安徽淮南地区160例幽门螺杆菌培养结果分析及药敏试验指导临床治疗的效果研究

房小妹，杨选峰，方大楼，洪 亮，王丽莉，李方林

消化性溃疡是指胃肠道黏膜被胃酸或胃蛋白酶自身消化而引起的溃疡，发病时常伴有多种致病因子的共同参与[1]。患者发病后胃黏膜常发生炎性反应、坏死及脱落，随着病情的不断发展，病变能达到黏膜肌层或更深层次[2]。周晴接等[3]一项调查结果表明：消化性溃疡属于一种难治性消化系统疾病，年发病率为0.1%～0.3%，且男性发病率略高于女性。幽门螺杆菌（Helicobacter pylori, HP）为革兰染色阴性、无芽孢呈螺旋状弯曲的杆菌，最早由国外学者从胃炎患者的胃黏膜组织中成功分离[4]。目前，临床上已经证实，HP感染是人类常见的慢性感染性疾病，且与慢性胃炎、消化性溃疡及胃癌等有关，且WHO已经将HP列为I类致癌因子[5]。近年来，随着临床抗菌药物的广泛使用，导致耐药HP检出率呈上升趋势，不仅影响患者预后，亦可增加临床治疗难度[6]。因此，本研究以2018年7月—2021年12月淮南东方医院集团总医院收治的160例消化性溃疡患者为研究对象，探讨安徽淮南地区HP培养及耐药状况，为临床诊治由HP感染引起的消化性溃疡等疾病提供实验室依据。现报道如下。

1 对象与方法

1.1 对象 选择2018年7月—2021年12月淮南东方医院集团总医院收治的160例消化性溃疡患者作为研究对象，其中男89例，女71例，年龄范围为（41～74）岁，平均年龄为（60.19±5.43）岁。体质量指数（body mass index, BMI）为（18～29）kg/m2，平均BMI为（22.55±3.26）kg/m2。消化性溃疡病程1～52个月，平均病程为（25.61±2.49）个月。160例患者中，合并高血压12例、糖尿病8例、高脂血症11例。本研究获得淮南东方医院总院医学伦理委员会批准（批准号：202010032），且患者均签署知情同意书。

1.2 纳入、排除标准 纳入标准：①所有患者均符合《消化性溃疡防治指南》[7]中消化性溃疡诊断标准，并经胃镜检查确诊；②胃镜下完成病灶组织的采集，并对HP进行培养；③14C呼气试验结果为阳性，具有明显的消化道不适症状。排除标准：①近1个月服用抗菌药物、益生菌等影响HP检测结果者；②病灶部位存在出血、穿孔或严重肝肾功能异常者；③精神异常、器质性疾病者。

1.3 方法

1.3.1 HP培养及药物敏感性试验方法 ①HP培养。由本院副主任职称以上医生完成标本采集，借助胃镜放大作用，利用无菌活检钳采集不同病变部位2～3块病灶组织（距离幽门3～5 cm），将采集的标本置于已复温的培养液（35 ℃～37 ℃）中，然后再放入培养箱（35 ℃～37 ℃恒温）中连续完成48～96 h培养，观察培养液的颜色及混浊度变化。尿素酶试验呈阳性，培养液由无色变为红色并伴有浑浊时为阳性培养物，反之为阴性[8]。②药物敏感性（药敏）试验。试剂盒常规复温后，向HP阴性对照管中加入药敏培养液（不含有任何组织）100 μl；向HP阳性对照管中加入阳性培养物100 μl，并观察颜色变化及浑浊度变化情况；向过氧化氢对照管中加入阳性培养物50 μl，操作完毕后加CAT反应液（3%过氧化氢）50 μl，并观察气泡产生情况；向药敏培养管中加入阳性培养物100 μl和药敏培养液1500 μl，充分混合后接种于微孔板（100 μl/孔）上，并在35 ℃～37 ℃培养箱中恒温培养，观察判断各孔的结果[9]。③质量控制。选择市售HP标准菌株（ATCC43504）作为阳性质控菌株，变异链球菌（ATCC700294）、表皮葡萄球菌（ATCC12228）作为阴性质控菌株。质控菌株转种次数≤6次，孵育时间不宜超过对数生长期[10]。

