骨肉瘤干细胞生物标志物CD117和Stro-1的表达及其临床意义

谢 静 曹倩倩 赵 丹 黄宗强

骨肉瘤为临床多发的非造血型原发性恶性骨肿瘤，多在青少年群体内发病，持续发展会致残，甚至会致死[1-2]。骨肉瘤治疗难度相对较大，化疗的高耐药性与高转移性一直是临床治疗的两大难点，且该病发生率逐年上升，给患者身心健康造成众多负面影响[3-4]。因此，对骨肉瘤进行及时诊断，对指导临床施行个体化的治疗，促使患者获得良好预后意义重大。相关研究提示，表达CD117与Stro-1的骨肉瘤细胞亚群，存在高水平的耐药性、高转移性，因而两者已被临床当成骨肉瘤干细胞表层的标志物，目前多用于骨肉瘤的基础研究[5]。然而关于CD117与Stro-1在骨肉瘤组织中的表达情况的研究报道较为少见，基于此，本研究探究骨肉瘤干细胞生物标志物CD117与Stro-1的表达及其临床意义，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2019年5月至2021年5月本院手术切除并经病理检查确诊的58例骨肉瘤患者，将手术切除标本作为骨肉瘤组，另取其中13例患者的瘤旁正常骨组织标本作为骨组织组。纳入标准：手术过后未发现肿瘤残留；患者病历资料齐全；患者自愿签署知情同意书；患者依从性较高。排除标准：合并其他恶性肿瘤者；存在免疫系统病症者；存有凝血功能异常者；存在酒精、药物依赖史者；合并严重的脑器质性疾病者；存在精神疾患者；意识障碍，无法进行正常沟通者。全部患者中男性31例，女性27例；年龄23～49岁，平均年龄(31.57±2.68)岁；病程2～15个月，平均病程(9.63±1.58)个月；TNM分期：17例Ⅰ期，41例Ⅱ～Ⅲ期；肿瘤组织学类型：9例低级别骨肉瘤，49例高级别骨肉瘤；28例有转移，30例无转移；体质量指数18～26 kg/m2，平均体质量指数(24.75±0.83)kg/m2。

1.2 方法

组织芯片制备：于手术时留存骨组织标本，存活之后立即以4%多聚甲醛溶液施以24 h的固定，对骨块施以充分完备的脱钙；把获取组织分成5 mm×15 mm×15 mm的组织块，脱水过后进行石蜡包埋，然后制备成4 μm厚切片染色；由病理医师依据染色的情况区分骨肉瘤组织和正常骨组织；取58例骨肉瘤和13例癌旁骨组织标本的石蜡片，各样本取一直径2 mm、厚度为3～4 mm的组织芯，共71个组织芯，另外设置1个定位芯；采用组织阵列仪将骨肉瘤、癌旁骨组织的71个组织芯依据病理号由小至大排列；在51 ℃下放置8 h过后施以降温处理，处理完毕过后施行阵列切片，芯片厚度4 μm，染色，显微镜下观察。两者表达检测：取组织芯片，经60 ℃施以2 h烘烤，以免疫组织化学法测定CD117、Stro-1水平；将烘烤后的芯片脱蜡至水化；流水洗刷之后，以3%过氧化氢(H2O2)灭活内源性酶，再一次的运用流水清洗，热抗原修复；PBS洗涤1～2次；滴加含5%牛血清蛋白得到封闭液，20 min封闭，吸去封闭液，滴加CD117、Stro-1抗体，4 ℃过夜；第二天37 ℃复温45 min过后，以PBS冲洗3次；滴加二抗，在室温条件下放置30 min；PBS冲洗3次；滴加SABC，37 ℃反应20 min；PBS冲洗4次；苏木精复染后，脱水、封片，显微镜下观察；依照染色强度与阳性细胞占总细胞数的比率综合评价；染色强度：无色：0分；淡黄色：1分；棕黄色：2分；棕褐色：3分。阳性细胞所占比例：无阳性细胞：0分；有阳性细胞但≤10%：1分；阳性细胞>10%～50%：2分；>50%～75%：3分；>75%：4分；染色强度与阳性细胞所占比例分数相乘为最终评分；0～1分为阴性，≥2分为阳性，检测结果由2名高年资病理科医师共同讨论所得。

