CD44和miR-98-5p在肺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系

周敬奎 杨艳兵 刘 亚

根据2018年WHO统计数据显示，全球新发肺癌病例超过200万人，因肺癌导致的死亡人数超过170万[1]，而在我国肺癌的发病率位列所有恶性肿瘤第一位，且近年来患病人数呈现上升和年轻化的趋势[2]。因其预后差等原因导致其病死率高，患者 5年内的生存率极低，仅为 7%～14%[3]。早期肺癌由于发病隐匿，影像学诊断肺癌有一定的难度，造成患者错过最佳手术时间而导致治疗延误[4]。因此寻找新的治疗靶点来延长肺癌患者的总生存期至关重要。CD44作为常见的肿瘤干细胞标志物，参与多种肿瘤侵袭、转移过程[5]。miRNA(microRNA)是一类由内源性基因编码的非编码单链 RNAs，长度约为 22 个核苷酸，主要在翻译水平调控基因的表达[6]。多种miRNA 与肿瘤进展有关，在肿瘤中发挥类似抑癌基因或癌基因的作用[7]。miR-98-5p与多种类型的癌症，包括肺癌，结肠直肠癌和乳腺癌关系密切[8]。有研究报道miR-98-5p参与抑制增殖，迁移和侵袭非小细胞肺癌[9]，但相关机制尚不明确。本研究采用免疫组织化学法检测CD44在肺癌及癌旁组织中的表达，应用RT-PCR技术检测miR-98-5p表达水平，探讨CD44和miR-98-5p在肺癌组织的表达及其与患者临床病理及预后的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2016年1月至2018年1月本院收治肺癌患者69例作为研究对象，诊断依据《CSCO原发性肺癌诊疗指南(2016)》[10]，依据国际抗癌联合会(UICC)第七版肺癌TNM分期标准对肿瘤进行分期[11]。纳入标准：①患者经细胞学检查、病理检查确诊为肺癌；②患者均为初诊，未经过放、化疗，靶向治疗及生物免疫治疗。排除标准：①合并其他恶性肿瘤患者；②合并肺部其他疾病；③临床资料不全患者。研究组中男性45例，女性24例，年龄32～74岁，平均年龄(65.97±9.43)岁。研究对象及家属均签署研究知情同意书，本研究经医院医学伦理委员会审核通过。

1.2 免疫组织化学法检测组织中CD44表达情况

应用SP免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术公司)检测肿瘤组织及癌旁组织中CD44表达情况，MAC30定位于细胞质中，染色后呈棕黄色颗粒。染色结果判断标准：按阳性细胞占比计分，<5%记0分、5%～25%记1分、26%～50%记2分、51%～75%记3分、>75%记4分。按着色程度计分，无染色记0分、浅黄色记1分、棕黄色记2分、深棕色记3分。以两者得分相乘为最终结果，>6分为高表达，≤6分为低表达。

1.3 RT-PCR技术检测miR-98-5p表达水平

取肿瘤组织及癌旁组织样本，使用TRIzol RNA试剂盒(购自赛默飞世尔科技有限公司)提取总RNA，紫外分光光度计(上海美谱达公司)检测总RNA 浓度及纯度。取2 μg总RNA使用反转录试剂盒(赛默飞世尔科技有限公司)进行反转录反应。取反转录产物进行PCR扩增，用2-ΔΔCt法计算各组基因的相对表达量。

1.4 随访

采用门诊、微信、邮件等方式对患者进行随访，间隔3个月，以患者死亡或截止2021年5月终止随访，记录肺癌患者总生存率和中位生存时间。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 CD44和miR-98-5p在肺癌组织及癌旁组织中的表达情况

结果显示：CD44在肺癌组织中表达水平明显高于癌旁组织，差异具有统计学意义(P<0.05)，miR-98-5p在肺癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织，差异具有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 CD44和miR-98-5p在组织中的表达情况比较

2.2 CD44和miR-98-5p表达与肺癌组织临床病理特征的关系

结果显示：CD44表达与患者年龄、性别、TNM分期及肿瘤分化程度无关(P>0.05)，而与有无淋巴结转移相关(P<0.05)，miR-98-5p表达与患者年龄、性别无关(P>0.05)，而与TNM分期、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移相关(P<0.05)，见表2。

