度与回收率实验，结果显示血浆样品精密度较高，提取回收率＞83.0%，药物浓度符合药物代谢动力学研究要求，表明经超微粉碎技术制备的山楂消脂胶囊，并不会影响药物浓度。本研究大鼠经超微粉与细粉山楂消脂胶囊混悬液灌服后，超微粉组t1/2短于对照组，Tmax、Cmax、AUC 均高于细粉组，CL 低于细粉组，差异有统计学意义(P＜0.05)。说明与细粉山楂消脂胶囊比较，超微粉山楂消脂胶囊的药物动力学参数均明显提高，体内有效成分大黄酸的利用度明显提高，而且吸收速度快，药效持久，间接肯定了超微粉碎工艺制备的优势。分析原因可能是山楂消脂胶囊进行超微粉碎技术工艺处理后，药粉细密，药物细胞破壁率升高，能扩大药物表面积，提高药物吸收量及吸收速度。超微粉技术既涵盖了现代物理技术，也包括了化学技术，未来发展潜力巨大。近年来，超微粉技术逐渐应用于中药的生产中，不仅能保持中药的药效，还能提高中药的生物利用度，节约资源。本次实验中，超微粉碎使大黄酸在大鼠体内的吸收更加完全[7]；经超微粉碎技术工艺处理后，大黄内的有效成分大黄酸溶出度明显增加，药物消除t1/2短，再次证实体内山楂消脂胶囊的吸收迅速，消除速度加快。此外，采用用超微粉替代普通细粉，可增强胶囊药效，增加胶囊内药物装载量，提高药物品质，改善药物动力学，制备效果好。利用超微粉碎技术可以提高山楂的溶解性、稳定性及山楂消脂胶囊的消化吸收性[8-9]。

综上所述，通过超微粉碎工艺制备山楂消脂胶囊，可促使大鼠体内大黄素吸收，药物吸收迅速、吸收量提高，生物利用度高，在节省药物资源的同时不会影响药物浓度及作用，制备效果好，可为超微粉碎工艺改革提供理论支持，为临床有效、安全用药提供参考。