1.3.2 治疗方法 对于HP培养阳性患者按照随机数字表法分为对照组和观察组。根据《第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告》[11]推荐，按照患者临床表现、体征等给予对症支持治疗。对照组采用常规/经验四联疗法方案，即阿莫西林胶囊（广东奇灵制药有限公司，批号：国药准字H44021006，规格250 mg）1000 mg，2次/d，餐后30 min服用；克拉霉素（浙江京新药业股份有限公司，批号：国药准字H20065652，规格250 mg）500 mg，2次/d，餐后30 min服用；奥美拉唑（济南明鑫制药股份有限公司，批号：国药准字H20084393，规格20 mg）20 mg，2次/d，餐前30 min服用；枸橼酸铋钾胶囊（四川华新制药有限公司，批号：国药准字H19983200，规格300 mg）600 mg，2次/d，餐前30 min服用；观察组在对照组基础上根据药敏试验选择耐药率较低的甲硝唑和呋喃唑酮代替常规/经验性用药（阿莫西林和克拉霉素），组成新四联疗法，即甲硝唑片（长春大政药业科技有限公司，批号：国药准字H22022369，规格200 mg）400 mg，3次/d，餐后30 min服用；呋喃唑酮片（芜湖康奇制药有限公司，批号：国药准字H34021792，规格100 mg）100 mg，2次/d，餐后30 min服用；奥美拉唑和枸橼酸铋钾胶囊试剂盒购买公司及用法用量同对照组。2组均完成2周治疗，并完成12个月门诊随访。

1.4 观察指标 ①血清学水平。采用化学发光法测定2组治疗前、治疗2周后患者血清胃泌素-17（gastrin-17, G-17）、胃蛋白酶原I（pepsinogen I,PGI）及胃蛋白酶原II（pepsinogen II, PGII）水平[12-13]。②HP根除率（复查时HP根除者的例数/所有接受治疗者例数的比率）。2组患者疗程完毕后于4、8、12个月完成门诊随访并检测HP，统计不同时间点HP根除率。③记录对照组和观察组用药期间便秘、腹泻、血压波动及肝肾功能异常等不良反应发生情况。

1.5 统计学处理 采用SPSS 24.0软件处理数据，计数资料采用例（%）表示，2组间比较行四格表χ2检验。计量资料呈正态分布，采用±s表示，2组间比较行成组t检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 2组临床资料比较 160例患者完成HP培养，其中56例患者培养阳性，阳性率为35.00%。其中对照组28例，男17例，女11例，年龄范围为（42～73）岁，平均年龄为（60.12±5.38）岁；BMI为（19 ～ 28）kg/m2，平均BMI为（22.18±3.32）kg/m2；消化溃疡病程1～51个月，平均病程为（25.94±2.53）个月；合并症：高血压5例，糖尿病3例，高脂血症4例。观察组28例，男15例，女13例，年龄范围为（43～74）岁，平均年龄为（60.69±5.42）岁；BMI为（18～ 29）kg/m2， 平 均 BMI为（22.32±3.41）kg/m2；消化性溃疡病程1～50个月，平均病程为（26.17±2.58）个月；合并症：高血压4例，糖尿病2例，高脂血症4例。2组临床资料比较差异均无统计学意义（P均＞0.05），具有可比性，见表1。

表1 2组临床资料比较Table 1 Comparison of clinical data between the 2 groups

2.2 HP药敏试验结果 HP培养阳性菌株药敏试验结果表明：耐药率排在前2位的抗菌药物分别为左氧氟沙星和四环素，耐药率分别为96.43%和92.86%，见表2。

表2 HP药敏试验结果Table 2 Results of HP drug susceptibility test

2.3 2组G-17、PGI及PGII水平比较 2组治疗前血清G-17、PGI及PGII水平比较差异均无统计意义（P均＞0.05）。2组治疗2周后血清G-17、PGI及PGII水平均低于治疗前，观察组治疗2周后血清G-17、PGI及PGII水平下降幅度均高于对照组（P均＜0.05），见表3～5。

表3 2组血清G-17水平比较（pmol/L，±s）Table 3 Comparison of serum G-17 levels between the 2 groups (pmol/L, ±s)

表3 2组血清G-17水平比较（pmol/L，±s）Table 3 Comparison of serum G-17 levels between the 2 groups (pmol/L, ±s)

注：自身配对t检验，观察组t=6.567，P=0.000；对照组t=3.294，P=0.002

组别 n 治疗前 治疗2周后 差值d观察组 28 22.12±4.35 11.21±2.13 10.91±2.15对照组 28 22.14±4.34 18.78±3.21 3.36±0.79 t值 0.017 17.442 P值 0.986 0.000

表4 2组血清PGI水平比较 (μg/L, ±s)Table 4 Comparison of serum PGI levels between the 2 groups (μg/L, ±s)

表4 2组血清PGI水平比较 (μg/L, ±s)Table 4 Comparison of serum PGI levels between the 2 groups (μg/L, ±s)

注：自身配对t检验，观察组t=12.525，P=0.000；对照组t=20.511，P=0.000

组别 n 治疗前 治疗2周后 差值d观察组 28 325.39±25.58 142.31±12.14 183.08±18.49对照组 28 326.11±26.32 197.48±20.21 128.63±22.35 t值 0.104 9.933 P值 0.918 0.000

表5 2组血清PGII水平比较（μg/L, ±s）Table 5 Comparison of serum PGII levels between the 2 groups (μg/L, ±s)