1.3 观察指标

(1)骨肉瘤组与骨组织组中骨肉瘤干细胞生物标志物CD117与Stro-1的表达。(2)CD117与Stro-1表达与骨肉瘤患者临床病理因素的关系。

1.4 统计学分析

2 结果

2.1 骨肉瘤组与骨组织组中骨肉瘤干细胞生物标志物CD117与Stro-1的表达对比

CD117与Stro-1在骨肉瘤组的阳性表达率高于骨组织组，有统计学差异(P<0.05)。见表1。

表1 骨肉瘤组与骨组织组中骨肉瘤干细胞生物标志物CD117与Stro-1的表达对比(例，%)

2.2 CD117与Stro-1表达与骨肉瘤患者临床病理因素的关系

在不同年龄、不同性别、不同肿瘤直径中CD117、Stro-1表达水平比较，无统计学差异(P>0.05)；在不同组织学类型、是否发生肿瘤转移、TNM各分期中CD117、Stro-1表达水平比较，有统计学差异(P<0.05)。见表2。

表2 CD117与Stro-1表达与骨肉瘤患者临床病理因素的关系(例，%)

3 讨论

骨肉瘤患病率较高，会引起骨骼、关节疼痛与局部肿块病理学症状[6-7]。骨肉瘤的发病机制较为复杂，临床尚未明晰该病的发病机制，通常认为与病毒感染、化学物质等联系紧密[8-9]。因骨肉瘤干细胞存在较高耐药性、高转移性等特征，其被临床认为是导致骨肉瘤患者产生化疗耐药、肿瘤复发与发生远处转移的关键因素[10-11]。因此，对骨肉瘤干细胞的生物标志物尽早检测，对于临床及时明确患者病情、制定个体化的治疗措施、改善其预后意义重大。

CD117在不同个体的组织、器官内均呈现出异常表达，其配体为肥大细胞生长因子[12-13]。该配体通过与CD117相互结合，再经Gαi-Gab1信号复合物介导，对下游关键信号通道予以激活，继而加快骨肉瘤细胞的存活与增殖。CD117在多种恶性肿瘤中均呈现异常表达，与多种肿瘤的发生与发展联系密切[14]。Stro-1是以CD34+的骨髓细胞为抗原生成的单克隆抗体，现已在鉴别、分离间充质干细胞内大范围使用[15]。两项指标在多种恶性肿瘤疾病中均呈异常表达，但在骨肉瘤中的报道较为少见，临床还需进一步观察。本研究结果显示，CD117与Stro-1在骨肉瘤组的阳性表达率[72.41%(42/58)、68.97%(40/58)]高于骨组织组[30.77%(4/13)、30.77%(4/13)]，提示在骨肉瘤组织中，CD117与Stro-1阳性表达率较高。临床可通过对CD117与Stro-1进行检测，及时判断骨肉瘤患者病情，并施以针对性的治疗。本研究结果还显示，CD117、Stro-1表达在不同组织学类型、是否发生肿瘤转移、TNM不同分期中均有统计学差异，在高级别骨肉瘤、肿瘤转移与TNMⅡ～Ⅲ期中均表现出较高的阳性率。其原因在于骨肉瘤级别越高，发生肿瘤转移与分期越高的患者，其病情越重，癌细胞侵袭能力更强，会侵入机体更深处，因此，CD117与Stro-1的阳性表达率均处于较高水平。但值得注意的是，本研究纳入样本量较少，可能会影响试验结果的精准性。因此，后续临床还需不断地完善试验设计，继续扩大样本量的纳入，以进行更深层次的研究，进一步证实骨肉瘤干细胞生物标志物CD117与Stro-1的表达及其临床意义。

综上所述，CD117与Stro-1在骨肉瘤组织中呈现出过高的阳性表达，且与组织学类型、肿瘤转移、TNM分期密切相关，临床需予以高度关注。