结核分枝杆菌扫描系统在结核病诊断中的应用价值

张思琪 李静 仵倩红

结核病作为一种具有极高传染性的疾病，早发现、早诊断和早治疗是减少传播、控制疫情的关键[1]。结核病初期诊断依赖于痰涂片镜检是否观察到抗酸杆菌，即采用萋-尼染色法进行抗酸染色，通过人工镜检，在100倍的油镜下观察50～300个视野[2]，通过是否观察到抗酸杆菌做出最终诊断。痰涂片显微镜检查是基层结核病诊疗机构诊断肺结核最常用的实验室检查方法，具有操作简单、方便的特点，在结核病控制工作中对于发现传染源、疾病诊断、疗效评价等具有重要意义，但也存在不足和局限[3-5]，如在操作过程中人工镜检耗时长且漏检率高，阳性检出率低，不能为临床提供很好的参考价值。然而，结核分枝杆菌扫描系统适用于各类医疗单位微生物室、结核实验室，对萋尼抗酸染色样本进行全自动扫描读取、智能识别与分析，可以在很大程度上弥补人工镜检的不足，能够准确地筛选出多数阴性痰涂片，提高阳性检出率。为研究结核分枝杆菌扫描系统的诊断效能，笔者收集了陕西省结核病防治院结核病患者的痰标本，通过对结核分枝杆菌扫描系统与人工镜检进行对比，评估结核分枝杆菌扫描系统在结核病诊断中的应用价值。

资料和方法

一、标本收集

收集2021年12月1—31日陕西省结核病防治院收治的1717例疑似结核病住院患者的痰标本。请患者留取晨痰，置于无菌带螺旋盖样本瓶中，样本量不能少于5 ml，否则视为不合格标本，需重新留取。

二、仪器与试剂

本研究使用的仪器包括结核分枝杆菌扫描系统、温箱、高压蒸汽灭菌器、冰箱、振荡器、光学显微镜；试剂采用自配的萋-尼抗酸染色试剂。

三、研究方法

1.离心沉淀集菌涂片法：首先将留取好的痰液标本通过高压蒸汽(1.0 kg/cm2，121 ℃，15～20 min)液化处理，取出放冷后，取5～10 ml盛于容积为50 ml的离心管中，加灭菌蒸馏水20～30 ml，于振荡器上振荡5～10 min，以离心半径40 cm，3000 r/min离心15～30 min，使结核分枝杆菌集中于试管底部，用其沉渣按照直接涂片镜检法进行涂片、染色和镜检[6]。

2.痰培养法：严格按照文献[6]操作。取2 ml痰标本经N-乙酰-L-半胱胺酸-氢氧化钠法(NALC-NaOH，终浓度为1.5%)消化去污处理后，室温静置15 min，用磷酸盐缓冲液中和(pH值为6.8)后再以3000×g离心15 min，弃上清，以2 ml磷酸盐缓冲液重悬沉淀物，取0.5 ml重悬液接种至BACTEC MGIT 960(简称“MGIT 960”)培养管中，加入0.8 ml 营养添加剂(OADC)和杂菌抑制剂(PANTA)的混合液，严格按照说明书进行操作。将接种好的MGIT 960培养管放入MGIT 960系统中孵育，仪器对分枝杆菌的生长进行自动监测。仪器报阳后采用结核分枝杆菌抗原检测试剂盒(MPB64)进行鉴定，判断是结核分枝杆菌还是非结核分枝杆菌[6]。

3.结核分枝杆菌扫描系统：采用宁波舜宇仪器有限公司生产的FS200结核分枝杆菌扫描系统。

4.阅片方法：将涂片放入扫描仪中进行检阅，统计阳性结果与阴性结果。然后在不得知结果的情况下由2名具有痰检质控资质的检验师进行镜下阅片，统计阳性和阴性结果。

四、质量控制

本课题人员均接受过专业培训，掌握课题的实施方案。研究的标本进行了严格的临床调查，实施过程中严格按照实施方案标准进行患者纳入、表格登记、实验操作、结果判断等。每天做好仪器维修保养登记，在实验过程中严格做好质量控制。

五、统计学处理

采用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析。以痰培养及检测到结核分枝杆菌作为标准，采用χ2检验比较结核分枝杆菌扫描系统与人工镜检的阳性检出率，以P<0.05为差异有统计学意义。

结 果

1717例疑似结核病患者中，以痰培养及检测到结核分枝杆菌作为标准，检测出244例阳性患者。结核分枝杆菌扫描系统与人工镜检的阳性检出率分别为94.67%(231/244)和59.02%(144/244)，差异有统计学意义(χ2=87.166，P=0.001)。

讨 论

目前，结核病的诊断主要通过临床表现、细菌学检验、影像学检查、免疫学检查、支气管镜检查和活体组织检查等[3]。涂片法属于细菌学检验方法，为目前结核病临床诊断首要检测方法，是初步筛查结核病的重要检测手段。痰涂片显微镜检查在结核病控制工作中对于发现传染源、疾病诊断、疗效评价等具有重要意义，萋-尼染色涂片镜检是我国结核病控制工作中最主要的实验室诊断方法，其特异度高，成本低，是国家结核病控制规划中发现患者效率较高的方法[7]。因此，本研究旨在通过比较结核分枝杆菌扫描系统与人工镜检的诊断效能，找出能够提高阳性检出率的方法，进而辅助结核病的临床诊断。

涂片法是诊断结核病最直接、简单、快速的方法，是初期筛查结核病的重要检测方法，更加适用于基层医疗机构和结核病专科医院。陕西省结核病防治院为结核病专科医院，每日需检测的标本量非常多，然而阳性检出率低，分析原因发现，由于标本量较大，需要的检验人员较多，一名镜检人员镜下检查300个视野至少需要5 min，且连续阅读10～12张玻片后应休息约20 min[7]。因此，需要大量工作人员完成此项工作，并且在镜检过程中检验人员视觉疲劳会导致漏检和错检，假阴性和假阳性结果也会随之增多，影响临床的判断。在引进结核分枝杆菌扫描系统后，可以节省对检验人员的需求，提高检验效率，节省检验时间，检验者仅需要将结核分枝杆菌扫描系统疑似或确定的阳性涂片进行人工镜检，并挑选10%的阴性片进行人工复检，从而提高集菌涂片的阳性率，为临床诊断结核病提供参考价值。

在使用结核分枝杆菌扫描系统的过程中发现，其仍存在假阴性的可能，分析原因发现可能是因为菌量较少(1～5条)，结核分枝杆菌扫描系统的扫描范围是由技术人员设定区域，当痰涂片的载菌量较低时，在扫描仪能够扫描的范围内(300视野)有可能无法被发现，发生漏检。当技术人员将扫描范围扩大至500视野甚至更高的视野后，会降低假阴性的概率。而仪器出现假阳性的原因在于染色过程中，盐酸酒精脱色这一步骤很难把握，从而有可能导致脱色不干净，有残渣存在，在阅片过程中，把残渣误认为是结核分枝杆菌从而报阳；在人工镜检复查过程中被筛选出来。所以在后期要特别重视染色部分，对涂片染色部分进行严格把关，从而减少假阳性的概率。

结核分枝杆菌扫描系统用于检测集菌涂片更加方便、快捷、有效，其阳性检出率高于人工镜检。随着结核分枝杆菌扫描系统的逐渐成熟，目前国内多家结核病定点医院已投放使用，其快速、准确、高效的检测结果，可为进一步诊治提供帮助。

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