表5 2组血清PGII水平比较（μg/L, ±s）Table 5 Comparison of serum PGII levels between the 2 groups (μg/L, ±s)

注：自身配对t检验，观察组t=8.679，P=0.000；对照组t=8.419，P=0.000

组别 n 治疗前 治疗2周后 差值d观察组 28 30.44±3.51 12.12±2.14 18.32±2.59对照组 28 30.23±3.48 23.29±2.63 6.94±1.42 t值 0.225 20.387 P值 0.823 0.000

2.4 2组HP根除率比较 2组均具有良好的治疗依从性，且随访期间均未发生失访。观察组疗程完毕后，门诊随访4、8、12个月时HP根除率分别为67.86%、78.57%、89.29%，均显著高于对照组（P均＜0.05），见表6。

表6 2组HP根除率比较[例（%）]Table 6 Comparison of HP eradication rate between the 2 groups [cases (%)]

2.5 2组不良反应发生率比较 2组用药期间，便秘、腹泻、血压波动及肝肾功能异常等总体不良发生率比较，差异无统计学意义（P＞0.05），见表7。

表7 2组不良反应发生率比较[例（%）]Table 7 Comparison of the incidence of adverse reactions between the 2 groups [cases (%)]

3 讨 论

HP是一种定植在人胃黏膜并可引起胃炎，消化性溃疡等疾病的革兰阴性弯曲杆菌，其致病因素包括：黏附素、内毒素、空泡毒素等。HP特殊的螺旋状菌体结构与端鞭毛运动方式，有助于HP穿过胃黏膜的黏液层与上皮细胞连接在一起，HP高活性的胞外尿素酶可分解尿素，产生的氨可以中和菌体周围的胃酸，有助于细菌的定植，是诱发胃炎、消化性溃疡发生和复发的重要病因[14]。随着人们对健康意识的提高及检验方法的更新，HP感染的检出率不断提高，治疗方案因不同地区、不同医生治疗经验而存在明显的差异性[15]。经验性用药治疗HP感染的消化性溃疡虽然能改善患者症状，但长期用药不良反应发生率较高，治疗缺乏针对性[16]。本研究对安徽淮南地区HP培养阳性患者进行药敏试验，并根据药敏结果给予相应的药物治疗，对提高患者治疗效果具有重要意义。

本研究中，安徽淮南地区160例患者中56例患者培养阳性，阳性率为35.00%。抗菌药物耐药率排在前2位的抗菌药物分别为左氧氟沙星和四环素，耐药率分别为96.43%（54/56）和92.86%（52/56），与国内其他地区抗菌药物的耐药率相似（其他地区左氧氟沙星和四环素，耐药率分别为93.35%和90.19%）[17]。从本研究结果看出，本研究与国内其他地区HP的抗菌药物治疗耐药率均相对较高，甲硝唑和呋喃唑酮临床治疗效果比较好[17]，缓解消化性溃疡的效果明显，而且根据本研究药敏试验结果，甲硝唑和呋喃唑酮耐药率也是相对最低的，所以观察组在对照组基础上用甲硝唑和呋喃唑酮代替对照组常规/经验性用药（阿莫西林和克拉霉素），同时排除耐药率较高的左氧氟沙星和四环素。王秋明等[18]和李超等[19]研究表明，在众多HP根除方案中，左氧氟沙星和四环素耐药率较高，可能与抗菌药物的广泛及不合理使用有关。应功武等[20]研究表明，rdxA基因及frxA基因突变是造成对左氧氟沙星和四环素耐药的主要原因，对克拉霉素的耐药机制主要表现为23S rRNA A2143G的点突变。因此，消化性溃疡患者应根据药敏实验结果合理选用抗菌药物。

本研究对照组和观察组治疗2周后G-17、PGI及PGII水平均低于治疗前，观察组治疗2周后血清G-17、PGI及PGII水平下降幅度均高于对照组，说明淮南地区HP甲硝唑和呋喃唑酮治疗HP感染卓有成效。观察组和对照组用药期间不良反应发生率比较差异无统计学意义，且观察组2周疗程后，随访4、8、12个月时HP根除率均高于对照组，说明根据药敏试验结果指导治疗HP阳性的消化性溃疡患者不仅能提高HP根除率，而且治疗安全性较高。

本研究尚存在不足之处：本研究病例数较少，标本采集采用的是胃镜下夹取胃黏膜组织，存在人为性有创操作，限制了试验的开展，且培养费用较高、培养条件严格、培养难度大，导致常规试验难以进行，普及难度较大。

综上所述，安徽淮南地区HP感染后培养阳性率较高，对左氧氟沙星、四环素等抗菌药物耐药率较高。HP培养阳性的消化性溃疡患者应根据药敏试验结果合理选择选用抗菌药物，不仅有助于改善血清学水平，提高HP根除率，而且用药安全性较高。