表2 CD44和miR-98-5p水平与患者临床病理资料的关系/例

2.3 CD44和miR-98-5p水平与患者预后的关系

69例NSCLC患者死亡20例、存活45例、失访2例，存活率65.22%，死亡患者均死于肿瘤复发或相关并发症。采用Kaplan-Meier生存曲线分析CD44和miR-98-5p水平与患者预后的关系，结果表明CD44阳性表达的肺癌患者生存率明显低于阴性表达患者，差异具有统计学意义(P<0.05)，组织中miR-98-5p高表达的肺癌患者生存率明显高于低表达患者，差异具有统计学意义(P<0.05)，见图1。

图1 CD44和miR-98-5p表达水平与患者生存率的关系

3 讨论

正常情况下，细胞自我更新调控受到严格的程序性控制，一旦发生恶性转化后，将破坏细胞自我更新调控机制平衡，另外，由于肿瘤干细胞具有自我更新、促使肿瘤形成以及维持肿瘤存在的特点，使得肿瘤产生异质性，最终使得以手术为主的综合治疗预后欠佳[12-13]。因此，学者们认为针对肿瘤干细胞进行治疗可能为肿瘤治疗开辟新的途径。既往报道表明，肿瘤干细胞标志物CD44可能对肺癌生物学特征以及患者预后有着重要影响[14]。CD44可促进细胞与细胞和细胞-基质间的相互作用，并参与细胞粘附和生长因子在细胞表面组装[15]。有研究发现，CD44在NSCLC组织中过量表达，且其阳性表达率越高，肿瘤细胞分化程度越低，提示CD44异常表达与NSCLC发病有关[16]。本研究发现在 CD44在肺癌组织中表达水平明显高于癌旁组织，且CD44表达水平与患者有无淋巴结转移相关，提示 CD44在肺癌中发挥促瘤作用，其高表达可能与肿瘤疾病的进展和转移相关。本研究还发现组织中CD44阳性表达的肺癌患者生存率明显低于阴性表达患者，提示CD44能够作为NSCLC患者预后的相关评价指标。

miRNA 是由基因组编码的小分子 RNA，具有组织特异性、保守性和时序性，在不同的生理和病理进程中的miRNA 作用广泛，这可能与 miRNA 调控多个靶基因有关，miRNA 能通过靶基因结合而发挥调控功能[17-18]。目前研究表示，某些 miRNA 异常突变或过表达可能与肿瘤的进展有关，有约 50% 的 miRNA 基因定位在与肿瘤关系密切的脆性位点或染色体座位上，其通过直接或者间接作用影响肿瘤的进展[19-20]。miRNA通过作用于基因转录后调节基因的表达，从而调节癌症的发展[21]。近年来的研究表示，众多miRNA 在肺癌表现异常[22-23]。miR-98-5p 作为miRNA家族的一员，其可靶向结合α-1，3-甘露糖转移酶进而抑制 NSCLC 进展[24]；另外，miR-98-5p在肺癌中表达降低，其可能通过影响信号转导过程进而在NSCLC的发生、发展中发挥作用[25]。有研究证实，miR-98-5p 可能作为抑癌因子，在肺癌病变过程中发挥抑癌作用[26]。本研究中miR-98-5p在肺癌组织中相对表达量明显低于癌旁组织，miR-98-5p相对表达量与患者TNM分期、肿瘤分化程度及有无淋巴结转移相关，提示 miR-98-5p在肺癌中发挥抑瘤作用，可能与肿瘤疾病的进展和转移相关。组织中miR-98-5p高表达的肺癌患者生存率明显高于低表达患者，提示miR-98-5p能够作为肺癌患者预后的相关评价指标。

综上所述CD44和miR-98-5p表达水平不仅与肺癌的发病、临床病理相关，还与患者预后相关，可能作为患者预后的相关指标发挥作用，为相关临床研究提供新的思路。但本研究样本量较少，且只对蛋白表达水平进行研究，导致结果可能存在一定的局限性，需要在后续的研究中心加以改进和完善。