高效液相色谱法测定油性抑菌产品中三氯生含量

2022-11-24张学清

生物化工 2022年5期

张学清

（江西康美医药保健品有限公司，江西樟树 331200）

三氯生，化学名为二氯苯氧氯酚，对真菌、酵母及革兰氏阳性菌等都有杀灭及抑制作用[1]。相比传统的杀菌和抑菌剂，三氯生具有优越的配伍性，是目前广泛用于个人护理用品的高效、新型消毒剂，如抑菌产品。为了更安全地使用抑菌产品，《化妆品卫生规范》对三氯生在相关产品中允许的使用浓度有明确规定。

抑菌产品中三氯生的定量检测主要采用仪器检测法[2]。由于受产品中其他原辅料的影响，分光光度法检测抑菌液中三氯生含量的方法准确度较低。高效液相色谱法具有方便、快速、简单等优势，已报道的检测方法缺少对油性抑菌产品的针对性说明，尽管有采用离心、萃取的方法对样品进行前处理的报道，但对设备和操作的要求较高，其准确性和重复性也存在问题[3]。

为了找到一种可以同时检测常规抑菌产品和油性产品中三氯生的高效液相色谱检测方法，本文对提取溶剂、色谱条件等进行了优化。

1 材料与方法

1.1 仪器

Essentia LC-16型高效液相色谱仪，日本岛津公司；KQ-100DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；FA1104N型电子天平，上海科晓科学仪器有限公司；UV-2450型紫外分光光度计，日本岛津公司；ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），美国安捷伦公司。

1.2 试剂

四氢呋喃，分析级，西陇化工股份有限公司；乙腈，色谱级，福州奥研实验器材有限责任公司；纯化水，符合《分析实验室用水规格和试验方法》（GB/T 6682—2008）的二级水[4]；三氯生对照品，以C12H7Cl3O2计，含量为100.0%，中国食品药品检定研究院。

1.3 方法

1.3.1 色谱条件

流动相为75%的乙腈水溶液，检测波长为281 nm，柱温为35 ℃，流速为1 mL/min，进样量为10 μL。

1.3.2 标准工作曲线

以四氢呋喃为溶剂，精确（精确至0.1mg）称量适量的三氯生对照品，溶解配制成1 mg/mL的标准溶液。以1 mg/mL的三氯生标准溶液为原液，通过稀释配制成0.10 mg/mL、0.20 mg/mL、0.30 mg/mL、0.40 mg/mL和0.50 mg/mL的标准溶液，绘制标准工作曲线。

1.3.3 供试品检测

84种抑菌液产品，市售普通品牌。精确称取5 mg（精确至0.1 mg）的抑菌液于10 mL容量瓶中，以四氢呋喃溶解、定容后于清洗器中超声10～20 min，按照1.3.1项下的方法检测。

2 结果与分析

2.1 检测波长的选择

使用紫外分光光度计检测三氯生标准品的最大吸收波长为281 nm，因此液相检测波长确定为281 nm。

2.2 样品溶剂的选择

用不同的溶剂溶解抑菌液，观察发现，油性抑菌液在甲醇、乙醇、乙腈等溶剂中不能全溶，出现明显分层；在乙酸乙酯和四氢呋喃中可以全溶。考虑到液相色谱柱的损耗问题，四氢呋喃作溶剂较佳。

2.3 流动相的选择

检测发现，在其他条件相同的情况下，乙腈和水的体积比=3∶1时，出峰时间和分离度较佳，而乙腈和水的体积比=2∶1时主峰的分离度较差，因此流动相确定为75%的乙腈水溶液。

2.4 标准曲线的绘制与检出限

在检测条件下，三氯生的液相检测标准色谱图如图1所示，主峰的出峰时间在6.5 min。以浓度（mg/mL）为横坐标，峰面积（×106）为纵坐标作图，得出三氯生的回归方程式为Y=10.05X+0.033，r2=0.999 7，通过计算可得出浓度（以百分含量计）与峰面积的回归方程式为Y=9.95×10-11X-3.70×10-6，见图2。按照S/N=3计算，该检测方法的检出限为0.20 μg/L。

图1 抑菌产品中三氯生标准色谱图

图2 三氯生标准曲线

2.5 回收率

准确称取0.5 g抑菌液（油性）样本3份，分别加入三氯生含量为100.1 mg/L、250.1 mg/L和480.5 mg/L的标准液，每个样品重复检测6次，检测结果见表1。

表1 抑菌液（油性）中三氯生的加标回收率

2.6 样品测定

本实验选择的抑菌产品包括抑菌洗涤液、抑菌凝露、抑菌护理液、抑菌泡沫剂、抑菌液（油性）、抑菌喷剂和抑菌凝胶，共计84个样品，按照上述方法测定其中的三氯生含量，见表2。结果发现，抑菌洗涤液中没有检测出三氯生，抑菌液（油性）和抑菌凝胶中的三氯生检出率超过15%，分别为21.4%和16.7%；所有样品中的三氯生含量低于0.3%。